酸铝对杉木磷吸收和代谢的影响

用3 2 P示踪原子法通过水培试验研究了酸性条件下铝对 1年生杉木的根和叶磷吸收和代谢的影响。结果表明 ,在pH =3时 ,用酸铝处理根和叶后 ,根中3 2 P 无机磷增加到对照的 1 95 % ,叶片3 2 P 无机磷转运指数由 43 0降低到 2 0 0。根的P总含量中的各3 2 P 化合物比例发生较大变化 ,无机磷增加到对照的 1 75 % ,有机化合物、脂类化合物、DNA、RNA分别减少到对照的 5 5 % ,42 % ,36 % ,40 % ;叶中各3 2 P化合物的比例除DNA降低外 (82 % ) ,其它变化不大。

通识教育与个性化专业教育相结合——高等农业院校生物科学专业人才培养模式的探讨

论述了通识教育与个性化专业教育相结合的理念,提出高等农业院校生物科学专业人才培养通识教育与个性化专业教育相结合的模式。

大豆等植物材料DNA提取方法的改进及其干扰机制的探讨

本文介绍了一种改良的大豆DNA纯化方法。该法能更有效地避免蛋白质和其他干扰化合物的污染，分离提取到天然双链高分子量的大豆DNA，且有机溶剂用量可节约三分之一左右。分析鉴定表明所得DNA已符合遗传学转化实验要求。该法也适用于其他植物材料DNA的提取。

麦角固醇高产酵母菌的快速筛选方法

介绍一种快速、简便、可靠的筛选麦角固醇高产酵母菌株的方法。将自溶后的酵母菌用超声波破碎，用乙醚萃取其所含麦角固醇，利用乙酸酐在酸性条件下与麦角固醇生成绿色化合物的原理，可直接根据绿色深浅来判断菌株的优劣。

铜锌离子对超氧化物歧化酶构象及催化活性的影响

用ＣＤ光谱、紫外吸收光谱和荧光发射光谱监测了铜锌离子对超氧化物歧化酶构象的影响，结果表明脱铜锌后酶的二级结构有序度降低，三级结构发生去折叠，而且酶失活程度明显大于铜锌丢失程度。提示铜锌离子对于维持酶分子特定构象及对构象的稳定性具有重要作用。

量子点作为生物荧光标记物的研究进展

量子点具有传统荧光染料和镧系配合物无法比拟的荧光特性：宽的激发光谱、窄的发射光谱、更长的寿命等。文章概述了量子点的光学特性和制备方法,并着重介绍了其作为荧光标记物在生物学中的应用。

超氧化物歧化酶全酶和脱辅基酶胍变性时失活与去折叠的比较研究

利用紫外差吸收光谱和荧光发射光谱等监测手段研究天然铜锌ＳＯＤ（ｈｏｌｏ－ＳＯＤ）和脱铜锌ＳＯＤ（ａｐｏ－ＳＯＤ）在不同浓度胍溶液中的去折叠及活力变化．结果表明ｈｏｌｏ－ＳＯＤ和ａｐｏ－ＳＯＤ分别在４．０和２．０ｍｏｌ／Ｌ胍溶液中去折叠，而分别在２．０和０．５ｍｏｌ／Ｌ胍溶液中其构象尚未发生明显改变时活性几乎完全丧失．提示金属离子对维持酶的整体及活性部位构象具有重要作用，脱去金属离子的酶分子的构象特别是活性部位的构象更易受到变性剂的破坏．

用啤酒糟酶解液培养酵母菌产麦角固醇的研究

以麦角固醇质量分数达３％以上的酵母菌株Ｙｓ－５和Ｙｓ－１６为培养菌，进行了用啤酒糟酶解液代替糖蜜培养基发酵生产麦角固醇的实验．结果表明，在最适条件下，添加少量自溶性酵母，酵母菌的麦角固醇产率可提高２０％左右．

酶法测定尿素含量的研究

本文研究了一种应用中性载体膜pH电极与流动注射分析法测定血清和水样中尿素含量的固定化尿酶法。结果表明,利用此法每2分钟可进一个样,即每小时可分析30个样品。

玉米耐旱系数的多元回归分析

利用塑料防雨棚遮挡降水 ,在土壤含水量略高于萎蔫系数的干旱条件下 ,调查 12个常用和新近选育的玉米自交系与耐旱性有关的 15个生长发育和生理生化指标 ,根据其与正常灌水对照的差异计算耐旱系数 ,并与籽粒产量耐旱系数进行多元回归分析。结果表明 ,播种出苗期可用出苗率与生物学产量耐旱系数的乘积作为自交系耐旱性鉴定指标 ,成株期可用株高、雌雄花期间隔、出叶速度、根重等的耐旱系数预测自交系的耐旱性。

巨桉根系和根系土壤化感物质的研究

研究了以正己烷作溶剂,用超声浸提巨桉根系及其根系土壤,并用GC-MS检测其成分.用该法鉴定出根系含有烷烃、烯烃、芳香烃、醇、醛、酮、蒽醌、芳香酸酯、含N的萘杂环等9类29种有机成分;根系土壤含有烷烃、烯烃、芳香烃、醇、芳香酸酯、烯酸酯、内酯、氰等8类22种有机成分.证明了根系及其土壤中存在化感物质,表明了化感作用研究有一定的价值;根系和根系土壤中有17个相同化学成分,可推测土壤的这些化感成分可能来自巨桉的根系分泌物,但其作用机理有待进一步研究.

