LP3细胞系分泌CSF的影响因素及活性测定

集落刺激因子(Colony Stimulatingfactor,CSF)广泛存在于机体组织和体液中,亦可产生于特定CSF细胞株的培养液中分离提取。我们于1986年引进了产生M-CSF的LP3细胞系,经两年多的培养观察,基本掌握了其产生CSF的规律和特性,为进一步大量纯化及应用创造了条件。

人早幼粒白血病细胞系HL－60体外诱导分化研究

用体外短期液体培养技术，观察ＲＡ和不同来源的造血调控因子对ＨＬ－６０细胞增殖与分化的影响。以生长曲线和倍增时间作为观察各种试剂对ＨＬ－６０细胞增殖作用的指标；以ＮＢＴ还原反应和细胞形态变化作为分化成熟的指标。结果是ＲＡ、ＰＨＡ－ＬＣＭ单用时对ＨＬ－６０细胞均有抑制增殖和诱导分化作用，ＰＷＭ－ＳＣＭ、ＬＰ３－ＣＭ仅部分抑制增殖，而ＦＧＦ、Ｈｕ－ＣＳＦ和ＥＰＯ等无效。各种造血生长因子分别与ＲＡ合用时，能加强ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的增殖抑制和诱导分化作用的有ＦＣＦ、ＰＷＭ－ＳＣＭ、ＰＨＡ－ＬＣＭ和Ｈｕ－ＣＳＦ等；ＬＰ３－ＣＭ仅增强抑制增殖：ＥＰＯ未显示作用。

IL—1α、IFN—γ和TNF—α对HL—60细胞的诱导分化作用

白血病治疗有常规的大剂量联合化疗,骨髓移植,胎肝移植等,但预后都不令人满意。70年代开始了白血病治疗中的新方向。

rhIL-3、rhIFN-γ、DMSO单用或合用对HL-60细胞的增殖与分化的影响

作者观察rhIL-3、rhIFN-γ和DMSO对HL-60细胞的增殖与分化的影响。结果表明三者单独使用除rhIL-3早期有一定促生长作用外,都有抑制增殖和诱导HL-60细胞向粒系分化的作用,特别是DMSO对HL-60细胞有较强的诱导分化作用,且与剂量有关,rhIL-3作用次之,rhIFN-γ较弱。如分别与DMSO联合,则rhIL-3、rhIFN-γ均能加强DMSO对HL-60细胞的增殖抑制和诱导分化作用。

应用吞噬发光技术检测RA、造血调控因子对HL-60细胞的诱导分化作用

作者采用以酵母多糖为刺激物,鲁米诺依赖的化学发光分析技术,测定造血调控因子(PHA-LCM、IL-1-α-FGF等)与维甲酸单用或联合应用,培养HL-60细胞3～4d后,HL-60细胞的吞噬发光的动态变化。以吞噬发光曲线的峰时、峰值、斜率和积分值,表示诱导后HL-60细胞转化成熟的程度,作为评价诱导剂的效价。

γ射线照射后小鼠骨髓造血细胞凋亡及Fas表达的研究

目的：研究γ射线照射后小鼠骨髓造血细胞凋亡及其与 Ｆａｓ 表达的关系。方法：采用电镜、 Ｄ Ｎ Ａ 琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术观察小鼠经６０ Ｃｏ γ射线照射后不同时间的骨髓造血细胞凋亡及 Ｆａｓ 的表达情况。结果：在照射后４ ｈ 细胞即出现核固缩、染色质凝集； Ｄ Ｎ Ａ 琼脂糖凝胶电泳有大量的小分子片段，呈典型“梯状”图谱；流式细胞术分析表明，凋亡细胞百分率在照射后４ ｈ 明显增加，８ ｈ 达到高峰；照后４ ｈ， Ｆａｓ 表达显著增强。结论：γ射线照射后可引起骨髓造血细胞凋亡， Ｆａｓ 可能参与了辐射诱导的造血细胞凋亡过程。

成纤维细胞介导的IL-3基因疗法的体内IL-3水平及其增加外周血细胞数量的动态观察

为了更好地使IL-3在体内发挥其造血促进作用和免疫增强作用,于本实验中建立了IL-3基因疗法的小鼠模型;并动态观察了其外周血细胞数量的变化.通过基因转染、G418抗性筛选、有限稀释及IL-3活性测定,从16株NIH3T3成纤维细胞克隆中选出一株分泌IL-3高达2416U/ml的克隆株.将其移植入小鼠腹腔后,实验小鼠血清可检测出一定水平的IL-3并维持至半个月之久.实验小鼠外周血白细胞,特别是中性粒细胞数量显著增加,血小板也有不同程度的升高.该实验结果表明成纤维细胞途径能将IL-3基因携至体内进行有效表达并发挥显著的生物学作用.

