剑麻均一化文库构建及PnRXLR5863靶蛋白筛选

剑麻是硬质纤维的主要来源,由烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)引起的斑马纹病是剑麻生产的重要病害。RXLR效应蛋白是卵菌第一大类效应蛋白,能通过直接的蛋白质相互作用,靶向寄主防卫相关蛋白,干扰和抑制寄主防卫。利用转录组分析不同侵染阶段的烟草疫霉,发现PnRXLR5863表达量较高,并且其编码的蛋白含有信号肽、RXLR-EER和WY结构域,瞬时表达发现PnRXLR5863能引起烟草细胞死亡,推测PnRXLR5863在烟草疫霉侵染剑麻过程发挥重要作用,但是它作用于剑麻的靶蛋白和致病机制还未知。为了筛选PnRXLR5863的剑麻靶蛋白,应用Switching Mechanism at 5'end of RNA Transcript(SMART)和Duplex-Specific Nuclease(DSN)技术构建了剑麻均一化酵母cDNA表达文库,并筛选了与PnRXLR5863相互作用的蛋白。结果显示,构建的文库库容为5.32×10^(7)CFU/mL,文库总克隆数为1.064×10^(8)CFU,文库片段平均大小为1000 bp,重组率为100%;构建的pGBKT7-PnRXLR5863诱饵载体无自激活性;利用酵母双杂交系统,以pGBKT7-PnRXLR5863诱饵载体,从构建的文库中筛选获得23个与PnRXLR5863相互作用的蛋白。获得的候选靶蛋白主要参与分子功能和生物过程,涉及泛素化过程、蛋白合成、蛋白翻译和蛋白修饰等生理事件,暗示PnRXLR5863效应蛋白可能作用于剑麻的蛋白代谢。剑麻均一化酵母表达文库的构建和PnRXLR5863靶蛋白的筛选,为进一步深入研究PnRXLR5863的致病机理奠定基础。

节能绿色环保技术在市政工程中的应用

随着全球气候变化和环境问题的逐渐加剧,节能绿色环保技术在市政工程中的应用变得愈发重要。市政工程作为城市发展的基础设施,其建设、运营和管理过程中对能源消耗和环境排放的影响不可忽视。因此,在市政工程中广泛采用节能绿色环保技术是实现可持续发展和建设宜居城市的必然选择。只有通过全面推进绿色城市建设,才能为后代子孙留下一个美丽、健康的地球家园。

澳洲坚果光壳种MiSAD的克隆与表达

澳洲坚果果仁中含有丰富的不饱和脂肪酸(unsaturated fatty acid,UFA),其不饱和脂肪酸生物合成的分子机制还有待进一步解析。植物硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶(SAD)是脂肪酸生物合成途径中形成不饱和脂肪酸的关键酶。本研究以澳洲坚果(Macadamia integrifolia)光壳种为对象,通过PCR技术克隆获得澳洲坚果硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶基因(MiSAD),并对结构功能和表达模式进行了初步分析。结果显示,克隆获得5923 bp的MiSAD基因组DNA序列,该基因由3个外显子2个内含子组成,包含1191 bp的编码框,与公布的粗壳种MtSAD序列高度一致;编码396个氨基酸;MiSAD分子量为45.22 kDa,等电点为5.93,属于酰基-ACP脱饱和酶,是位于叶绿体或质体基质中的水溶性酶;高度保守的区域存在形成酶活位点的2个E-X-X-H二铁原子中心基序,N端和C端氨基酸序列差异较大;二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主;三级结构预测中存在形成脂酰链结合部位的螺旋-转角-螺旋(HTH);与蒂罗花的同源性最高达94.2%,与其他物种的SAD同源性也都在80%以上;分子进化树显示与荷花进化关系较近,属于植物脂酰-ACP脱饱和酶。荧光定量PCR数据显示MiSAD在根、茎、叶、花、果中均有表达,其中叶片和果实中表达量较高,果实中的MiSAD表达量在开花后第100天左右达到最高,之后随着果实的成熟逐渐下降,呈现正态分布趋势。该研究为深入研究MiSAD在澳洲坚果果仁中不饱和脂肪酸生物合成的作用机制奠定基础。

