电针神庭、百会穴通过ARC/GluR2/NMDAR2B调节海马突触可塑性改善MCAO/R大鼠学习记忆的机制研究

目的观察电针神庭、百会穴对大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)大鼠学习记忆功能改善的作用机制。方法线栓法制备MCAO/R大鼠模型。24只雄性SD大鼠随机分为模型组(n=6)、电针组(n=6)、非穴组(n=6)和假手术组(n=6)。电针组大鼠选取百会、神庭穴,非穴组选取双侧胁下非经非穴,共电针7 d。ZeaLonga评分法对各组大鼠进行神经功能缺损评分,新物体识别评估大鼠的学习记忆能力,小动物磁共振T2WI系列扫描梗死面积,HE染色观察缺血侧海马病理形态,波谱(1HMRS)比较各组海马区N-乙酰天冬氨酸(NAA)、肌酸(Cr)和谷氨酸(Glu)代谢物含量,Western blotting检测缺血侧海马ARC/GluR2/NMDAR2B的表达情况。结果干预7 d后,与模型组及非穴组比较,电针组大鼠神经功能缺损评分显著降低(P<0.05),电针组大鼠新物体识别指数较模型及非穴组升高(P<0.05)。磁共振T2WI显示电针组的梗死面积较模型组、非穴组明显减小(P<0.05),波谱显示电针组较模型和非穴组海马区NAA/Cr比值明显增高(P<0.001),GLU/Cr降低(P<0.01)。Western blotting结果表明电针组大鼠缺血侧海马中NMDAR2B含量明显低于模型组和非穴组(P<0.01),ARC及GluR2含量高于模型及非穴组(P<0.05)。结论电针神庭、百会穴能够改善MCAO/R大鼠的神经缺损情况,提高学习记忆能力,降低缺血侧梗死面积,改善病理形态,提高神经元兴奋性,降低膜后谷氨酸累积,其机制可能与促进MCAO/R大鼠海马区ARC、GluR2,抑制NMDAR2B的表达,进而改善卒中后海马突触可塑性损伤有关。

电针百会、神庭对大脑中动脉栓塞大鼠学习记忆功能和前额叶皮层GABAA受体及PSD-95表达的影响

目的:观察电针百会、神庭对MCAO大鼠学习记忆功能及前额叶皮层γ-氨基丁酸A型(gamma-aminobutyric acid,GABAA)受体及突触后密度蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)表达的影响,探讨电针对MCAO大鼠学习记忆功能的影响及作用机制。方法:改良Longa线栓阻塞法制备左侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将造模成功的雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成模型组、电针组(百会、神庭)和电针非穴组,同时另设假手术组,每组10只。电针组和非穴组进行连续7d电针干预,假手术组和模型组不做任何处理。采用小动物磁共振成像仪检测干预前后大鼠脑梗死体积变化;Morris水迷宫评价大鼠学习记忆功能;HE染色观察缺血侧前额叶皮层病理变化;Western Blot法检测缺血侧前额叶皮层GABAA受体及PSD-95蛋白表达水平。结果:干预前各组大鼠脑梗死体积无显著性差异(P>0.05),随着干预时间延长,与模型组和非穴组相比,电针组行为学评分明显降低(P<0.05);电针组Morris水迷宫学习记忆测试逃避潜伏期缩短(P<0.05)。干预后,与模型组和非穴组相比,电针组脑梗死体积明显减小(P<0.01);电针组神经元密度和神经细胞数量明显增加;电针组前额叶皮层GABAA受体及PSD-95蛋白表达均明显上升(P<0.05),而模型组和非穴组之间无明显差异(P>0.05)。结论:电针百会、神庭能有效减轻脑缺血后神经损伤,改善学习记忆功能,可能与增加其前额叶皮层神经元数量,促进GABAA受体及PSD-95表达有关。

通督调神针法治疗卒中后失眠述论

分析通督调神针法的理论内涵,探讨其对卒中后失眠的应用机理:以心-脑-肾轴为枢机,沟通元神,达到形神合一的状态。心脑共主神明,安神应心脑皆重,督脉作为中间桥梁沟通了脏腑、经气及元神,突出督脉在调神中的重要地位。分析各医家运用通督调神针法治疗脑卒中后睡眠障碍(Post-stroke sleep disorders,PSSD)的临床案例,对不同病因引起的卒中后失眠,分别通过调营卫、畅气血、化痰瘀、疏肝郁、和胃气、安心肾,达阴阳自和、安神入眠的目的。

