剪切速率对水泥胶结钙质砂强度及变形的影响

为探究剪切速率对水泥胶结钙质砂强度及变形的影响,对钙质砂展开6种剪切速率、4种胶结度双变量的直剪试验.结果表明:水泥胶结钙质砂随着剪切速率的提升,抗剪强度呈先减后增的趋势.随胶结度的增加,抗剪强度呈逐渐上升的趋势,但较低胶结度下的抗剪强度略低于无胶结状态下的抗剪强度.在抗剪强度指标方面,随着剪切速率或胶结度的增加,黏聚力都呈上升趋势,内摩擦角呈下降的趋势.在变形方面,水泥胶结钙质砂在低法向应力更易呈现先剪缩后剪胀的形式;而在较高的法向应力,易呈现剪缩形式,但随着剪切速率的增大,剪缩程度减弱.

胎儿真皮间充质干细胞中的全能性相关转录因子的表达

背景:人真皮纤维母细胞或间充质干细胞可形成诱导性多能干细胞,但不同研究者所用的转录因子组合却并不相同。目的:分离人胎儿真皮间充质干细胞,检测其全能性相关转录因子的表达。方法:水囊引产5月龄胎儿,按照既往分离培养间充质干细胞的方法,得到胎儿真皮间充质干细胞。结果与结论:胎儿真皮间充质干细胞高表达Oct4和C-myc、中度表达Sox2,是形成诱导性多能干细胞较好的体细胞。

牙胚组织中可分离得到大量间充质干细胞

背景:已经有研究从牙髓、牙囊和牙周组织中分离得到间充质干细胞。牙胚是牙的前体,能否从中直接分离间充质干细胞,目前未知。目的:从人流产胎儿牙胚中分离间充质干细胞,检测其生物学特征。方法:无菌条件下挖出水囊流产胎儿牙床中的整个牙胚,剪碎后分别用胶原酶Ⅱ和胰酶消化,过滤除去颗粒物后,细胞悬液用培养液洗涤,培养、扩增得到贴壁细胞,进行细胞形态学观察、免疫表型测定和多向分化功能鉴定。结果与结论:经过3次传代后,从单个胎儿牙胚中即可获得超过107形态均匀的、梭形贴壁细胞,其表达CD105、CD73、CD90和CD44等表面标志,不表达CD34、CD45标志;在体外向成骨、成脂分化,在体内可以分化为软骨细胞。提示用贴壁法可从人胎儿牙胚中分离得到大量的间充质干细胞。

造血干细胞的研究进展

造血干细胞具有自我更新和多向性分化潜能,尤其神经干细胞移植后能产生各种血细胞类型以及CD34^-Lin^-细胞群体,经HESS-5基质细胞滋养并补充生长因子,转换得到CD34^+,SRC检测人-鼠造血干细胞异体移植重建造血,为进一步认识和研究干细胞创建新开端。

脐带间充质干细胞体外分化为有功能的低免疫原性肝细胞样细胞

目的观察人脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)体外诱导分化为肝细胞样细胞(DHC)后,是否具有肝细胞的生物学特性和功能,以及其免疫原性的变化。方法采用改良的二步法肝细胞分化培养体系体外诱导UC-MSCs向肝细胞分化,并用RT-PCR和免疫荧光染色法检测诱导后不同时间DHC肝细胞特异性标记的表达;采用ELISA法检测细胞培养液中白蛋白(ALB)和尿素的浓度,以及混合淋巴细胞培养检测DHC对淋巴细胞增殖能力的影响。结果 UC-MSCs低表达甲胎蛋白(AFP)、ALB和细胞角蛋白-19(CK-19)的mRNA和蛋白,成肝诱导分化后14和28dDHC均高表达肝细胞标志AFP、ALB、CK-19以及色氨酸2,3-加双氧酶基因。诱导后的DHC能够以时间依赖方式产生ALB和分泌尿素,不表达人白细胞DR抗原,而且能够抑制淋巴细胞增殖。结论 UC-MSCs在体外能够分化为有功能的DHC且具有低免疫原性的特征。