苯甲酸雌二醇对辐射诱导小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响

目的:观察苯甲酸雌二醇对γ射线诱导小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响,以探讨其抗放射作用机制。方法:昆明种小鼠,随机分为正常组、单纯照射组和用药照射组3组,每组各15只。单纯照射组小鼠用7射线照射4.0Gy;用药照射组于照射前10d每只小鼠肌内注射0.1mg苯甲酸雌二醇,同时用γ射线照射4.0Gy;正常对照组不作任何处理。采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测骨髓造血细胞DNA裂解片段,采用流式细胞术观察各组小鼠照射后4h、8h、12h骨髓造血细胞凋亡、Fas和Bcl-2表达的变化情况。结果:γ射线照后8h,骨髓造血细胞DNA裂解片段增加,出现了典型DNA"梯状"条带,而用药照射组和正常对照组均未见明显"梯状"条带。照射后4h、8h、12h,用药照射组骨髓造血细胞凋亡率均明显低于单纯照射组(P<0.01);Fas表达较正常对照组略有增加,并未出现单纯照射组所呈现典型的高峰期,与单纯照射组比较显著降低(P<0.01);Bcl-2表达不降反而升高,与单纯照射组相比差异显著(P<0.01)。结论:苯甲酸雌二醇可能是通过下调Fas和上调Bcl-2的表达抑制了γ射线诱导的小鼠骨髓造血细胞凋亡。

骨髓细胞-80℃保存及其程序移植的实验研究

目的：提供简便有效的骨髓细胞（ＢＭＣ）保存方法，以便进一步提高骨髓移植效果。方法：以昆明种小鼠急性放射病为模型，进行了－８０℃冷冻保存ＢＭＣ及其程序移植的研究。结果：－８０℃保存的ＢＭＣ其有核细胞回收率为（８９．０±３．５）％，锥虫蓝拒染率为（８５．０±３．６）％；产率（每１０５个ＢＭＣ）：单核巨噬细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）为１０８±１０，脾细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－Ｓ）为１２±３。昆明种小鼠程序移植－８０℃保存的同种异基因ＢＭＣ４×１０５，其活存率与一次移植同条件冻存的ＢＭＣ１×１０７相同（３０％）；程序移植４×１０６时，活存率显著提高（６０％）。经性染色体检查各组均有植入证据。结论：－８０℃保存ＢＭＣ是一种行之有效的方法；骨髓程序移植可能充分利用了每次腾出的“龛位”，减少了移植细胞数，却增加了干细胞植入，提高了移植效果，是一种“种子与土壤”

电离辐射对人T淋巴细胞TCR、CD_3、CD_（18）及CD_（25）表达的影响

分析经γ射线离体照射的正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及急性放射病恢复期患者ＰＢＭＣ中Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）、ＣＤ_３、ＣＤ_（１８）及ＣＤ_（２５）阳性细胞。发现经１～６Ｇｙγ射线照射后立即分析，正常人上述４种标志阳性Ｔ细胞百分率无明显改变；受照射细胞经体外诱导培养４～１４ｄ，ＴＣＲ、ＣＤ_３及ＣＤ_（２５）阳性细胞百分率不同程度呈照射剂量依赖性下降，随培养时间延长增加，ＣＤ_（１８）阳性细胞百分率的变化幅度相对较小。免疫细胞化学分析显示，照射后８～１２ｄ，Ｔ细胞胞浆内有较多ＴＣＲ（β）及ＣＤ_３阳性物质出现。提示：辐射致ＴＣＲ、ＣＤ_３阳性Ｔ细胞减少可能与细胞内ＴＣＲ及ＣＤ_３表达和装配异常有关。

