肿瘤性骨软化症继发甲状旁腺功能亢进症1例

肿瘤性骨软化症(tumor-induced osteomalacia,TIO)是一种因肿瘤组织分泌过量成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)而引起肾脏排磷增多的代谢性骨病,是一种罕见的副肿瘤综合征。中南大学湘雅三医院2021年9月收治1例罕见的TIO患者,该患者的肿瘤位于舌骨体,并且继发了三发性甲状旁腺功能亢进症。在舌骨体肿瘤切除后,患者的症状并未好转,随后对其进行左侧甲状旁腺切除,患者的低磷血症才逐渐改善。发源于舌部肿瘤的TIO十分少见,同时继发三发性甲状旁腺亢进的病例更是罕见,本报告有助于加深对TIO的了解,并为TIO的诊断和治疗提供参考。

人TSARG4真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立

目的:构建人TSARG4基因真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染TSARG4的HeLa细胞系。方法:应用RT-PCR从人睾丸中扩增TSARG4的开放阅读框(ORF),并将PCR产物插入到pUCm-T载体中测序验证。随后,将TSARG4进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中。用脂质体将经过测序、验证的pcDNA3.1(+)/TSARG4质粒转染HeLa细胞,通过G418筛选建立TSARG4稳定转染的HeLa细胞系。RT-PCR和组织原位杂交技术检测TSARG4在稳定转染的HeLa细胞系中的表达。结果:成功构建了pcDNA3.1(+)/TSARG4表达质粒,建立了稳定转染的HeLa细胞系。RT-PCR和组织原位杂交检测结果表明,TSARG4基因在该细胞系中成功表达。结论:TSARG4真核表达载体成功构建和稳定转染HeLa细胞系的建立为进一步体外研究TSARG4的功能奠定了基础。

翻转课堂联合CBL在内科见习循证医学思维培养中的应用

目的探讨基于微信平台的翻转课堂联合案例教学法在内科见习循证医学思维培养中的应用效果。方法选取湘雅医学院临床医学本科八年制的学生50人作为研究对象,将其随机分为两组,每组各25人。实验组采用翻转课堂联合CBL(case-based learning,CBL)教学法,对照组采用传统授课教学法。教学完成后,通过问卷调查和理论考试的方式评价教学效果。结果翻转课堂联合CBL培养循证医学思维的教学法得到大多数学生的好评,实验组学生对教师授课方式的满意度高于对照组(92.0%vs. 64.0%),差异具有统计学意义(P <0.05)。理论考试成绩显示,两组理论知识和概念题成绩对比,差异无统计学意义(P> 0.05);实验组学生病例分析成绩高于对照组,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论在内科见习阶段开展翻转课堂联合CBL教学模式能够提高医学生的循证医学思维能力,激发学生的学习积极性。

RET基因p.M918T突变导致多发性内分泌肿瘤-Ⅱb型1例

多发性内分泌肿瘤-Ⅱb型(multiple endocrine neoplasia type-Ⅱb,MEN-Ⅱb)是一种罕见的由RET基因突变引起的常染色体显性遗传病,具有特殊的临床表型,如黏膜神经瘤、类马方综合征体型、甲状腺髓样癌及嗜铬细胞瘤等。临床医生对此病认识不足,诊断往往延迟。2018年11月中南大学湘雅三医院收治了1例MEN-Ⅱb患者,该患者自幼有舌黏膜神经瘤,曾因二尖瓣脱垂及脊柱畸形接受手术治疗,于22岁时被诊断为甲状腺髓样癌并接受手术治疗,但直至28岁发现嗜铬细胞瘤才临床诊断为MEN-Ⅱb。基因检测提示该患者携带一新发RET基因p.M918T杂合突变。在临床工作中早期识别内分泌系统以外的临床表现并进行RET基因筛查是早期诊断及治疗的关键。

pEGFP-C_3-insig2融合基因真核表达质粒的构建、表达及其对下游基因的影响

目的构建insig2基因的真核表达质粒,转染3T3-L1细胞并观察对下游脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA、脂联素mRNA表达的影响。方法采用RT-PCR法获取小鼠全长insig2基因,并克隆入真核表达载体pEGFP-C3中。酶切、测序鉴定后,经脂质体转染入3T3-L1细胞,通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测其在3T3-L1细胞中的表达及下游基因的变化。结果成功地构建了pEGFP-C3-insig2融合基因的真核表达载体,荧光显微镜观察到pEGFP-C3-insig2融合蛋白在转染的3T3-L1细胞胞质中的表达,insig2基因的转录明显上调。转染后24h、72h较0hAP2 mRNA和脂联素mRNA的转录水平明显下调。结论构建了insig2基因的真核表达质粒,在转染的3T3-L1细胞中insig2的过表达可能影响该细胞的脂肪代谢。