基于3D视觉的AI自主导览机器人研究与开发

近年来,AI自主导览机器人在博物馆、展览馆等多个领域取得了显著的应用效果。针对多传感器模块信息采集和复杂背景下动态目标的跟踪问题,本研究提出一种结合多传感器融合和深度学习的机器人设计方案。首先,基于多传感器(包括深度相机、激光雷达和语音模块等)的信息融合,设计出鲁棒性强、实时性高的机器人控制策略;其次,利用深度学习的端到端动态目标检测与跟踪方法,有效减少计算资源消耗,提高系统学习与响应速率。通过实验验证,该方法在一定程度上缓解了机器人在复杂环境下由于系统卡顿、延迟等问题造成的目标跟丢现象,为AI自主导览机器人在实际应用中的稳定性和实用性提供有益探讨。

剑麻酵母双杂交cDNA表达文库的构建及与AhKNOX2相互作用蛋白的筛选

植物KNOX(Knotted1-likehomeobox)可通过蛋白质相互作用参与调控落果、纤维细胞发育、次生细胞壁发育、开花等事件。为筛选剑麻叶中与AhKNOX2相互作用的蛋白,采用SMART同源重组技术构建剑麻叶片酵母双杂交表达文库,利用AhKNOX2为诱饵筛选与之相互作用的蛋白。结果表明:文库总容量为3.9’106CFU,转化效率为9.15’105CFU/μgpGADT7-Rec,插入片段大小主要分布于0.5~3.0kb之间,重组率为92%,保存的文库细胞密度为1.35’108/mL,文库滴度为2.22’107 CFU/mL。构建的pGBKT7-AhKNOX2诱饵载体存在自激活性,5 mmol/L的3-氨基-1,2,4-三唑(3-Amino-1,2,4-triazole,3-AT)能抑制诱饵载体的自激活,通过筛选获得了16个与AhKNOX2相互作用的蛋白。本研究成功构建剑麻叶片酵母表达文库,并筛选获得与AhKNOX2相互作用的蛋白,该结果为进一步研究AhKNOX2在剑麻中的功能奠定前期基础,为培育高纤维产量的剑麻新品种提供基因资源和理论基础。

橡胶树14-3-3蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测

以克隆到的3个编码橡胶树14-3-3蛋白的基因HbGF14a、HbGF14b、HbGF14c为基础,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-HbGF14a、pGBKT7-HbGF14b、pGBKT7-HbGF14c,并对其进行自激活和毒性实验鉴定。自激活实验结果表明,3个诱饵载体没有自激活性;毒性实验结果表明,pGBKT7-HbGF14a、pGBKT7-HbGF14b、pGBKT7-HbGF14c表达的蛋白对酵母菌无毒性,酵母生长良好,结果表明,构建好的诱饵载体均可用于下一步的酵母双杂交实验。这为进一步的诱饵载体与橡胶树胶乳cDNA酵母表达文库的杂交做好了前期准备。

巴西橡胶树乳管细胞中与HbRZF相互作用蛋白的初步筛选与分析

为深入研究巴西橡胶树乳管细胞中C3HC4型环锌指蛋白HbRZF的生物学功能,构建了pGBKT7-HbRZF诱饵表达载体,利用酵母双杂交技术从巴西橡胶树胶乳cDNA文库中筛选与其相互作用的蛋白。通过阳性克隆的表型确定、PCR测序和生物信息学分析,初步获得了16个与诱饵蛋白相互作用的靶蛋白。获得乳管细胞中与HbRZF相互作用蛋白,为进一步研究HbRZF锌指蛋白在巴西橡胶树乳管细胞中的未知生物学功能奠定了重要基础。

