陕西省奶山羊重点养殖县区布鲁氏菌感染情况及其影响因素的横断面研究

为掌握陕西省奶山羊布鲁氏菌的感染情况及其影响因素,本研究在陕西省6个奶山羊重点养殖县区813个奶山羊养殖单元采集22.87万份血清样品,采用虎红平板凝集试验(初筛试验)和试管凝集试验(确诊试验)检测,对其中286个奶山羊养殖场(户)开展现场问卷调查,并采用单因素分析和多因素logistic回归分析,确定布鲁氏菌的感染情况及其关联因素。结果显示,6个县区奶山羊布鲁氏菌个体感染率和群体感染率分别为0.02%和2.2%;4个检出布鲁氏菌抗体阳性的县区个体感染率介于0.02%~0.8%,群体感染率介于3.1%~6.5%,陈仓区、凤翔区分别与阎良区、富平县个体感染率存在统计学差异(P<0.05),4个县区群体感染率间无统计学差异(P>0.05);规模场与散养村个体感染率和群体感染率均存在统计学差异(P<0.05)。饮用河水、母羊有流产史、断奶羔羊存活率低于85%和本场人员兼职从事羊的屠宰贩卖等相关工作,这4个因素为奶山羊感染布鲁氏菌的潜在风险因素(P<0.05);引入羊的检疫、入场车辆消毒为保护性因素(P<0.05)。多因素logistic回归方程为Logit[P(Y=1)]=-4.484+0.874X_(1)+1.829X_(2)-2.453X_(3)+4.488X_(4)-0.09X_(5)+2.1X_(6)-2.611X_(7)+2.978X_(8),可用于奶山羊感染布鲁氏菌的风险预测。本研究结果提示,陇县、千阳县应重点加强调引入羊的检疫和落地监管,定期对高风险因素和动物进行监测,其余4个县区可以采取相同的布鲁氏菌病监测与净化策略,对布鲁氏菌阳性奶山羊群开展全群检测,重点开展奶山羊散养村的布鲁氏菌病监测净化工作;奶山羊养殖场(户)应重点关注人员车辆入场、饮水等高风险因素,做好引进羊的检疫,提高饲养管理能力和生物安全管理水平,才能有效降低布鲁氏菌的感染风险。本研究采用横断面研究方法调查了陕西省奶山羊重点养殖县区布鲁氏菌的感染率及其感染因素,为陕西省布鲁氏菌病的防控提供参考依据。

动物源产气荚膜梭菌致病因子和耐药性研究进展

产气荚膜梭菌是一种重要的人兽共患病原菌,能够导致气性坏疽、食物中毒和坏死性肠炎等多种疾病,对畜牧生产和公共卫生安全具有较大威胁。近年来,由于抗生素的不合理使用,产气荚膜梭菌耐药性显著升高。本文对影响产气荚膜梭菌致病性的毒力因子,如毒素、芽胞和生物被膜,以及近5年来产气荚膜梭菌耐药性的发展趋势进行归纳总结,以期为其防控提供参考。

