糖多孢红霉菌引入异源启动子表达透明颤菌血红蛋白

目的为了在糖多孢红霉菌(Sac.erythraea)中表达透明颤菌(Vitreoscilla)血红蛋白基因(vgb),将变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)启动子基因整合于糖多孢红霉菌染色体中。方法以变铅青链霉菌基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆变铅青链霉菌启动子基因,利用基因重组技术构建含有异源启动子与vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒,经电穿孔法与糖多孢红霉菌染色体整合,红霉素效价测定采用管碟法。结果克隆了含有异源启动子与vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒(pBlueV),相对分子量6.033kb,筛选了重组糖多孢红霉菌株,原始菌株与重组菌株的最终红霉素效价分别为3.98、5.15g·L-1,重组菌株提高红霉素体积产率约29%。结论vgb在重组糖多孢红霉菌株引入异源启动子的情况下获得了表达,有望解决传统发酵过程中由于氧传递而导致的产率低下和成本高的问题。

北虫草提取物影响冷应激大鼠脑组织cAMP水平与AC活性的实验研究

目的探讨北虫草提取物对冷应激大鼠不同脑组织区域环磷酸腺苷(cAMP)水平与腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)活性的影响。方法采用4℃暴露3h应激方式,持续应激4周,建立大鼠冷应激模型,用酶联免疫吸附实验(ELISA)、放射免疫分析(RIA)法检测脑皮质,脑干和丘脑下部cAMP含量和AC活性的改变。结果冷应激实验组与正常对照组比较大鼠脑皮质、脑干,丘脑下部cAMP含量和AC活性明显下降,虫草提取物能明显拮抗冷应激引起的cAMP含量和AC活性降低。结论北虫草提取物对冷应激大鼠脑组织不同区域cAMP含量和AC活性有明显的改善作用,提示持续冷应激会导致中枢神经系统功能障碍。而虫草提取物表现出的上调cAMP含量和AC活性作用可能与增强冷应激大鼠脑组织不同区域交感神经-肾上腺-靶细胞信号传导网络之间的功能有关,确切的调控机理尚需进一步深入实验研究。

培养基对透明颤菌生长的影响

目的:为了从环境中分离透明颤菌(Vitreoscilla),对培养基和生长条件进行了优化。方法:采用富集培养的方法,对透明颤菌生长的培养基成份进行了筛选试验。结果:在培养温度为32±2℃,50ml/500ml三角瓶,pH 7.8,醋酸钠浓度为0.02%,摇床转速120r/min条件下,透明颤菌生长最佳培养基是:酵母粉0.7%,蛋白胨0.3%。结论:透明颤菌在上述培养基中生长12h可达到高峰。

表达vgb的糖多孢红霉菌载体构建与活性鉴定

目的为了在糖多孢红霉菌(Sac.erythraea)中表达透明颤菌(Vitreoscilla)血红蛋白基因(vgb),发挥其在贫氧环境下与氧结合形成氧合态,而改变限氧时细胞原有的代谢方式,将vgb克隆于糖多孢红霉菌表达载体中。方法利用PCR技术克隆vgb,利用基因重组技术构建含有vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒,电穿孔法将vgb转化置糖多孢红霉菌中,鉴定采用SDS-PAGE电泳。vgb在重组糖多孢红霉菌表达产物的生物活性检测用Western blotting分析表示。结果克隆了含有vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒(pBlueV),分子量6.033 kb,筛选了重组糖多孢红霉菌株,重组菌株表达的血红蛋白能与1∶300的VHb抗体呈显色反应。结论vgb在糖多孢红霉菌中获得了表达,这对继续研究生产红霉素的工程菌改造,解决工业发酵工程菌高密度培养具有良好的应用前景。

浅谈《地铁第一时间》创意一版

沈阳地铁报《地铁第一时间》创刊5年来实现了效益、口碑的双丰收,在报媒寒冬中逆势崛起,其创意一版作为其最具有代表性的版面,充分体现了报纸特色和定位,对增加受众黏合度起到了重要作用。

冷应激对大鼠脑组织cAMP和cGMP水平及AC和PDE生物活力的影响

目的通过对冷应激大鼠脑组织环磷酸腺苷(cAMP)与环磷酸鸟苷(cGMP)含量,腺苷酸环化酶(AC)和磷酸二酯酶(PDE)生物活力的研究,旨在探讨冷应激对中枢神经系统损伤的机制。方法将大鼠分对照组与实验组〔含冷应激组和冷应激恢复组(以下简称恢复组)〕,cAMP、cGMP含量检测采用酶联免疫分析法(ELISA)。AC和PDE的生物活力检测采用放射性同位素法。结果大鼠脑皮质cAMP含量和AC活力:对照组为(0.516±0.271)pmol/mg和(1.67±0.52)pmol/(mg.min),冷应激组为(0.338±0.204)pmol/mg和(1.38±0.15pmol/(mg.min),而恢复组cAMP含量为(0.419±0.197)pmol/mg,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。大鼠脑干cAMP含量和AC活力:对照组为(0.326±0.212)pmol/mg和(2.21±0.13)pmol/(mg.min),冷应激组为(0.297±0.224)pmol/mg和(1.95±0.14)pmol/(mg.min),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。大鼠丘脑下部cAMP含量和AC活力:对照组为(0.651±0.231)pmol/mg和(2.87±0.21)pmol/(mg.min),冷应激组为(0.366±0.219)pmol/mg和(1.36±0.25)pmol/(mg.min);对照组PDE活力为(6.42±0.47)%/(mg.min),而冷应激组为(7.91±0.16)%/(mg.min),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论冷应激降低大鼠脑组织不同区域cAMP含量和AC活力,提示,持续冷应激可造成AC-cAMP信号转导通路损伤。