不同浓度葡萄糖对3T3-L_1细胞分化及insig-1和insig-2 mRNA表达的影响

目的:观察不同浓度葡萄糖对小鼠前脂肪细胞(3T3-L1细胞)分化及insig-1和insig-2 mRNA基因表达的影响,探讨insig基因在脂肪细胞分化与代谢中的作用。方法:将3T3-L1细胞分别在高葡萄糖浓度(25mol/LG.S)、低葡萄糖浓度(5.5mol/LG.S)和甘露醇(19.5mol/L甘露醇+5.5mol/LG.S)中诱导分化,利用油红"O"染色检测脂肪细胞分化,RT-PCR和原位杂交法检测insig-1和insig-2 mRNA、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA表达的动态变化。结果:随着3T3-L1细胞的分化,insig-1和insig-2 mRNA和AP2 mRNA表达逐渐上调,低糖诱导组及甘露醇对照组细胞分化程度显著低于高糖诱导组,但两组insig-1和insig-2 mRNA的表达较高糖诱导组明显上调(P<0.05),而AP2 mRNA表达则下调;低糖诱导组与甘露醇对照组细胞分化程度及各基因表达无明显差别。结论:葡萄糖浓度可影响脂肪细胞分化;低糖时脂肪细胞分化及脂质沉积相对受抑制,可能与insig基因表达上调有关。

全外显子组测序诊断2例Gitelman综合征

中南大学湘雅三医院内分泌科收治了2例疑诊Gitelman综合征的患者。抽取2例患者外周血进行基因组DNA抽提,然后采用全外显子组测序进行基因学检测,寻找致病位点,并通过生物信息学软件对突变位点进行功能分析。全外显子组测序及Sanger测序验证发现2例Gitelman综合征患者均携带SLC12A3基因复合杂合突变:c.486_490delTACGGinsA、p.R943W、p.D486N及p.R928C。其中c.486_490delTACGGinsA插入缺失突变将造成框移及蛋白质截短,而p.R943W、p.D486N及p.R928C突变经SIFT、PolyPhen2和Mutation Taster预测为有害。这4个突变既往均有报道,其中p.R943W为首次在中国人群中发现。Gitelman综合征临床较罕见,漏诊率高。对Gitelman综合征患者及早进行基因检测有助于明确病因及指导治疗。

八年制医学生临床诊断学见习课教学模式初探

目的:探索适合八年制医学生教育特点的临床诊断见习教学模式,提高八年制医学生临床思维能力。方法:根据八年制医学生的特点,以学生为主体,采用多元化教学方法,如:分时段讲解式授课、以典型病例为核心的CBL教学法及临床实践等,运用多样化的教学手段,对八年制医学生的临床诊断学见习课教学方法进行改革探索。结果:八年制医学生的临床思维能力得到了全面提高,取得较好的教学效果。结论:多元化教学模式适合八年制医学生临床诊断见习教学。

低深度全基因组测序检测以甲状腺功能减退起病的Williams-Beuren综合征一例

目的探讨1例不明原因智力低下、生长发育迟缓、具有特殊面容及甲状腺功能减退的5岁男性患儿的临床表型和遗传学病因。方法用常规G显带技术分析患儿及其父母染色体核型,应用全外显子组测序及低深度全基因组测序技术(low-coverage massively parallel CNV sequencing,CNV-seq)对患儿进行可能致病突变及染色体拷贝数变异的分析。结果患儿染色体核型为46,XY,其父母未见明显的染色体异常。CNV-seq分析显示患儿在染色体7q11.23区域存在大小为1.56 Mb的杂合性缺失,缺失区域包含24个编码蛋白质的基因,其缺失与Williams-Beuren综合征相关。通过对其父母检测CNV-seq,发现该缺失为一新发缺失。结论本研究用CNV-seq技术确诊了1例以甲状腺功能减退起病的Williams-Beuren综合征患儿,有助于提高临床医师对Williams-Beuren综合征表型与发病机制的认识。