IL-27通过信号通路p38 MAPK和PI3K途径调节中性粒细胞Mac-1、fMLP-R及IL-1β表达

本研究探讨IL-27调节人外周血中性粒细胞中黏附分子Mac-1、趋化因子受体fMLP-R和促炎因子IL-1β表达的信号通路。采用Ficoll密度梯度离心及低渗裂解残存红细胞方法分离高纯度的外周血中性粒细胞。用RT-PCR方法检测中性粒细胞IL-27受体(WSX-1/TCCR和gp130)mRNA表达。分别应用IL-27及信号通路p38 MAPK、PI3K和ERK抑制剂SB203580、LY294002、U0126处理中性粒细胞,用实时定量RT-PCR检测作用前后fMLP-R和IL-1βmRNA水平变化;应用放射免疫法检测作用前后培养上清液中IL-1β的水平变化;流式细胞术检测作用前后Mac-1表达水平变化。结果表明:人外周血中性粒细胞协同表达IL-27受体的两个亚单位WSX-1/TCCR和gp130,IL-27下调中性粒细胞表面黏附分子Mac-1表达(p<0.05),SB203580阻断了IL-27对Mac-1的下调作用(p<0.05),而LY294002及U0126无阻断作用(p>0.05)。相反,IL-27上调中性粒细胞中fMLP-R和IL-1βmRNA的表达并能增加IL-1β释放(p<0.05),LY294002阻断了IL-27对fMLP-R和IL-1β的上调作用(p<0.05),而SB203580及U0126无阻断作用(p>0.05)。结论:IL-27与IL-27R相互作用,可能通过p38 MAPK和PI3K信号途径调节人外周血中性粒细胞中Mac-1、fMLP-R及IL-1β表达。

人骨髓间充质干细胞在体内外分化为心血管组织

目的验证人骨髓间充质干细胞(MSC)分化为心血管组织的潜能。方法用5-氮胞杂苷诱导MSC向心肌细胞分化,用VEGF-B诱导向血管内皮细胞分化。异丙肾上腺素法制成NOD/SCID小鼠心肌损伤模型,经尾静脉注入标记的MSC。免疫荧光法检测MSC的体内、外分化。结果在体外,经诱导的MSC表达肌凝蛋白重链和肌钙蛋白I,表达Ⅷ因子相关抗原和CD31。在体内,标记的MSC表达阳性的肌凝蛋白重链和Ⅷ因子相关抗原。结论MSC可分化为心肌和血管内皮细胞,是再生医学的理想种子细胞。

TGF-β1对成人骨髓CD105^+间充质干细胞增殖与分化的影响

目的分离并鉴定成人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),研究TGFβ1对骨髓MSCs增殖与分化的影响。方法分离成人骨髓单个核细胞;MACS磁珠分选CD105+细胞;FACS检测其免疫表型;诱导分选的CD105+细胞向脂肪及成骨细胞分化,油红O染色、VonKossa染色及RTPCR检测脂肪细胞及成骨细胞;观察TGFβ1对分选出的CD105+细胞分化与增殖的影响;免疫荧光染色检测诱导后的脂肪细胞CD105的表达情况;MTT法检测TGFβ1对CD105+细胞增殖的影响。结果成人骨髓来源的CD105+细胞体外可向脂肪及成骨细胞分化;在向脂肪细胞分化过程中,加入1～50ng/mLTGFβ1后,成脂诱导体系中无脂肪细胞出现;在向成骨诱导过程中,加入20ng/mLTGFβ1后,钙化基质沉淀明显降低;在脂肪诱导体系中,MTT染色检测显示TGFβ1对CD105+细胞的增殖有明显促进作用(P<0.05)。结论TGFβ1抑制成人骨髓源CD105+MSCs向脂肪及成骨细胞分化,在向脂肪诱导过程中,TGFβ1促进MSCs的增殖。

一种高效诱导胚胎胰腺细胞分化为内分泌细胞培养方法的建立

目的建立一种使胚胎胰腺细胞体外高效分化为成熟内分泌细胞的培养方法。方法体外分离小鼠12.5 d的胚胎胰腺,培养于下层为培养基的漂浮膜上7 d,采用免疫组织化学方法检测胰腺祖细胞标志胰腺十二指肠同源盒基因1(PDX-1)和神经源素3(Ngn3)的表达及内、外分泌细胞的标志胰岛素、胰高血糖素、羧肽酶表达,定量PCR检测培养过程中胰腺标志表达的变化。结果胚胎胰腺培养1 d后,有大量胰腺祖细胞标志表达,且这些胰腺祖细胞处于增殖状态。培养3 d后,仍有胰腺祖细胞的标志大量表达。培养7 d后,分化的胰腺表达成熟内、外分泌细胞的标志,且胰腺标志的表达与体内表达模式一致。结论建立了一种使胚胎胰腺细胞体外高效分化为成熟内分泌细胞的培养方法。

