改良羊水细胞原位培养和传代培养法——附208例羊水染色体分析

目的:建立一种操作简便易于推广的羊水细胞原位培养及传代培养方法。方法:抽取208 例孕16-23周孕妇的羊水,离心作原位培养,6 d后换液,换下的上清液传代培养,原位培养和传代培养在观察到多个细胞集落和较多圆形细胞时直接在原位收获制片分析。结果:208例羊水全部培养成功,并发现多例异常。其中199例经原位培养即获得足够分裂相,培养时间6-9 d,平均7 d,平均每例分裂相≥100个,一般8-10 d报告结果;9例由于原位培养不能获得足够分裂相或实验过程失误等而依靠传代培养,培养时间12-15 d,16-18 d报告结果。结论:羊水细胞原位培养法较传统胰酶消化法染色体分裂相多,分带清晰,核型完整,成功率高,出报告时间短等优点, 传代培养后收获的细胞可做为前者的补充或其它研究。

孕酮通过ABHD2受体介导的cAMP-PKA信号通路调控精子受精功能的研究

目的研究ABHD2在不育症患者精子膜表面的表达差异,探究孕酮是否通过ABHD2调控cAMP-PKA进而影响精子的功能活性。方法收集男性正常生育组精子、少弱精子组和顶体异常组精子样本(各30例),通过RT-PCR、蛋白Western-Blot印迹等方法分析转录水平及蛋白表达的差异,且采用体外添加孕酮、ABHD2抗体、PKA拟制剂H-89,选择观测正常生育组(对照组)与少弱精子组(实验组)男性精子ABHD2的蛋白表达水平,以及cAMP、PKA浓度等变化。结果少弱精子组和顶体异常组中ABHD2 m RNA转录水平以及ABHD2蛋白表达水平显著减少,具有统计学意义(F:90.84,P<0.01);在正常生育组中加入孕酮处理后,ABHD2蛋白水平表达明显增加;而少弱精子组中加入孕酮处理后,与未加孕酮相比,ABHD2蛋白水平表达增加不明显。进一步研究,在正常生育组中加入孕酮(P4)处理后,cAMP、PKA浓度极显著增加(P<0.01),继续加入ABHD2抗体或PKA拟制剂H89后,cAMP、PKA浓度均显著减少(P<0.01)。结论临床不育与正常生育男性精子之间ABHD2的转录和表达存在差异,孕酮通过ABHD2受体介导的cAMP-PKA信号通路调控精子受精功能。

输卵管因素不育夫妇年龄和值或差值对辅助生殖结局的影响

目的探讨输卵管因素不育夫妇年龄和值或差值对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的影响。方法回顾性分析本中心2011年至2016年因输卵管因素接受IVF-ET治疗的1937对夫精夫妇和466对供精受精者的资料并随访至2019年9月。按男女年龄和值以及差值分组比较正常受精率、有效及优质胚胎数、临床妊娠率、流产率、累积活产率、婴儿出生体质量等。结果夫妇一般会经过4年尝试自然受孕或常规治疗后选择IVF治疗;夫妇年龄和值分组与正常受精率无关,而与胚胎发育和移植后妊娠结局密切相关。当年龄和值≥70则有效胚胎数、优质胚胎数、临床妊娠率及活产率明显降低,和值≥80则产生明显的叠加累积效应(P<0.01)。夫妇年龄差值仅女方≥男方5岁会对妊娠率有统计学意义(P<0.05)。夫妇年龄和、差值与生化妊娠率、流产率、新生儿出生缺陷、低体质量儿之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论评估双方年龄和值比差值更有临床意义,双方会彼此弥补年龄对生育力的影响,双方都应尽量在40岁之前生育,减少年龄对生育和妊娠结果的影响。

取卵当日男方精液参数对体外受精-胚胎移植出生结局的影响

目的探讨体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)中男方精液参数对出生结局的影响。方法回顾分析1374例因女方输卵管因素不孕行IVF-ET助孕的出生结局,分为活产组、流产组及未着床组,比较各组间年龄、体重指数及取卵当日男方精液参数的差异。将所有研究对象根据前向运动精子(PR)比例由高至低分为五组,比较各组间活产率、流产率、孕周、出生体重及二胎出生体重。采用二元Logistic回归进行是否获得活产的多因素分析,比较各精液参数对出生结局的预测价,P<0.05被认为差异存在统计学意义。结果活产组精子浓度高于未着床组(P <0.05)、PR比例显著高于流产组及未着床组(P<0.01)。随着PR比例增高、活产率显著增高(P<0.01)。相较PR≥50%组,PR≤25%组孕周数更短(P<0.05)、PR在40%以下各组二胎出生体重更低(P<0.05)。二元Logistic回归分析显示PR比例是能否获得活产婴儿的独立危险因素(P<0.01)。结论取卵当日男方精子活力是影响IVF-ET出生结局的重要因素,PR精子比例越高、活产率相对越高。