植酸酶基因中稀有密码子的改造提高其在毕赤酵母中的表达量

对来源于黑曲霉N2 5(AspergillusnigerChinaStrain)的植酸酶基因phyA进行PCR介导的定点突变 ,不改变其所编码氨基酸 ,选用毕赤酵母偏爱的密码子对该基因保守序列中第 81位和第 85位的Arg密码子进行同义突变 .构建了含正确突变的克隆载体pUC18 phyAm 和酵母表达载体pPIC9k phyAm,电击转化毕赤酵母 ,经MM、MD平板筛选和产物的酶活性测定 ,筛选出突变与未突变高酶活酵母转化子各 2株 .这 4株转化子的Southern印迹结果表明 ,phyA基因以单交换方式单拷贝整合到酵母染色体DNA中 .表达产物的SDS PAGE分析表明 ,重组酵母中的植酸酶能有效分泌和表达 ,蛋白质分子大小为 70 15kD .转化子酶活测定结果表明 ,经密码子优化的突变重组酵母酶活力明显高于未进行优化的重组酵母转化子 .经密码子优化的突变重组酵母株PP NPm 8于麦芽汁培养基中诱导 36h后酶活力可达 4 76 0 0U/ml,其活力比未优化重组酵母株PP NP 2 (2 36 6 7U/ml)提高了约 1倍 ,且重组转化子遗传稳定性良好 .

漆酶高产菌株的诱变选育及其产酶条件

以粗毛栓菌Trametesgallica为出发菌,通过紫外诱变处理其担孢子、PDA-RBBR平板变色法初筛、ABTS法测定培养液漆酶酶活力复筛,获得1株漆酶高产诱变菌株SAH-12。用高氮低碳无机盐培养液(LM3)培养时,其峰值酶活力比出发菌株高出4倍,达到5002.6U/L,且产酶稳定。对SAH-12液体培养产酶条件的研究表明:以纤维二糖和蔗糖为碳源明显优于麦麸、淀粉和葡萄糖,其最高酶活分别达18526U/L和13436U/L;有机氮源较无机氮源更有利于SAH-12漆酶的分泌,以蛋白胨、大豆粕和胰化蛋白胨为氮源时其峰值酶活分别达到20544U/L、19671U/L和16180U/L;适宜初始培养pH为4.0;ABTS、单宁酸、没食子酸对产酶均有明显的诱导作用,其中ABTS和单宁酸的诱导效果相对更好,愈创木酚和吐温80对产酶有一定的抑制作用。

大豆总DNA直接导入法培育优质高蛋白玉米材料研究

利用外源总DNA转导的花粉管通道法和经我们发展的减压渗透法将大豆总DNA导入玉米自交系统 4 8- 2和S3 7,在 74 3份后代材料中筛选出 8份高蛋白含量变异材料 ,它们的蛋白质与受体相比提高 2 0 %以上。用种子蛋白SDS -PAGE、谷氨酸 -草酰乙酸同工酶及RAPD等分析方法对变异材料及其受体进行了鉴定分析 ,同时也对此 8份变异材料的自交后代进行了筛选和在田间比较观察了变异材料与受体的农艺性状。结果表明 ,这些高蛋白变异材料与受体 4 8- 2和S3 7在遗传上存在明显的差异 ,在其自交后代中仍有部分株系保持了高蛋白含量特性。此外 ,4 8- 2的变异材料在植株形态、花药颜色上有明显变化。上述结果初步证明高蛋白特性是可遗传的 ,这为选育高蛋白玉米新自交系提供了新材料 。

植酸酶phyA^m基因结构延伸突变改善酶的热稳定性

将来源于黑曲霉N25的植酸酶基因phyAm重组于大肠杆菌表达载体pET30b(+),以重组表达载体pET30bFphyAm为模板经PCR扩增获得结构延伸突变植酸酶基因phyAe(在植酸酶基因C端增加了来源于pET30bFphyAm载体上13氨基酸残基)。含突变基因的重组表达载体pPIC9kphyAe在GS115酵母中表达。纯化的突变酶PPNPe与野生型酶PPNPm8相比:PPNPAe的最适反应温度上升了3℃,75℃处理10min,热稳定性提高21%,比活力略有提高。最适反应pH为5.6,有效pH范围pH4.6到pH6.6。比未突变酶扩大了0.4单位。