Flk1^+间充质干细胞减轻四氯化碳导致的肝纤维化的研究

许多慢性肝脏疾病都会发生肝纤维化,但是目前尚缺乏对肝纤维化切实有效的治疗手段。实验发现,Flk1(fetalliverkinase)阳性间充质干细胞(MSC)能够减轻四氯化碳(CCl4 )所致小鼠肝纤维化。取雄性BALB c小鼠骨髓,分离培养Flk1+ MSC ,用CCl4 制作雌性小鼠肝纤维化模型,在CCl4 损伤后立即或1周后经尾静脉注射Flk1+ MSC ,2或5周后检测受体小鼠肝脏的纤维化程度和供体细胞的植入。结果发现,CCl4 损伤后立即注射Flk1+ MSC ,可以使肝脏损伤程度明显减轻,减少胶原沉积,使肝脏羟脯氨酸含量及血清纤维化指标显著下降;而损伤1周后注射细胞则无明显变化。免疫荧光、PCR和荧光原位杂交方法证实,在受体肝脏中有供体细胞植入,呈上皮细胞形态,并表达白蛋白,但是数量很少。因此,Flk1+ MSC具有潜在的植入肝组织的能力,并可能启动肝组织的内源性修复,减轻CCl4 导致的肝纤维化。

微载体支持体外造血研究

为了探索体外维持造血干细胞自我更新潜能 ,抑制过度分化以及大量扩增造血细胞的技术 ,我们将小鼠骨髓基质细胞贴附于微载体上 ,再接种小鼠骨髓造血细胞共同培养 (G2组 )。在此基础上 ,用海藻酸钠包埋微载体基质细胞和造血细胞制成凝胶珠进行培养 (G1组 ) ;设置单纯微载体基质细胞 (G3组 )和单纯骨髓细胞 (G4组 )培养作为对照。对比观察 ,显微摄影 ,计数细胞总数、CFU GM集落数和CD34阳性细胞百分率。培养 2周观察到造血细胞粘附在微载体基质细胞上或龛在微载体基质细胞间并形成造血灶。 3次实验结果显示 ,G2组CFU GM集落总数显著高于G4组 ,同时也显著高于G3加G4组集落总数之和 (t=6.5 5 3和t =5 .4 94 ;P <0 .0 5 ) ;G2组CD34+ 细胞百分率高于其他各组 ,与CFU GM测定结果趋向一致。实验表明 ,微载体基质细胞有较好的支持体外造血的效果 ,至少可维持 4周 。

用组织块培养法从骨髓滤网颗粒物中分离大量骨髓间充质干细胞

本研究探讨能否从废弃的骨髓滤网颗粒物中获得间充质干细胞(MSC)。应用组织块培养法,对2例正常供者骨髓滤网中的颗粒物进行分离培养,计数获得的MSC数量,对其表型和分化能力进行鉴定。结果表明:骨髓滤网颗粒物中存在大量的MSC,经过3代扩增后其数量接近107;这些细胞具有典型的MSC形态和表型特征,可以分化为骨、软骨和脂肪细胞。结论:用组织块培养法可以从骨髓滤网颗粒物中获得大量MSC。

胎儿和成人骨髓间充质干细胞体外造血支持能力的比较(英文)