聚合酶β在肝癌细胞DNA辐射损伤修复中的作用

利用第二军医大学裸鼠移植性肝癌细胞（ＳＭＭＣ－ＬＴＮＭ）和不同的ＤＮＡ聚合酶选择性抑制剂ＮＥＭ与ｄ２ＴＴＰ，探讨了肿瘤细胞核中ＤＮＡ聚合酶Ｂ参与γ射线辐射损伤ＤＮＡ修复的作用特点。结果表明，该酶参与真核细胞｝射线辐照损伤的ＤＮＡ修复合成，是一种重要的ＤＮＡ修复酶；与正常肝细胞相比，ＳＭＭＣ－ＬＴＮＭ肝癌细胞ＤＮＡ聚合酶β的ＤＮＡ修复合成反应速度快，修复能力强。提示某些肿瘤细胞中该酶的ＤＮＡ辐射损伤修复合成功能比正常细胞的大。

白细胞介素3基因疗法和白细胞介素6基因疗法的联合造血调控作用

研究了成纤维细胞介导的ＩＬ－３基因疗法、ＩＬ－６基因疗法以及两者联合后对造血系统的影响。结果发现，单用ＩＬ－３基因疗法的小鼠白细胞总数、中性粒细胞、骨髓ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＭＫ等显著上升，但血小板上升程度软弱；单用ＩＬ－６基因疗法的小鼠血小板、中性粒细胞、骨髓ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＭＫ等显著上升，但白细胞总数上升不明显；当两者联合后可使血小板、中性粒细胞、骨髓ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＭＫ上升更为显著；且达高峰时间提前。表明联合应用成纤维细胞介导的ＩＬ－３基因疗法和ＩＬ－６基因疗法能比单一疗法更显著增强机体骨髓造血功能，使外周血细胞升高，从而为肿瘤患者放化疗后机体造血功能低下的治疗开辟了新的途径。

DNA聚合酶β对DNAγ线辐射损伤的修复作用

采用ＤＮＡ聚合酶专一性抑制剂，观察ＤＮＡ聚合酶β对ＤＮＡγ线损伤的修复作用。结果表明：在重组大鼠ＤＮＡ聚合酶β作用下，［３￣Ｈ］－ＴＴＰ掺入率明显高于未照组（Ｐ＜０．０１）；在一定剂量范围内（肝细胞小于２０Ｇｙ，ＳＭＭＣ－ＬＴＮＭ肝癌细胞小于５Ｇｙ），［￣３Ｈ］－ＴＴＰ掺入率随照射剂量增加而升高，继续增加照射剂量时，［￣３Ｈ］－ＴＴＰ掺入率反而下降；在同一剂量下，不同剂量率照射组之间ＤＮＡ聚合酶β的修复合成无显著差别（Ｐ＞０．０５）。提示ＤＮＡ聚合酶β参与了γ线所致ＤＮＡ损伤的修复过程，并且这一修复作用同受照剂量以及细胞类型可能有关。

5名电离辐射事故患者外周血T细胞T细胞抗原受体、T细胞分化抗原决定簇－3效应的研究

文中报道了５名事故性急性骨髓型放射病患者照后２．５和３．５年外周血Ｔ淋巴细胞Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因，ＴＣＲ、Ｔ细胞分化抗原决定簇－３（ＣＤ_３）表达与ＴＣＲ／ＣＤ_３复合物功能的辐射效应．发现５名患者于照后２．５年，２名（５．２Ｇｙ和２．４Ｇｙ，５５岁）于照后３．５年外周血Ｔ细胞应答抗ＣＤ３单抗刺激而增殖的能力尚未完全恢复；经同时用ＩＬ－２和抗ＣＤ_３单抗刺激，增殖能力比单用抗ＣＤ_３单抗刺激有所增强；后２名的外周血ＴＣＲ、ＣＤ_３阳性细胞百分率一直低于正常对照和其他患者；并见一患者出现ＤＮＡ重排杂交带型．本文并从ＴＣＲ／ＣＤ_３在介导Ｔ细胞抗原刺激反应中的作用，电离辐射对ＴＣＲ／ＣＤ_３复合物的影响，后果和意义等方面进行了讨论．