大豆两个MYB转录因子基因的克隆及表达分析

【目的】克隆新的植物MYB转录因子基因,进行序列分析,并对其功能进行初步鉴定。【方法】RT-PCR法结合RACE-PCR法分离克隆MYB基因cDNA全长序列;酵母系统检测其转录激活活性;半定量RT-PCR检测目的基因在植物体中的表达情况,及对类黄酮代谢途径中生物合成酶的影响。【结果】根据植物中MYB基因DNA结合域保守区设计简并引物,以大豆品种中豆27的叶片为材料,RT-PCR扩增出两个MYB基因同源片段;据此设计基因特异引物,通过RACE-PCR分离克隆出两个新的MYB基因GmMYBZ1、GmMYBZ2。酵母系统检测表明,GmMYBZ2具有转录激活功能,β-半乳糖苷酶活性为10.35U;半定量RT-PCR在中豆27的茎和叶中检测到GmMYBZ1的表达,而GmMYBZ2在植物的根、茎、叶及未成熟种子中均有表达;对转基因烟草的RT-PCR检测结果显示,GmMYBZ2的表达可抑制类黄酮代谢途径中PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F4H及FLS等生物合成酶基因的表达。【结论】从大豆栽培品种中豆27中克隆出了两个新的MYB基因GmMYBZ1、GmMYBZ2;功能研究表明,GmMYBZ2可能参与植物类黄酮合成调控。

F43Y及I354M,L358F定点突变对植酸酶热稳定性及酶活性的改善

对重组酵母PPNPm8的植酸酶phyAm基因进行PCR介导的定点突变,即将植酸酶43位的苯丙氨酸替换为酪氨酸(F43Y),将其354、358位的异亮氨酸、亮氨酸分别替换为甲硫氨酸和苯丙氨酸(I354M,L358F),得到了2个突变体PPNPm-1(F43Y)及PPNPm-2(I354M,L358F).含突变基因的重组表达载体pPIC9kphyAm-1,pPIC9kphyAm-2在毕赤酵母GS115中表达,对表达产物进行酶活性测定及热稳定性检测.结果表明:突变体PPNPm-1最适反应温度比未突变体PPNPm8上升了3℃,75℃处理10min,热稳定性提高15%,比活力提高11%;PPNPm-2最适反应温度未改变,热稳定性比PPNPm8仅提高3%,比活力降低6.5%.对突变前后的植酸酶空间结构进行比较预测,发现突变氨基酸Tyr43与空间位置相邻的Asn416之间形成氢键,增强了酶的热稳定性.

粗毛栓菌诱变菌株SAH-12漆酶的分离纯化及酶学性质研究

粗毛栓菌Trametes gallica诱变菌株SAH-12是通过紫外诱变选育所得的漆酶高产菌株,Active-PAGE分析表明SAH-12在高氮低碳无机盐培养液(LM3)中至少分泌3种漆酶同工酶(Lac1、Lac2、Lac3)。采用硫酸铵盐析、透析和Sephadex-G75分子筛层析从其培养液中分离纯化得到电泳纯的Lac1,纯化倍数6.54,酶活性回收59.7%。Lac1经SDS-PAGE验证为一条带,其表观分子量为61.5kDa。Lac1为一种糖蛋白,含糖量11.6%,等电点pI4.40,催化氧化底物ABTS的最适反应温度为60℃,最适pH为2.6,Km值为25μmol/L。Lac1在40℃(pH4.0)以下和pH1.5～5.0(28℃)范围内稳定。金属离子Fe2+、Ag+、Hg2+和Cr3+与抑制剂DTT、SDS、EDTA和DMSO对Lac1有抑制作用,其中Fe2+和DTT完全抑制酶活,而Cu2+对酶有明显激活作用,Mn2+、Zn2+对酶活影响不大。Lac1不仅可使一些合成染料明显脱色,而且对苹果汁多酚祛除也有较好效果。40℃用该酶(1U/mL)处理苹果汁5h,其多酚含量可降低40%。

青花椒根际土壤化感物质成分分析

用气质联用仪分析了青花椒根际区不同深度土壤水浸液中化感物质的成分。检测鉴定出表层土壤含有23个组分的化学物质,而深层土壤中含有29个化学组分。在不同深度根际土壤中主要含有烷烃类、醇类、酯类、苯类、酚类及胺等有机化合物,其中包含有很多曾经被报道过的化感物质。结果表明,在青花椒根际土壤环境中确实存在化感物质。

CdX(X=Se,Te,Te/ZnS)量子点脂质体的制备及毒性比较

在水相中以巯基乙酸(mercaptoacetic acid,MA)为稳定剂合成了CdSe、CdTe、CdTe/ZnS量子点及谷胱甘肽(glutathione,GSH)为稳定剂合成了CdTe量子点,然后通过卵磷脂和胆固醇修饰制得相应的量子点脂质体。溶血实验证实GSH修饰量子点的溶血率低于MA修饰的量子点45%;脂质体修饰后,量子点的溶血率<5%,达到生物医用材料要求。不同表面修饰的量子点对小鼠毒性存在明显差异,荧光显微镜观察组织切片证实量子点在小鼠体内主要分布在肺、肾、胸腺等组织中,而脂质体量子点在脑组织中富集明显。