朱鹮源大肠埃希氏菌的耐药性及毒力基因与种系分型检测分析

为了解陕西圈养朱鹮源大肠埃希氏菌耐药性、系统进化分群、毒力基因及耐药基因携带情况,对采集自陕西省周至县32份朱鹮源肛拭子进行肠道细菌分离鉴定,采用微量肉汤稀释法测定9种抗菌药物对分离株的最小抑菌浓度(MIC),PCR检测毒力基因、耐药基因携带情况,采用三重PCR鉴定分离菌株的系统进化分群,并进行小鼠致病性试验。结果显示,在32份朱鹮源肛拭子中分离到大肠埃希氏菌15株,分离率为46.87%;分离菌株对氨苄西林100%耐药,对多西环素、恩诺沙星、头孢噻夫耐药率较高,对美罗培南、替加环素、黏菌素表现较高敏感,耐2种以上抗菌药物的菌株达100%;从分离菌株中检测到blaTEM、blaSHV、blaCTX-M等耐药基因的检出率分别为100%、93.3%、33.3%,phop、tetx3占比较高(66.67%、53.33%),未检测到cfr、tetx4耐药基因;分离菌株携带10种不同的毒力基因,未检测到hlyA、saf、cnf1、iutB、stx1、stx2、papC、FasA等8种毒力基因,其中etrA、aer、hlyE、ompA的检出率最高,均达到93.33%,其他依次为iutA(80%)、fimC(73.33%)、rfc(60%)、ompT(53.33%)、hlyF(46.67%)、Tsh(20%),且检测到9株分离菌株携带的rfc毒力基因。该批朱鹮源大肠埃希氏菌以B2型为主(占53.33%),其次为D型(占33.34%),A型仅占比13.33%,未检测到B1型;小鼠致病性试验表明,小鼠表现较轻的临床症状。结果表明,该批朱鹮源大肠埃希氏菌耐药现象较为严重,毒力基因与耐药基因在该批朱鹮中较流行,与其他动物相比,其种系分型较特殊。研究结果可为朱鹮源大肠杆菌病的防控、治疗及圈养朱鹮的放飞提供参考依据。

牛乳房炎致病性大肠埃希氏菌耐药性、毒力基因与生物被膜分析

为分析宁夏、甘肃部分地区奶牛乳房炎致病性大肠埃希氏菌(E.coli)耐药性、耐药基因、毒力基因、生物被膜及系统发育分型,对临床乳房炎奶牛乳样中分离鉴定的54株E.coli用肉汤稀释法、聚合酶链反应(PCR)和结晶紫染色法,对其进行耐药性、耐药基因、毒力基因、系统发育分型及生物被膜检测。结果表明,54株E.coli对头孢噻肟耐药率高达100%,对氨苄西林、四环素、氟苯尼考、庆大霉素、头孢吡肟、替加环素、恩诺沙星,耐药率依次为74.07%、57.40%、24.07%、18.51%、11.11%、11.11%、5.56%,对美罗培南均表现为敏感;β-内酰胺类耐药基因中blaCTX基因检出率最高94.44%,blaTEM基因检出率为33.33%;四环素类耐药基因中tetB检出率为55.56%,tetA、tetC检出率为1.85%、3.7%,耐药基因高检出率与耐药性表现一致。毒力基因检测结果显示,菌毛黏附素fasA为31.48%,α溶血素hlyA为16.67%,志贺毒素stx1为7.4%;系统发育分型结果显示A型是该地区主要的流行菌株,其携带毒力因子的占比也高于其他菌型,所有受试菌株均可形成生物被膜。表明奶牛乳房炎来源E.coli对常用抗菌药物耐药严重,携带hly与stx1毒力基因的E.coli占比高,需要引起重视。

朱鹮源大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏检测

为初步了解朱鹮肠道正常菌群的组成,并对其可能发生的疾病进行用药监测及预防,对采集自成年健康朱鹮的11份肛拭子进行了大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性检测。结果显示,从11只朱鹮肛拭子中分离到9株大肠埃希氏菌、7株肺炎克雷伯氏菌和4株A型产气荚膜梭菌,分离率分别为81.8%、63.6%和36.4%。药敏试验显示,大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌对磺胺异噁唑、青霉素、氨苄西林、四环素和多西环素等药物的耐药性较强,产气荚膜梭菌仅对磺胺类药物表现出较强耐药性。初步鉴定朱鹮的肠道正常菌群中存在大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌,并检测分析了各菌株的耐药规律,为进一步研究朱鹮肠道正常菌群结构和防控朱鹮消化道疾病提供了参考依据。