基于核磁共振氢谱的组学技术在中药制药过程研究中的应用与展望

中药制药过程工艺复杂,过程控制水平与产品质量直接相关。进行制药过程质量评价与质量控制研究,提高制药过程理解,对保证中药制剂的安全性与有效性具有重要的意义。随着核磁共振技术的发展,核磁共振氢谱已在中药质量评价与代谢组学研究等领域得到广泛应用。本文主要介绍了氢核磁共振组学技术应用于中药炮制、提取等制药过程研究时,在辨识过程化学标志物、研究代谢物在过程中的转化转移规律等方面的应用进展,同时展望了基于氢核磁共振技术的过程组学研究在中药制药领域的应用前景。

^(1)H-NMR定量测定黄芪注射液中亲水性成分和疏水性成分

目的建立黄芪注射液中亲水性成分和疏水性成分的^(1)H-NMR定量分析方法。方法以10%氘代水(10%D2O)和氘代甲醇(CD3OD)为氘代溶剂制备黄芪注射液亲水性成分和疏水性成分的^(1)H-NMR样品。使用Bruker Avance Ⅲ 600型核磁共振波谱仪采集^(1)H-NMR图谱,具体实验参数如下:Noesygppr1D脉冲序列;温度为298 K,数据点32 K,采集时间(AQ)为2.980 s,脉冲宽度(SW)为7211.54 Hz,弛豫延迟时间(D1)分别为15.0 s和20.0 s,频率偏移(O1)分别为2816.65 Hz和2930.31 Hz,接收器增益(RG)值为57,扫描次数(NS)32次。结果在^(1)H-NMR图谱中归属出33种成分,分别是异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、乳酸、焦谷氨酸、天冬酰胺、γ-氨基丁酸、脯氨酸、甲酸、乙酸、富马酸、苹果酸、琥珀酸、丙二酸、蔗糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、胆碱、甜菜碱、葫芦巴碱、尿苷、腺苷、胞苷、鸟苷、腺嘌呤、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-葡萄糖苷以及异黄烷苷。对其中27种化学成分(异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、乳酸、焦谷氨酸、天冬酰胺、γ-氨基丁酸、脯氨酸、甲酸、乙酸、富马酸、苹果酸、琥珀酸、丙二酸、蔗糖、果糖、葡萄糖、胆碱、甜菜碱、葫芦巴碱、尿苷、腺苷、鸟苷、腺嘌呤、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷)进行定量,可定量的成分占注射液固含量90%以上。该方法的精密度、重复性、样品稳定性和耐用性良好,各个成分线性关系良好,r 2大于0.9990,加样回收回收率为98.19%~101.40%。结论建立了一种简单、快速、可靠的^(1)H-NMR定量方法用于测定黄芪注射液中的亲水性成分和疏水性成分,为黄芪注射液的质量评价提供了新的分析手段。

同时测定复方阿胶浆中间体中17种化学成分的定量核磁方法

目的建立定量核磁方法,同时测定复方阿胶浆(Compound E’jiao Jiang,CEJ)的药材提取液中多类成分的含量,为中间体的质量评价提供可靠的分析手段。方法采用水信号预饱和脉冲序列Noesygppr1d采集样品的1H-NMR图谱。通过文献调研、数据库检索以及加标实验的方式进行核磁谱峰归属。进一步确定各化合物的定量峰,采用内标法定量。开展方法学考察,考察项包括线性、精密度、稳定性、重复性、耐用性、准确度。另基于核磁共振氢谱的信噪比确定方法的检测限和定量限,并对3批中间体样本进行分析。结果共指认22种化合物,其中17种可同时定量分析,包括缬氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、焦谷氨酸、γ-氨基丁酸5种氨基酸,乙酸根、富马酸根、丙酮酸根、琥珀酸根、甲酸根、乳酸6种小分子有机酸根,葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖4种糖类以及尿苷、胆碱。线性考察结果得出相关系数均不小于0.9995,精密度考察结果显示,RSD均小于2.7%,重复性考察RSD均小于2.5%,耐用性及稳定性考察RSD均小于2.6%,加样回收实验得出平均回收率为90.0%~105.0%、RSD小于2.2%,分析值与参考值平均相对偏差小于4.0%。对3批样品进行定量分析,17种成分的测定结果均高于定量限,且满足线性范围。3批样品可定量部分占总固体含量的质量分数分别为71.09%、84.44%、70.09%。结论各方法学考察均满足要求;研究开发的定量核磁方法检测时间短、制样方式简单,能有效提高分析效率,为CEJ的生产过程物质转移规律研究打下基础。