胎儿出生以后,造血干细胞(HSC)才从胎儿的肝脏和脾脏转移到骨髓,这一过程可能由不同的造血微环境中的信号分子所介导。间充质干细胞(MSC)是骨髓微环境中间质细胞如成骨细胞、内皮细胞的前体祖细胞。研究者推测,胎儿出生前的骨髓可能并不特别适合HSC生长。然而,该假说尚缺乏直接的证据支持。本研究通过对胎儿和成人骨髓MSC的造血支持能力进行比较,拟为此提供证据。成人骨髓MSC来源于3位健康供者,胎儿骨髓MSC来源于孕19-20周流产的胎儿。MSC辐照后与CD34+一起进行长期培养启动细胞分析,计数克隆形成细胞的数量,流式分析培养后CD34+的表型变化。RT-PCR分析两种MSC中细胞因子的表达。结果显示,成人骨髓MSC比胎儿骨髓MSC具有更强的造血支持能力,两者都促进CD34+向髓系细胞分化,两者之间细胞因子的表达存在差异。结论:与胎儿骨髓MSC相比,成人骨髓MSC在某些治疗,尤其是促进造血恢复方面具有更广泛的应用前景。

地塞米松促进胎儿主动脉血管CD_(105)^+间充质干细胞向脂肪细胞分化

目的 :研究来自胎儿血管壁内的CD10 5+ 细胞是否具有间充质干细胞的特性 ,地塞米松是否促进其向脂肪细胞分化。方法 :免疫组化检测CD10 5阳性的细胞在胎儿主动脉分布 ,分离主动脉血管的成纤维样细胞 ,流式细胞仪检测细胞免疫表型 ,并接种在脂肪分化和成骨分化的诱导培养液中培养 ,油红O和VonKossa染色及透射电镜鉴定脂滴和钙化基质沉淀的形成。结果 :CD10 5阳性的细胞分布在主动脉血管内膜的内皮细胞 ,部分中膜和外膜。分离到的细胞CD10 5、CD10 6、CD2 9、CD4 4阳性 ,CD34、CD31、CD11a、CD11b、HLA -DR为阴性。油红O和VonKossa染色分别显示脂滴和钙化基质形成。电镜下诱导的脂肪细胞胞浆中可见有包膜脂滴 ,诱导的成骨细胞胞浆内外电子密度高的钙盐沉积。诱导液中无地塞米松 ,未见含大脂滴的脂肪细胞。结论 :分离到主动脉壁CD10 5+ 细胞具有间充质干细胞的特性 ,并且地塞米松促进其向脂肪细胞分化 。

再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞对CD4^-细胞功能的影响

目的探讨再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)对正常CD4-细胞功能的影响。方法采集和分离15例AA患者和10例正常人BM-MSCs进行体外培养。倒置显微镜结合荧光共聚焦显微镜观察BM-MSCs的形态和生长情况,流式细胞术检测免疫表型,诱导BM-MSCs成骨和成脂,综合进行BM-MSCs鉴定。BM-MSCs与免疫磁珠负集的外周血CD4-细胞共培养观察其对CD4-细胞功能的影响,采用倒置显微镜和BrdU方法分析CD4-细胞的克隆形成和增殖能力,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CD4-细胞分泌的细胞因子水平。结果正常人和AA患者骨髓间充质干细胞均呈长梭形,辐射状或旋涡状贴壁生长;诱导后均向成骨细胞和脂肪细胞分化;均表达CD105、CD73、CD90、CD29、CD44、CD49e、CD166、CD13和HLA-ABC,不表达CD34、CD45和HLA-DR。与正常对照组比较,AA患者BM-MSCs抑制CD4-细胞克隆形成和增殖能力减弱(P<0.05)。同时,AA患者BM-MSCs抑制CD4-细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)的能力明显低于正常对照组(P<0.05)。结论 AA患者骨髓间充质干细胞在调节CD4-细胞免疫功能方面存在缺陷,可能进一步加重骨髓免疫损伤。