羊副结核病的致病特点及综合防控措施

羊副结核病是由副结核分枝杆菌引起的一种以顽固性腹泻、肠粘膜显著增厚为主要临床特征的慢性传染病,多呈现隐形感染,该病潜伏期长,传播迅速,呈全球性分布,对畜牧业的危害巨大。本文立足羊副结核病研究进展的实际情况,梳理总结了目前学术界对羊副结核病病原学、流行病学、致病机制、临床诊断和免疫综合防控等方面的研究讨论,为羊副结核病的诊断与防控提供了理论基础。在此基础上提出防控羊副结核病政府需制定有效政策,养殖场需加强饲养管理,形成科学有效的防控系统,为我国畜牧业的可持续健康发展提供了理论支撑。

朱鹮源大肠埃希氏菌分离鉴定及耐药性与致病性研究

为分析陕西楼观台朱鹮源大肠埃希氏菌携带情况,无菌采集朱鹮咽拭子和肛拭子进行细菌分离鉴定,成功从肛拭子中分离到一株疑似大肠埃希氏菌菌株,对分离菌株进行生化试验、16S rRNA测序鉴定、药敏试验、耐药基因鉴定、毒力基因鉴定及小鼠致病性试验。经鉴定该菌株为大肠埃希氏菌,命名为XNZH1,该菌株对氧氟沙星、安普霉素、大观霉素、四环素和氟苯尼考耐药,携带耐药基因sul2和毒力基因etrA。小鼠致病性试验结果显示,经腹腔接种的6只小鼠均在接种后18 h内死亡,且从脑组织中分离到该菌,推测该菌可穿过血脑屏障。进化树分析表明,该菌株与分离株MH532531.1同源性高达98%。试验结果表明朱鹮源大肠埃希氏菌具有高度耐药性和致病性,结果可为朱鹮大肠埃希氏菌病的防控及合理用药提供依据。

重组酶聚合酶扩增技术在动物疫病诊断中的应用研究进展

重组酶聚合酶扩增(RPA)技术是一种基于T4噬菌体复制机理为主要反应机理的核酸恒温扩增技术,广泛应用于动物疫病诊断、动物食品安全和遗传分析等领域。反应可在25~42℃温度条件下20 min完成快速扩增,具有条件温和、灵敏度高、特异性好、无需昂贵试验仪器和简便快捷等优点,适用于现场快速检测,已被应用于常见动物疫病的诊断。为让更多技术人员了解RPA技术诊断的优势,论文对RPA技术原理、引物探针设计、检测方法及在动物疫病诊断中的应用进行了分析。

奶山羊坏疽性乳房炎病例诊治

为对富平县某奶山羊场患坏疽性乳房炎病羊进行诊治,采集患羊乳汁样品进行细菌分离鉴定,并对分离菌株进行毒力基因检测、小鼠致病性试验和药敏试验。对采集自4只患羊的4份乳房炎乳汁样品进行细菌分离培养,通过染色镜检、生化鉴定和测序鉴定为金黄色葡萄球菌。分离菌株携带溶血素基因hla、hlb和杀白细胞毒素基因lukS、lukF,对小鼠具有较强致病性。纸片扩散法药敏试验结果表明,分离菌株均对头孢噻呋钠、链霉素、恩诺沙星等多种药物敏感,对氨苄西林、大观霉素等耐药。推荐使用双氧水进行乳房灌注清洗,并灌注恩诺沙星进行局部治疗,严重者再配合全身治疗,患羊预后良好。病例最终确诊该场坏疽性乳房炎为金黄色葡萄球菌感染所致,为相关疾病诊治提供参考。

纳米抗体在动物疫病防控中的应用

纳米抗体(Nb)是一种新型基因工程抗体,因其分子量小、稳定性强、亲和力高、能识别隐蔽表位、组织穿透力强、易于制备、成本低廉且便于进行改造与修饰,是疾病诊断、治疗和研究的理想分子。因此,纳米抗体受到了的各国学者的广泛关注,在癌症、脑部神经性疾病、毒素中毒性疾病、艾滋病以及其它感染性疾病和蛋白质功能、晶体结构解析等领域已有大量的相关研究报道。本文主要就Nb在动物疫病防控中的研究与应用进行了总结,探讨了其在动物疫病诊断、治疗和研究方面的发展潜力,并对未来发展方向做出了展望。

