EBM联合CPC在《中医全科医学概论》教学中的应用

目的探讨在《中医全科医学概论》教学中融入EBM和CPC中的应用效果。方法选取本校2019级中医学(全科方向)65名学生作为研究对象,课程中融入EBM和CPC,课程结束后发放调查问卷。结果回收有效问卷50份。通过描述统计对“融入循证医学的必要性”“增加课程趣味性和实用性”“提高解决临床问题的能力”等问卷条目进行分析,结果显示平均值均接近4,说明50位同学对《中医全科医学概论》课程融入循证医学内容比较认可。在课程融入社区卫生实践必要性层面,72%学生认为有必要融入社区卫生实践。他们认为增加实践,首先可以了解社区卫生服务情况(88%),其次也可以增加感官认知(74%)。结论《中医全科医学概论》融入EBM和CPC值得进一步研究应用。

萆菟汤联合脐疗治疗湿热瘀滞型慢性前列腺炎临床研究

目的观察全国名老中医徐福松教授所创萆菟汤联合脐疗治疗湿热瘀滞型慢性前列腺炎(chronic prostatitis,CP)的临床疗效。方法运用随机数字法将收治的60例湿热瘀滞型CP患者分为两组,每组各30例。治疗组运用萆菟汤联合脐疗药物治疗;对照组运用萆菟汤联合脐疗安慰治疗,两组均连续治疗8 w。8 w后通过对比治疗前后CP中医主要症状评分、次要症状评分、NIH-CPSI评分,统计分析两组临床疗效、评分变化以及安全性。结果治疗组总有效率为93.33%,对照组总有效率为86.67%,有统计学意义(P<0.05)。两组组内比较治疗前后中医主要症状评分、次要症状评分、NIH-CPSI评分均有统计学意义(P<0.05)。组间比较在会阴小腹疼痛、前列腺压痛两项主要症状指标,性功能这项次要症状指标,NIH-CPSI评分疼痛指标,治疗组优于对照组,有统计学意义(P<0.05);在小便赤涩、尿后滴白、阴囊潮湿、排尿方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论萆菟汤联合脐疗治疗湿热瘀滞型CP可明显改善患者中医主次要症状评分及NIH-CPSI评分,特别是在改善疼痛方面有优势,值得临床推广研究。

薯蓣丸对溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用

目的探讨薯蓣丸对3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液诱导的溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及对白介素-6(IL-6)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化信号转导和转录激活因子3(pSTAT3)的影响。方法将50只SD小鼠随机分为对照组、模型组、美沙拉嗪组(0.4 g/kg),中药低、高剂量组(9.3,37.2 g/kg),采用3%DSS诱导溃疡性结肠炎模型,对应给予生理盐水、美沙拉嗪,低、高剂量中药汤剂灌胃治疗14 d,采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理学改变,蛋白免疫印迹(Western blot)法测定结肠组织STAT3、pSTAT3的表达,免疫组化(IHC)法检测结肠组织IL-6的表达,实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测结肠组织STAT3的表达。结果与对照组相比,模型组黏膜层变薄,未见明显的坏死,固有层的杯状细胞数量轻度减少,固有层底部偶见淋巴细胞浸润,肌层未见明显异常,小鼠结肠组织IL-6蛋白水平表达升高。与模型组比较,中药各剂量组和美沙拉嗪组结肠组织炎症减轻,小鼠结肠组织IL-6蛋白表达水平下降。在STAT3的表达水平中,中药各剂量组和美沙拉嗪组均高于模型组。在pSTAT3的表达水平时,中药高剂量组和美沙拉嗪组均高于模型组。qPCR技术检测结果显示,高剂量中药组和美沙拉嗪组STAT3较模型组有所上调。结论薯蓣丸,尤其是高剂量(37.2 g/kg)时,可能通过降低IL-6表达,提高STAT3、pSTAT3水平改善溃疡性结肠炎。

磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路介导葛根素改善缺氧复氧损伤的作用及机制

目的:探讨磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路介导葛根素改善缺氧复氧损伤的作用及机制。方法:应用噻唑蓝法筛选出合适的葛根素以及PI3K抑制剂LY294002干预人脐静脉内皮细胞EA.hy926的浓度。分为对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧+葛根素组(葛根素组),缺氧复氧+葛根素+LY294002处理组(葛根素+抑制剂组),每组均设3个复孔。应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测葛根素预处理细胞后以及葛根素预处理细胞的同时加入LY294002后对B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)、活化天冬氨酸蛋白水解酶-9(cleaved caspase-9)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)、Akt蛋白表达的影响。应用实时荧光定量PCR检测葛根素预处理对EA.hy926细胞缺氧复氧后天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)和Bcl-2信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。应用Hoechest染色检测葛根素预处理对EA.hy926细胞凋亡的影响。结果:葛根素(10^(-7)mol/L)明显升高缺氧复氧后EA.hy926细胞活力(P<0.001),并显著上调Bcl-2蛋白水平的表达,下调Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白水平的表达(P均<0.01)。与缺氧复氧组相比,葛根素预处理后,p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。加入LY294002(10μmol/L)后p-Akt蛋白表达水平下降,且抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下降,促凋亡蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax的表达水平升高(P均<0.01)。结论:葛根素对缺氧复氧诱导的EA.hy926细胞凋亡具有抑制作用,其抑制作用可能与其对PI3K/Akt信号通路的调控有关。

维生素D对乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞凋亡的影响

目的:探究维生素D对人乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测维生素D对乳腺癌SUM159细胞活力的影响;Hoechst33258染色检测维生素D对乳腺癌SUM159细胞凋亡的影响;实时定量PCR法检测维生素D对乳腺癌SUM159细胞凋亡相关分子Bax和Bcl-2 mRNA表达水平的影响;无血清悬浮培养法(serum-free medium,SFM)富集乳腺癌干细胞,显微镜下观察维生素D对乳腺癌干细胞球大小和数量的影响;实时定量PCR法检测维生素D对乳腺癌干细胞凋亡相关分子Bax、Bcl-2 mRNA表达水平的影响。结果:MTT法检测结果显示,维生素D可显著抑制乳腺癌细胞活力,且随着维生素D浓度升高,乳腺癌SUM159细胞活力的下降具有一定的剂量依赖效应,单因素方差分析显示,差异具有统计学意义(P<0.01);Hoechst33258染色结果显示,维生素D可诱导乳腺癌SUM159细胞发生细胞凋亡形态改变;进一步PCR法检测结果显示,维生素D可显著上调乳腺癌SUM159细胞促凋亡蛋白Bax mRNA的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达,单因素方差分析显示,差异具有统计学意义(P<0.01)。SFM培养可有效富集乳腺癌干细胞,维生素D干预可明显抑制SFM富集的乳腺癌干细胞球的大小和数量,且与对照组相比,维生素D可显著上调乳腺癌干细胞球Bax mRNA的表达水平,下调Bcl-2 mRNA的表达水平,单因素方差分析显示,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:维生素D可抑制乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞活力,诱导乳腺癌细胞凋亡。

维生素D调控Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌干细胞活性

目的探讨维生素D对乳腺癌干细胞活性的影响及其可能的作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度(1 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L)维生素D对乳腺癌SUM159细胞活力的影响,用无血清培养基悬浮培养富集乳腺癌干细胞CSCSUM159,分析维生素D对乳腺癌干细胞活性的影响。Western blot和Real-time qPCR 分别检测乳腺癌干细胞标志物CD133、CD44、Oct-4、Nanog以及Wnt/β-catenin信号通路相关分子p-GSK-3β、β-catenin、c-Myc和cyclin-D1的表达。结果 MTT法检测结果显示,1 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L维生素D均可显著抑制乳腺癌SUM159细胞的活力(P<0.01)。无血清悬浮培养可有效富集乳腺癌干细胞CSCSUM159。维生素D可使乳腺癌干细胞CSCSUM159的成球数量减少,且细胞成球大小较对照组小。Western blot和Real-time qPCR检测结果显示,维生素D干预后,乳腺癌干细胞CSCSUM159中CD133、CD44和Nanog的蛋白表达下调,Wnt/β-catenin信号通路相关分子p-GSK-3β、β-catenin和c-Myc蛋白表达及β-catenin、c-Myc和cyclin-D1 mRNA表达亦下调(P<0.05)。结论维生素D可抑制乳腺癌干细胞活性,可能与其调控Wnt/β-catenin信号通路活性有关。

薯蓣丸治疗溃疡性结肠炎理论探微

西药治疗溃疡性结肠炎存在一定的局限性,近年来本病的中医药治疗显示出一定的优势,成为研究热点。该文结合中医理论和现代医学现有研究成果,分析《金匮要略》经典方薯蓣丸治疗溃疡性结肠炎的理论基础,提示应用薯蓣丸治疗溃疡性结肠炎的可能性。