胎肝-骨髓程序移植提高移植效果

为进一步提高骨髓移植效果。以昆明种小鼠急性放射病为模型，进行了胎肝－骨髓程序移植（ＦＬ－ＢＭＳＴ）后小鼠活存及造血重建、急性移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）的研究。胎肝－骨髓程序移植 １ｘ １０６个骨髓细胞时，于照射后第 １７ｄ外周血白细胞、骨髓有核细胞计数接近正常，ＣＦＵ－Ｅ、 ＣＦＵ－ＧＭ、 ＣＦＵ－Ｆ、 ＣＦＵ－Ｓ已达正常； ＧＶＨＤ较一次骨髓移植组轻；活存率达６０％，显著高于一次骨髓移植组。胎肝-骨髓程序移植既充分利用了每次腾出的“龛位”（Ｎｉｃｈｅ），又通过移植胎肝基质细胞改善了“龛位”，增加了“龛位”，从而增加了干、祖细胞的植入并加快增殖分化，减少了移植细胞数，提高了移植效果；是一种较好的移植新方法。

构建商务英语专业情境型综合实践体系

通过对商务英语专业不同实践形式的分析,探讨了如何做到综合运用,优势互补,以构建情境型综合实践体系,探索一条适合商务英语专业发展的实践教学之路,同时讨论了实施综合实践需要的软件和硬件条件。

IL-6基因疗法增强同基因骨髓移植后的造血重建

目前临床上治疗无法手术的恶性肿瘤仍以放化疗为主，虽然增加放化疗剂量可显著提高对肿瘤的治疗效果．但在增加放化疗剂量的同时可导致机体造血功能严重低下，重者则导致致死性骨髓抑制，因此这使降低放化疗剂量或中止放化疗，这样往往影响肿瘤的治疗效果。研究表明细胞因子如IL-3、IL-6、GM-CSF等能显著地促进放化疗后机体造血功能的尽早恢复，

白细胞介素3基因疗法和白细胞介素6基因疗法的联合造血调控作用

本文研究了成纤维细胞介导的IL-3基因疗法，IL-6基因疗法，以及两者联合后对造血系统的影响，结果出现：单用IL-3基因疗法的小鼠白细胞总数，中性粒细胞，骨髓CFU-GM，CFU-MK等显著上升，但血小板上升程度较弱，单用IL-6基因疗法的小鼠血小板，中性粒细胞，骨髓CFU-GM．CF-MK等显著上升，

小鼠不同细胞数骨髓移植后回巢与生存率观察

目的:探讨移植细胞数对小鼠骨髓移植回巢及生存率的影响。方法:采用不同细胞数移植、不同细胞数加不同时问间隔程序移植及流式细胞仪检测等方法,观察不同细胞数骨髓移植后小鼠骨髓内回巢效果和生存情况。结果:不同细胞数骨髓移植中5×105组的回巢细胞数与高细胞数组无差异,回巢率远远高于后者(P<0.01);生存率1×105组为95％,与高细胞数组无差异。不同细胞数加不同时间间隔程序移植以细胞总数在1×105、间隔24 h移植组存活率高,组间差异非常显著(P<0.01)。结论:在一定细胞数量范围内,分次移植可能提高移植干细胞的回巢效率。

大鼠浆细胞株来源的GM-CSF对受照射小鼠的疗效观察

目的 :观察造血生长因子对受照射小鼠辐射损伤的防治作用。方法 :用大鼠浆细胞株培养上清 (RSP- CM)和小鼠成纤维细胞株培养上清 (L P3- CM)来源的集落刺激因子 ,治疗受不同剂量 6 0 Coγ射线照射的 ICR小鼠。观察小鼠 30 d存活率、死亡动物平均存活日、保护系数及部分动物外周血白细胞计数。研究 GM- CSF对受照射小鼠重建造血功能的疗效及量效、时效关系。结果 :RSP- CM能显著提高受 7.5 Gy照射小鼠的存活率 ,而 L P3- CM则无效。照射剂量为 8.0 Gy时 ,只有 RSP- CM治疗组有效 ,预防组和防治组无效。照射剂量为 8.5 Gy时 ,小鼠 30 d内全部死亡 ,表明 GM- CSF对大剂量照射小鼠疗效差 ,但从保护系数看 ,各实验组均有效 ,且存在量效、时效关系。结论 :RSP- CM源性 GM- CSF对受照小鼠的骨髓损伤有促进造血恢复的作用 ,且在一定程度上存在量效、时效关系 ,而 L P3- CM源性 M- CSF则无效。