携带噁唑烷酮耐药基因optrA藏羊源产气荚膜梭菌的检测

对1株携带有噁唑烷酮类耐药基因oprA的藏羊产气荚膜梭菌QHY-2进行了形态学观察、毒素分型、全基因组测序分析和oprA基因环境分析。结果显示,QHY-2为A型产气荚膜梭菌,对磺胺异噁唑、四环素、氟苯尼考、利奈唑胺和氯霉素等药物具有较强抵抗力。除携带有cpa、pfoA、colA、cloSI、nagH等毒素基因外,还携带有tetA(P)、tet(44)、fexA、optrA、ant(6)-Ib、aac(6′)-aph(2″)、erm(A)、erm(B)和erm(Q)等9种耐药基因。QHY-2的optrA基因环境分析显示,其上、下游分别为耐药基因fexA和erm(A),并与多个参考质粒携带的optrA基因高度相似。首次在藏羊产气荚膜梭菌发现噁唑烷酮类耐药基因oprA,对动物源产气荚膜梭菌的耐药性及噁唑烷酮类药物耐药基因传播趋势评估具有参考价值。

鹅细小病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为探讨鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)在鹅胚上皮细胞(goose embryo epithelial cells,GEEC)中的增殖规律,研究采用荧光染料SYBR GreenⅠ渗入法,建立了检测GPV的荧光定量PCR方法,并用该方法分析了GPV在GEEC中的生长情况,绘制了生长曲线。结果显示,鹅细小病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法建立的标准曲线具有良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。在线性浓度范围内,随着模板量的减少,其对应的Ct值相应增大,得到的标准曲线方程为y=-3.3412x+38.494,相关系数R2为0.998。特异性试验结果显示检测新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)、禽腺病毒(Avian adenovirus,FAdV)均为阴性。敏感性试验结果显示最低检测限为100拷贝/反应,而普通PCR的最低检测限为1000拷贝/反应,熔解曲线为单一特征峰型,熔解温度为80℃±0.5℃。病毒生长曲线绘制结果显示该病毒在GEEC细胞中有较好的增殖,72 h前病毒量逐渐增高,病毒量在72 h达到峰值。研究结果为GPV的定量检测提供了一种快速有效的方法。

蛋鸡重复人工诱导换羽技术的实践性研究

为研究蛋鸡限饲法重复人工诱导换羽技术的可行性,试验选取60000只292日龄海兰褐蛋鸡采用限饲法人工诱导换羽技术进行重复换羽。通过测定2次换羽期间鸡群的产蛋率、死淘率以及蛋品质,分析重复换羽产生的经济效益。首次换羽在换羽第43天产蛋率达85%以上,产蛋高峰维持210 d。541日龄时该鸡群进行第2次换羽,换羽第40天后产蛋率达85%以上,产蛋高峰维持了94 d。该鸡群760日龄被淘汰(淘汰前产蛋率均在70%以上),均产蛋数为520枚,鸡只292日龄时均产蛋数为140枚,通过重复换羽每只鸡均产蛋数增加380枚。鸡群首次换羽前的死淘率极显著高于换羽后,第2次换羽前的死淘率显著高于换羽后。换羽后蛋品质显著升高。相比直接淘汰鸡群,通过重复换羽可以增收约4581000元。综上,重复换羽可显著降低鸡群死淘率,延长蛋鸡的产蛋年限、增加蛋鸡利用率,提高规模化养殖效益,缓解国家种禽资源受限问题。