中空纤维灌注培养模拟骨髓造血研究

目的采用细胞工程技术探索造血细胞体外扩增技术以维持其自我更新潜能,抑制过度分化。方法首先建立微载体-基质细胞体外造血模型(G1组,即瓶培养模式),设置单纯微载体-基质细胞培养(G2组)和单纯骨髓细胞液体悬浮培养(G3组)作对照。检测各组粒系-巨噬系造血祖细胞集落产率(CFU-GM/105)。自行设计1对引物,以检测Balb/c小鼠原始造血细胞c-kit基因mRNA表达水平。试用中空纤维模拟血管灌注功能(Gh组,即中空纤维灌注模式),以G1、G2、G3作对照,并对各组培养效果进行评价。结果微载体-基质细胞体外造血模型实验结果显示小鼠骨髓细胞培养2周后,CFU-GM/105检测G1组比G3组高7.7倍(P<0.05),是2个对照组(G2+G3)集落产率总和的1.9倍。原始造血细胞c-kitmRNA表达水平模型G1组比G2组高3.7倍,比G3组高62.3倍,且差异均显著。在成功建立微载体-基质细胞体外造血模型基础上进行中空纤维灌注培养实验,CFU-GM/105检测显示Gh组比G3组高4.6倍,并且略高于G2组;Gh组与G1组集落产率差别不明显。在原始造血细胞c-kitmRNA表达水平上Gh组最高,从Gh、G1、G2到G3依次呈下降趋势。结论在没有外加细胞因子的条件下,微载体-基质细胞和中空纤维灌注造血模型可抑制造血干、祖细胞过度分化与耗竭,维持其c-kit较高的表达水平。

悬滴和悬浮法相结合培养胰腺祖细胞

目的建立悬滴和悬浮法相结合培养胰腺祖细胞的方法,研究该方法能否诱导胰腺祖细胞在体外分化为成熟的内分泌细胞。方法体外分离小鼠12.5d胚胎胰腺,消化成单个细胞,悬滴法培养24h后细胞形成球体,将细胞球转移到下层为培养基漂浮的膜上培养6d。培养过程中,采用免疫组织化学方法检测胰腺十二指肠同源盒基因1(PDX-1)和神经源素3(Ngn3)的表达及胰岛素、胰高血糖素、羧肽酶(CPA)的表达,酶联免疫吸附法检测葡萄糖刺激后细胞球分泌胰岛素的变化,定量PCR检测培养过程中胰腺标志表达的变化。结果细胞球培养1d后,有大量PDX-1表达,而且这些PDX-1阳性细胞增殖。细胞球培养3d后,Ngn3大量表达,Ngn3阳性细胞不增殖。培养7d后,分化的胰腺细胞表达成熟内、外分泌细胞的标志,而且胰腺标志的表达与体内表达模式一致。高糖能刺激细胞球分泌胰岛素。结论悬滴和悬浮法相结合能诱导胰腺祖细胞在体外分化为成熟的内分泌细胞。

脐带组织源间充质干细胞调控ITP患者脾细胞释放抗血小板抗体的体外研究

为了探讨脐带组织来源的间充质干细胞(UC-MSC)免疫治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP)的临床应用可能性,体外建立UC-MSC与ITP脾切除患者的脾脏单个核细胞共培养体系,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测共培养上清液中IgG型抗血小板抗体(PAIgG)含量的变化。同时,用Brdu法研究UC-MSC对其中部分ITP患者血小板反应性T辅助淋巴细胞增殖的调节作用。结果表明,UC-MSC在体外试验中可刺激ITP患者脾细胞自发性释放PAIgG;UC-MSC在低剂量时(1∶100)抑制血小板诱导释放PAIgG;在高剂量(1:10)转为刺激作用。另外,UC-MSC还能抑制血小板反应性T辅助细胞的增殖,并呈一定的量效关系。结论:UC-MSC可体外影响ITP患者释放PAIgG,具体调控机制及临床应用价值有待深入研究。

自发性高血压大鼠间充质干细胞生物学特性变化的研究

目的 :研究自发性高血压大鼠 (SHR)间充质干细胞 (MSC)生物学特性的改变。方法 :取SHR和WKY骨髓和主动脉的贴壁细胞 ,经CD1 0 5免疫磁珠分选 ,测定其生长曲线和倍增时间 ,流式细胞仪检测其免疫表型 ,进行纤维母细胞集落形成单位计数 ,体外诱导成脂肪和成骨 ,以油红O及VonKossa染色证实 ,免疫组化和半定量PCR法测胶原蛋白。结果 :这些细胞呈梭形贴壁生长 ,SHR组细胞倍增时间长于WKY级 ,这些细胞CD1 0 5、CD44、CD2 9,Flk 1均阳性 ,SHR组CFU F低于WKY组 ,SHR组细胞更易成脂肪、成骨、促纤维化。结论 :这些细胞为MSC ,SHR组MSC增殖能力较WKY组弱 ,成脂肪、成骨、促纤维化强于WKY组 ,MSC的异常可能是高血压易患动脉弱样硬化原因之一。