基于^(1)H-NMR指纹图谱分区相似度的丹参注射剂质量评价方法

目的 以丹参注射液为研究对象,建立基于^(1)H-NMR指纹图谱分区相似度的质量一致性评价方法。方法 采集81批丹参注射液的^(1)H-NMR光谱,根据代谢物信号的分布规律,将光谱分为氨基酸区、糖类区和酚酸区,分别计算各区光谱的夹角余弦与标准化欧氏距离2种相似度指标,并评价丹参注射液批次质量一致性的性能,并与基于全^(1)H-NMR谱的相似度计算结果进行对比。结果 不同批次丹参注射液间氨基酸、糖类及酚酸的组成均存在一定差异,其中氨基酸、糖类的批间差异较大;同时,欧式距离对成分的批间波动更为敏感。此外,基于全谱的相似度分析结果受糖区特征峰影响极大,对酚酸及氨基酸类成分的批间差异辨识能力较差。结论 基于^(1)H-NMR光谱分区相似度计算法可以更好地辨识不同类别成分的批间波动,较全谱相似度计算法更适用于丹参注射液的一致性评价,为进一步提升中药制剂的质量一致性提供参考。

参麦注射液中人参总皂苷的^(1)H-qNMR定量方法研究

参麦注射液是由红参和麦冬制备得到的一种复方中药注射剂,临床上广泛用于冠心病、心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病的治疗及辅助治疗。该研究以参麦注射液为例,利用人参皂苷类成分共有的^(1)H-NMR特征峰开发了基于^(1)H-qNMR技术的人参总皂苷含量测定方法。以氘代甲醇为溶剂,以对苯二甲酸二甲酯为内标,选择位于δ 8.11的峰用作内标峰,选择δ 1.68、0.79处的峰为人参总皂苷的定量峰,优化了分析参数,开发了人参总皂苷含量的^(1)H-qNMR测定方法,并进行了方法学验证。结果证明方法学指标均较好,应用该方法在0.167 6~3.091 1 mmol·L^(-1)可准确测定参麦注射液中的人参总皂苷。该研究开发的人参总皂苷定量方法操作简单、分析时间短、专属性强、不依赖随行标准曲线、取样量小,为参麦注射液的质量控制提供了可靠手段,为人参总皂苷定量方法开发提供了新思路。

基于^(1)H-NMR技术的参麦注射液指纹图谱研究

参麦注射液由中药红参和麦冬制得,在心血管疾病的治疗和辅助治疗中具有广泛的应用。氢核磁共振(^(1)H-NMR)技术具有样品预处理简单且无损,分析速度快,可以获得丰富的化学信息,可定量且无需随行标准曲线等优点,在中药、临床血样和尿样等复杂混合物的分析和研究中具有优势。为提高参麦注射液质量控制水平,该研究建立了参麦注射液的^(1)H-NMR指纹图谱,并对指纹图谱采集及数据处理方法进行了方法学考察,各考察项目均有良好结果。对参麦注射液^(1)H-NMR指纹图谱进行了信号峰指认,归属出32种化学成分,包括7种氨基酸、8种小分子有机酸、1种生物碱、4种糖、2种核苷、7种皂苷和3种其他成分。在此基础上,分别通过Pearson相关系数法和主成分分析与层次聚类分析结合的多变量分析方法,从全面化学成分的角度研究了82批参麦注射液的质量一致性,结果显示这82批参麦注射液具有较高的质量一致性。该研究表明^(1)H-NMR指纹图谱方法在中药注射剂质量控制应用中具有较大潜力。

同时测定丹红注射液中21个化学成分含量的NMR方法研究

丹红注射液是由丹参和红花制备得到的一种复方中药注射剂,临床上用于冠心病、脑血栓、心肌梗死、心绞痛等心脑血管疾病的治疗。丹红注射液化学成分复杂,目前报道的相关化学成分分析方法多为高专属性方法,其全面化学成分并未得到充分研究,可能给用药安全带来隐患。该研究基于^(1)H-qNMR技术开发了一种丹红注射液中多类成分的定量方法,以氘代水配制样品,以TSP为内标,选择合适的定量峰,优化了分析参数,并进行了方法学验证,结果证明方法学指标均较好。该方法可同时对丹红注射液中的21个化学成分进行含量测定,包括6种氨基酸、4种小分子有机酸、5种糖及其衍生物、1种核苷和5种芳香化合物,其含量总和占总固体质量分数约85%,体现出^(1)H-qNMR在中药注射液分析中的较大优势。该研究开发的丹红注射液多类成分^(1)H-qNMR方法操作简单、分析时间短、分析范围广,对丹红注射液的质量评价具有实际意义,为中药注射液质量控制方法的开发提供借鉴。