羊源铜绿假单胞菌的分离鉴定与生物学特征分析

为探究陕西省某羊场羊呼吸道疾病的主要病原,取该羊场8只病死羊的肺脏组织依次检测支原体、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒和副流感病毒,结果均为阴性。无菌采集病死羊肺脏组织进行细菌学检测,经细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化试验与分子生物学鉴定,共分离到5株铜绿假单胞菌(分别命名为PA1~5),并对分离菌株进行小鼠致病性试验、药敏试验、生物被膜试验。结果显示,注射菌液的小鼠均在24 h内死亡,剖检发现小鼠肺脏、肝脏、脾脏出血肿大,且有大小不等、散在分布的化脓灶。药敏试验结果表明,PA1~5分离株对恩诺沙星、庆大霉素均敏感,对氨苄西林、阿莫西林、替米考星、氟苯尼考、泰乐菌素、泰万菌素、多西环素均表现耐药性。生物被膜试验表明PA1具有中等生物被膜形成能力,菌株PA2~5具有弱生物被膜形成能力。表明铜绿假单胞菌可能是造成本次羊呼吸道疾病的主要病原之一,且5株羊源铜绿假单胞菌分离株具有一定的致病性并可形成不同强弱程度的生物被膜,可交替使用恩诺沙星、庆大霉素进行治疗。研究结果可为铜绿假单胞菌引起的羊呼吸道疾病的防治提供参考。

健康鸡嗉囊和盲肠内容物正常菌群的分离与鉴定

用血琼脂平板和乳清琼脂平板，采用焦性没食子酸厌氧培养法，从健康非免疫产蛋母鸡的嗉囊和盲肠内容物中分离出正常菌群，对其中２１株兼性厌氧的无芽胞杆菌和球菌，从革兰氏染色特性、形态特性、需氧生长条件和生化反应等方面进行了初步鉴定。结果其中有类肠膜明串珠菌１株，肠膜明串珠菌１株，粪链球菌３株，屎链球菌１株，鸡肠链球菌１株，少酸链球菌３株，乳链球菌１株，假长双歧杆菌１株，星状双歧杆菌１株，嗜酸乳杆菌１株，嗜粪乳杆菌扰乱亚种１株，食果糖乳杆菌１株，棒状杆菌５株（未定种）。这些菌株的分离与鉴定为研究家禽体内正常菌群提供了参考资料。

陕西省PCV2感染的血清学调查

2004-01～2005-06，从陕西榆林、宝鸡、西安、渭南、汉中、商洛、安康等7个地区的猪场采集不同口龄猪血清样品237份，用间接ELISA方法进行猪圆环病毒2型（PCV2）感染的血清抗体检测，并用阻断ELISA方法对部分血清样品进行了猪伪狂犬病毒（PRV）gE基因蛋白的抗体检测。结果表明，未断奶仔猪PCV2血清抗体阳性率为0％（0／40），断奶仔猪为28．6％（2／7），肥育猪为43．7％（31／71）。种公猪为7．7％（1／13），后备母猪为15．6％（7／45），经产母猪为60．4％（29／48），临床上有多系统衰竭综合征（PMWS）疑似症状的13头断奶仔猪的阳性率为61．5％（8／13），237份血清的总阳性率为32．9％（78／237）；PCV2弓PRV混合感染卑为21．7％（5／23）。

鸵鸟新城疫的诊断及病原分离鉴定

陕西某鸵鸟场发生一种以呼吸困难、严重下痢、死亡率高为特征的疫病 ,经流行病学调查、病理学检查、病毒分离、治疗性诊断确诊为鸵鸟新城疫 (ND)。从发病鸵鸟分离到 1株病毒 ,经鸡胚传 3代 ,其血凝性逐渐稳定 ,致死胚均表现皮肤出血 ;经血凝试验 (HA)及血凝抑制试验 (HI)鉴定为新城疫病毒 (NDV) ,这是陕西省首次从鸵鸟分离到NDV。