用ABC-ELISA检测羊流产衣原体抗体的研究

本研究以CFT和常规ELISA为基准和对照,首次建立了检测羊流产衣原体抗体的ABC-ELISA法,并对其重复性、特异性及敏感性等进行了比较。同批次和不同批次试验的可重复性良好;与其它9种羊病阳性血清均无交叉反应,试验能被特异性阻断;3种方法中,以ABC-ELISA的敏感性最高,分别为常规ELISA和CFT的1.89倍和17.54倍。羊流产衣原体绵羊源和山羊源两株抗原的交叉替代试验表明,它们具有通用性。

巴西橡胶树胶乳酵母双杂交cDNA表达文库的构建及分析

提取巴西橡胶树胶乳总RNA,并纯化mRNA.采用特异引物（oligo-dT）反转出第一链DNA,经LDPCR合成第二链DNA.将ds cDNA和经Sma Ⅰ线性化的pGADT7-Rec质粒共转化Y187酵母菌,构建酵母双杂交cDNA表达文库.结果表明,转化单菌落个数为2.8 ×107;文库滴度为4.92×107·mL-1;插入片段大小主要分布于500 ～2 000 bp间;重组率为96％.实验数据表明该文库能满足后续的杂交筛选.

资源型企业产业转型的三个视角

本文从政府、企业家和职工三个角度分析了资源型企业在资源枯竭后产业转型所面对的问题,重点剖析了国家和各级政府应该承担的责任,强调了企业家的重要性,提出资源型企业产业转型要发挥职工的积极性和创造性。

马立克氏病病毒Ribozyme基因的合成克隆和表达质粒的构建

本研究根据Ribozyme的结构特点,针对马立克氏病病毒B抗原基因组,设计并合成了一个486P的DNA片段。将它于能在哺乳动物细胞中进行调控表达的载体质粒pXMT重组,经对转化子分子大小和核酸内酶切酶消化结果分析比较,鉴定出2个重组子,其体内的生物学功能正在鉴定之中。

对风险及其相关概念的辨析

目前我国企业所处的经营环境越来越复杂多变，市场竞争日益激烈，对外开放程度不断加深，科技进步的持续加快，企业家经营企业的不确定性变得越来越大，对风险的敏感程度也越来越强。近几年来，企业风险管理的研究和推广已成为我国企业管理界的热点之一。文章深入分析了风险的不同定义在描述角度上的差异，在此基础上对风险及企业风险的概念进行了辨析。

企业风险的分类控制

现代企业面临的主要风险可分别从风险管理、信息披露和报告以及保险等角度进行分类。企业只有把风险分类的概念框架和企业实际结合起来,才能识别企业特有的风险,才能进行风险的分类控制和风险责任落实。企业风险的分类控制需要借鉴COSO的做法,建立风险管理总体框架,保证企业风险分类控制的规范化和制度化。

从制造大国到制造强国——日本质量管理模式的成功及启示

日本是中国的邻国，自上个世纪50年代，日本以质量管理为突破口，不断提高国际竞争力，经济得以快速成长并进入发达国家行列。日本质量管理模式的成功，在20世纪80年代曾引发了世界范围内的质量管理热，对我国的质量管理也产生了重大影响。今天，我国制造业占整个世界的份额越来越大，如何进一步提高我国制造业的国际竞争力，完成由制造大国向制造强国的转变，已成为政府和企业家关切的重大课题。

项目投资评价中如何选择贴现率

项目投资评价的两个关键参数是预期现金流量和贴现率。在能够正确估计未来现金流量的假设下，贴现率对项目投资评价的结论起着决定性的作用。项目投资的风险是客观存在的，投资者期望的报酬率包含需要进行风险补偿的报酬率。但如何计量风险？如何把风险转换成风险报酬进而确定一个合适的贴现率，目前还没有通用的方法。本文试图对项目投资评价中经常使用的贴现率指标进行分析和评价，探讨贴现率选择的思路。