辣椒素对前列腺癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:观察辣椒素对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:MTT法检测辣椒素对前列腺癌细胞活力的影响;显微镜下观察辣椒素干预对PC-3细胞数量及形态的影响;细胞划痕法观察不同浓度(1、5、10μmol/L)辣椒素在不同时间段(24、48 h)对前列腺癌PC-3细胞迁移的影响;Hoechst 33258荧光染色法检测前列腺癌细胞凋亡水平;Western Blot和实时荧光定量PCR法检测辣椒素干预对前列腺癌细胞增殖、凋亡及迁移相关mRNA及蛋白表达的影响。结果:MTT法检测结果显示,辣椒素可显著抑制前列腺癌细胞的活力(P<0.05或P<0.01);显微镜下观察到辣椒素干预可显著降低前列腺癌细胞的存活数量及细胞活力(P<0.05或P<0.01);细胞划痕实验结果显示,与对照组比较,1、5、10μmol/L辣椒素处理组细胞划痕愈合率显著降低(P<0.01);Hoechst染色实验结果显示,辣椒素各组前列腺癌细胞的细胞核染色质浓缩现象增加,细胞凋亡增多;Western Blot结果显示辣椒素可显著下调PC-3细胞CyclinD1、PCNA、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达,上调P21、Bax、E-cadherin、ZO-1蛋白表达(P<0.05或P<0.01);实时荧光定量PCR结果表明不同浓度辣椒素干预后前列腺癌细胞Bax mRNA表达显著升高,Bcl-2 mRNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:辣椒素可抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移能力,促进前列腺癌细胞凋亡。

NF-κB信号通路介导羟基红花黄色素A减轻TNF-α诱导的内皮细胞EA.hy926损伤作用研究

目的:探讨羟基红花黄色素A对人重组肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞EA.hy926炎症反应和氧化应激的干预作用及其可能机制。方法:培养原代细胞株EA.hy926,采用不同浓度TNF-α(0μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)、20μg·L^(-1)、50μg·L^(-1))干预EA.hy926细胞建立细胞损伤模型,并采用不同浓度羟基红花黄色素A(0.1μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1))进行干预,CCK-8法检测细胞活力;Hoechest染色检测细胞凋亡情况;硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量;ELISA法检测细胞上清液中内皮素-1(endothelin-1,ET-1)含量;Western Blot法检测E-选择素(E-selectin)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、细胞间黏附因子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附因子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)以及核转录因子-κB(nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)信号通路相关蛋白的表达水平;RT-qPCR检测SOD mRNA、CAT mRNA、GSH-px mRNA的表达水平。结果:羟基红花黄色素A能明显提高TNF-α诱导后内皮细胞的活力(P<0.01),抑制细胞凋亡,增加NO释放(P<0.01),并减少ET-1含量(P<0.01),显著降低E-selectin、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1、p-IκB-α及细胞核中P65、P50的蛋白表达水平(P<0.05),显著升高细胞中SOD mRNA、CAT mRNA、GSH-px mRNA及IκB-α蛋白表达水平(P<0.05),显著升高细胞胞浆中P65、P50的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:羟基红花黄色素A对TNF-α诱导的EA.hy926细胞炎症反应和氧化应激具有改善作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路活化有关。

羟基红花黄色素A对内皮细胞EA.hy926缺氧复氧后凋亡的抑制作用研究

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对缺氧复氧诱导的人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测不同缺氧(8、12h)、复氧(4、8、12h)时间对细胞活力的影响以及不同浓度HSYA(0.1、1、10、100μmol/L)对缺氧12h、复氧8h后细胞活力的影响。Western blotting法检测HSYA对缺氧12h,复氧8h后EA.hy926细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9蛋白表达的影响。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HSYA对缺氧12 h复氧8 h后EA.hy926细胞中Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响。Hoechest染色、流式细胞术检测HSYA对缺氧12 h复氧8 h后EA.hy926细胞凋亡的影响。结果与对照组比较,缺氧8、12h,复氧4、8、12h后EA.hy926细胞活力均显著下降,其中缺氧12 h、复氧8 h后细胞活力下降最为显著(P<0.001),且Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著上升、Bcl-2蛋白表达水平显著下降。与模型组比较,HSYA 10μmol/L能够明显提高缺氧复氧后细胞活力(P<0.01),并显著上调Bcl-2蛋白表达水平,下调Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结论HSYA能有效抑制缺氧复氧导致的EA.hy926凋亡,其机制可能与下调Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达、上调Bcl-2蛋白表达有关。

线上线下混合式教学在基础医学课程中的融合实践研究

基础医学课程多,知识点多,在线上线下混合式教学中也存在一些共性问题,如线上教学方式较单一、线上教学在教学设计中连贯性中断、线下教学占比较重等。文章研究了线上线下混合式教学在基础医学课程中的融合实践,针对共性问题提出以下对策:采取多样化的线上线下混合式教学模式;优化教学内容,构建完整的线上线下教学设计;以学生为中心,注意学生评估反馈和教学反思,为全方位培养医学、护理、药学专业人才奠定基础。