新城疫与传染性法氏囊病疫苗对雏鸡联合免疫的研究

将１１４只１１日龄海赛克斯褐公鸡随机分成５组：Ⅰ组为空白对照，Ⅱ组用新城疫（ＮＤ）弱毒苗和ＮＤ油佐剂灭活苗同时免疫，Ⅲ组用传染性法氏囊病（ＩＢＤ）地方毒株油佐剂灭活苗免疫，Ⅳ组用ＮＤ弱毒苗、ＮＤ油佐剂灭活苗、ＩＢＤ地方毒株油佐剂灭活苗同时免疫，Ⅴ组在Ⅳ组的基础上增加ＩＢＤ弱毒苗免疫。５组鸡分别隔离饲养，定期测定血清ＮＤＨＩ效价与ＩＢＤ琼扩效价。选择时机用强毒攻击，观察各组鸡的保护情况。结果：（１）Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组鸡均能很好地抵抗ＮＤＶ强毒的攻击，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组鸡无论对ＩＢＤＶ人工感染，还是自然感染，均有坚强的保护力；（２）ＩＢＤ地方毒株油佐剂灭活疫苗不干扰ＮＤ疫苗的免疫应答；（３）ＩＢＤ弱毒苗对ＮＤ疫苗的免疫应答有一定影响，在免疫初期能促进机体尽快对ＮＤ疫苗产生应答，但后期ＮＤ疫苗的ＨＩ抗体降低较快；（４）ＮＤ疫苗对ＩＢＤ疫苗的免疫效果无显著影响。作者提出，对雏鸡首免（无论有、无母源抗体）可采用ＮＤ弱毒苗＋ＮＤ油佐剂灭活苗＋ＩＢＤ（地方毒株）油佐剂灭活苗同时进行免疫，至少可以保护到上笼后或开产前免受ＮＤＶ和ＩＢＤＶ的感染，既简化了免疫程序，又可减少对鸡群的应激，值得推广应用。

四种消毒剂对鸡新城疫病毒杀灭效果的比较

应用血凝试验检测中日合资爱丽丝（西安）畜牧有限公司送检的四种５％的消毒剂（原液）对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的杀灭效果。经过消毒剂对鸡胚致死性实验和ＮＤＶ在鸡胚中使用浓度的选择实验，确定将消毒剂分别做１∶２５０，１∶５００，１∶１０００，１∶２０００稀释后，与１∶５００的ＤＮＶ（尿囊液）等量混合，在体外作用不同时间（２，５，８ｍｉｎ）后，接种鸡胚尿囊腔内培养７２ｈ，以收取的鸡胚尿囊液血凝价为指标，判断四种消毒剂对ＮＤＶ的杀灭效果。结果表明Ⅲ、Ⅳ号消毒剂对ＮＤＶ杀灭效果明显。Ⅲ号消毒剂在稀释１０００倍后，５ｍｉｎ内可将ＮＤＶ完全杀灭；Ⅳ号消毒剂在５００倍后，８ｍｉｎ内将ＮＤＶ完全杀灭；Ⅰ号、Ⅱ号消毒剂在稀释５００倍后，８ｍｉｎ内未将ＮＤＶ杀灭。在四种消毒剂中Ⅲ号消毒剂对ＮＤＶ杀灭效果最好。

鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的免疫效力试验

对本室研制的鸡新城疫油乳剂灭活疫苗（ＮＤ－ＯＥＶ）的免疫效果进行了实验室与田间试验评价，并与美国同类疫苗进行了对比。结果表明，自制ＮＤ－ＯＥＶ与ＬａＳｏｔａ系弱毒疫苗同时接种雏鸡后，可生产高水平的抗体，且抗体维持时间长，能很好地抵抗ＮＤＶ强毒的攻击；在抗体水平与持续时间和抵御强毒方面均优于美国进口的ＮＤ－ＯＥＶ；接种雏鸡后，可使原有抗体水平相差悬殊的鸡群产生高效价、较为整齐的抗体；免疫成年鸡后６个月，ＨＩ抗体仍在６ｌｏｇ２以上。