浅析现代企业危机频发的成因

文章分析了现代企业危机频发的成因，归纳和总结了现代企业面临的主要风险，对企业风险向危机转化的机制进行了初步的研究。

剑麻内参基因筛选与稳定表达分析

为了筛选剑麻中稳定表达的内参基因,保证基因表达结果的可靠性,本研究以热麻1号为材料,采用实时荧光定量RT-PCR方法对来自剑麻转录组数据的8个内参基因(EF1α、MADH、ACT2、GAPDH、TUB、ACT54、CYP和EF1β)在烟草疫霉侵染、水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)和脱落酸(ABA)处理过程中的表达水平进行检测,并结合GeNorm、BestKeeper和NormFinder软件综合评价8个内参基因的稳定性。结果表明:8个内参基因在不同处理下的表达稳定性存在显著差异,其中在烟草疫霉侵染和茉莉酸甲酯处理过程中,EF1α表达最稳定,EF1β表达最不稳定。在水杨酸处理过程中,EF1α表达最稳定,ACT2表达最不稳定。在脱落酸处理过程中,GAPDH表达最稳定,ACT54表达最不稳定。该结果为剑麻基因的表达分析提供了可供选择的内参基因。

以资源为基础的企业战略理论——源流和方向

20世纪80年代中期以后，经济学和管理学界兴起了一股研究企业资源和能力的热潮，诞生了资源和能力是企业超额利润源泉的经营观念即资源基础观。资源基础观学说的基本结论是：（1）企业资源的差异派生了效率的差异；（2）资源的差异是相对稳定的。对于企业战略来说，这意味着只有获取特殊的资源才能产生较高的经营效率和效益。资源基础理论产生以后，以不同的资源概念为基础发展出了多个分支，各有其独特的理论架构。本文的目的是对资源基础理论的各个分支进行梳理，阐明他们之间逻辑关系，分析资源基础理论今后的发展方向。

剑麻EST-SSR在丝兰麻和中美麻中的通用性分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对剑麻‘H.11648’中的100对SSR引物在丝兰麻和万年兰中的通用性进行分析,同时构建DNA指纹图谱。结果表明100对SSR引物,在龙舌兰属、丝兰麻属、中美麻属中分别有68对、52对和52对SSR引物扩增出目标产物条带,扩增产物所占比例分别为68%、52%和52%,多态性引物分别为18对、12对和9对,多态性引物所占比例分别为29.51%、23.08%和17.31%。检测位点数分别为76、44和40个,平均每对引物多态位点数分别为2.67、2.42和2.22个。引物C67656和C61418可将龙舌兰属的6份种质区分开来,引物C65059可将丝兰麻属的5份种质区分开,引物C24110可将中美麻属的4份种质区分开。以上研究结果表明,从‘H.11648’开发的SSR引物在龙舌兰及其近缘属中是可以通用的,筛选出的SSR引物可用于龙舌兰及其近缘属种质资源的鉴定和遗传多样性分析等研究。

巴西橡胶树一个新的法尼基焦磷酸合酶基因的克隆及表达分析

利用同源克隆的方法在橡胶树中获得一个新的法尼基焦磷酸合酶基因,命名为Hb FPS2。序列分析显示,Hb FPS2基因组序列长4 171 bp,由12个外显子和11个内含子组成,c DNA全长1 288 bp,包含1 029 bp的开放阅读框、105 bp的5′-UTR和154 bp的3′-UTR,编码342个氨基酸,推测分子量为39.6 ku,等电点为5.27。氨基酸序列比对显示,Hb FPS2具有FPS家族保守的5个结构域。进化分析结果表明,Hb FPS2和Hb FPS1亲缘关系最近,与大戟科的蓖麻、大戟、麻风树法尼基焦磷酸合酶聚为一个亚类。定量PCR结果表明,Hb FPS2在橡胶树根、树皮、叶、花和胶乳等组织中均有表达,在花和胶乳中表达量较高,在根中表达量最低;茉莉酸和乙烯处理均能提高Hb FPS2基因的表达量,处理9 h时基因表达量分别提高了36倍和8倍。结果为分析法尼基焦磷酸合酶基因表达特性及其在天然橡胶生物合成途径中的作用机制奠定基础。