莱菔硫烷对乳腺癌干细胞增殖影响

目的莱菔硫烷具有很好抑制肿瘤生长的作用,关于其抗肿瘤的机制尚不明确。本研究旨在观察莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对乳腺癌干细胞(cancer stem cell SUM159,CSCSUM159)增殖的影响。方法实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)、蛋白质印迹法检测无血清培养基(serum-free medium,SFM)悬浮培养是否促进乳腺癌细胞的干性标志物Nanog、C-myc、CD44和CD133的表达;MTT、CCK8法分别检测不同浓度SFN对血清培养(serumsupplemented medium,SSM)的SUM159和SFM培养的CSCSUM159活力的影响;蛋白质印迹检测不同浓度SFN对CSCSUM159分子标志物Nanog、C-myc、CD44、CD133以及肿瘤干细胞增殖相关蛋白PCNA、p21、Cyclin D1表达水平的影响。结果 SFM悬浮培养可以明显促进CSCSUM159干性标志物的蛋白表达水平,其中SSM和SFM组Nanog蛋白相对含量为1.00±0.02和3.00±0.08,t=-40.093,P<0.001;C-myc蛋白相对含量为1.00±0.05和1.40±0.01,t=-14.900,P<0.001;CD44蛋白相对含量为1.00±0.04和1.20±0.02,t=-7.105,P<0.001;CD133蛋白相对含量为1.00±0.02和1.55±0.02,t=-35.389,P<0.001。同时,SSM和SFM组的Nanog mRNA分别为1.02±0.23和7.00±1.07,t=-9.51,P=0.001;C-myc mRNA分别为1.00±0.01和4.93±0.50,t=-13.52,P=0.005;CD44mRNA分别为1.20±0.53和4.78±0.53,t=-8.226,P=0.001;CD133 mRNA分别为1.29±0.85和3.2±1.24,t=-3.320,P=0.045。SUM159经1×10^(-7)、1×10^(-6)和1×10^(-5) mol/L的SFN干预72h后,MTT法检测结果显示,Control组以及不同浓度SFN处理组的细胞相对活力分别为(100±8.91)%、(89.77±10.70)%、(70.47±9.67)%和(51.26±4.50)%,差异有统计学意义,F=36.278,P<0.001。CSCSUM159经2、5和10μmol/L SFN干预72h后,CCK8法检测结果显示,乳腺癌干细胞相对活力分别为(101±5.42)%、(91.39±12.91)%、(64.96±12.46)%和(52.66±0.02)%,差异有统计学意义,F=19.008,P<0.001。与Control组比较,SFN可明显诱导CSCSUM159细胞活力的下降,下调肿瘤干细胞分子标志物Nanog、C-myc、CD44和CD133的表达,其中Control组以及2、5、10μmol/L SFN处理组的干细胞分子标志物的蛋白相对表达量,CD133分别为1.00±0.04、0.96±0.02、0.72±0.002和0.68±0.01,CD44分别为1.00±0.00、0.92±0.03、0.92±0.01和0.77±0.01,C-myc分别为1.00±0.02、0.94±0.00、0.68±0.02和0.45±0.01,Nanog分别为1.00±0.03、0.68±0.02、0.79±0.03和0.31±0.01。单因素方差分析结果显示,与Control组相比,差异均有统计学意义,F_(CD133)=136.390,P<0.001;F_(CD44)=96.200,P<0.001;F_(C-myc)=944.172,P<0.001;F_(Nanog)=481.447,P<0.001。结果还表明,不同浓度SFN处理肿瘤干细胞后,对肿瘤增殖相关因子PCNA、Cyclin D1以及p21具有明显的调节作用,其中Control组以及经2、5、10μmol/L SFN处理组的PCNA、Cyclin D1、p21蛋白表达量,PCNA分别为0.99±0.20、0.98±0.02、0.87±0.01和0.66±0.02;Cyclin D1分别为1.00±0.00、0.64±0.01、0.53±0.03和0.57±0.02;p21分别为1.00±0.01、2.14±0.10、5.05±0.19和4.59±0.14。单因素方差分析显示,与Control组比较,差异均有统计学意义,F_(PCNA)=222.209,P<0.001;F_(Cyclin D1)=389.355,P<0.001;F_(p21)=662.717,P<0.001。结论SFN可以抑制乳腺癌干细胞的增殖,其机制可能与其下调肿瘤干细胞分子标志物Nanog、C-myc、CD44、CD133和下调PCNA、Cyclin D1,上调p21的表达有关。