二甲双胍治疗老年人代谢综合征临床观察及其对肿瘤坏死因子-α和抵抗素的影响

代谢综合征（metabolic syndrome,MS）是伴有胰岛素抵抗（IR）的一组疾病的聚集,其中以老年患者居多。我们通过比较老年MS患者和健康老年人血清中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、抵抗素浓度及临床生化指标,分析老年MS患者的发病机理;并应用生活方式干预和生活方式＋二甲双胍对老年MS患者进行治疗,为老年MS患者的治疗提供依据。

全外显子测序对三例Kallmann综合征遗传病因研究

目的Kallmann综合征(Kallmann syndrome,KS)是一种以先天性低促性腺激素性性腺功能减退和嗅觉缺失为特征的遗传病。目前已经报道20余个基因与KS相关。本研究对3例KS患者进行全外显子测序,以进一步明确其遗传病因。方法收集3例KS患者及家属外周血提取基因组DNA,采用全外显子组测序进行基因学检测序筛选出的致病基因,并进行Sanger测序和家系验证,并通过生物信息学软件对突变位点进行功能分析。结果先证者1为25岁男性,表现为低促性腺激素性性腺功能减退、头发早灰及感音性耳聋,基因检测在SOX10基因中检出杂合错义突变c.475C>T(p.R159W),具有KS表型的先证者1母亲、姐妹和表姐均检测到该错义突变,符合常染色体显性遗传。先证者2为15岁男性,表现为低促性腺激素性性腺功能减退及左肾缺如,基因检测发现该患者有ANOS1基因c.844delC(p.R282Vfs*28)杂合突变。其母为c.844delC杂合突变携带者,临床表型正常,符合X连锁隐性遗传。先证者3为21岁女性,表现为低促性腺激素性腺功能减退及嗅觉缺失,基因检测在FGF17基因中检出杂合错义突变c.149G>A(p.R50Q),该突变经SIFT和PolyPhen2生物信息学预测为致病性错义突变,在HGDM数据库未见报道,认为是新发突变。结论KS是一种临床和遗传异质性很强的疾病,本研究在3例KS患者中通过外显子测序分别发现了ANOS1 c.844delC,SOX10 c.475C>T及FGF17 c.149G>A突变,进一步拓展了KS的突变谱及表型谱。

老年2型糖尿病合并血管并发症患者血白细胞和游离脂肪酸的变化

目的 研究 2型糖尿病 (T2DM)和T2DM合并血管并发症患者血白细胞和游离脂肪酸 (FFAs)的变化及其相关性 ,探讨白细胞和游离脂肪酸在T2DM血管并发症发生中的作用。方法 用血细胞计数法测定 3 8例T2DM伴血管并发症组、2 2例T2DM无血管并发症组及 2 0例正常人组的白细胞数 ,用发色底物法测定三组病人的空腹血清FFAs水平 ,并将白细胞数与FFAs浓度做相关性分析。结果 ⑴DM组与正常对照组比较 ,血白细胞计数、游离脂肪酸水平显著升高 (P <0 0 5 )。⑵T2DM有血管并发症组与无血管并发症组比较 ,血白细胞计数、游离脂肪酸水平显著升高 (P <0 0 5 )。⑶有并发症组白细胞数与FFAs呈显著正相关 (r =0 3 66,P <0 0 5 ) ,FFAs与无并发症组亦呈正相关 (r =0 42 4,P <0 0 5 )。结论 T2DM合并血管并发症患者血白细胞数、FFAs升高 ,白细胞可与FFAs一样作为非特异性炎症的生物标志物。

生活干预加二甲双胍对老年代谢综合征患者CRP和IL-6水平的影响

目的观察生活方式改善加二甲双胍对老年代谢综合征(MS)患者临床、血生化指标及血清C-反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)的影响。方法选择MS患者59例,随机分为生活干预组(生活干预组)29例和生活干预加二甲双胍治疗组(二甲双胍组)30例。干预前后观察体重指数(BM I)及血压,抽血查空腹血糖(FBS)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、空腹胰岛素(FINS)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)。结果患者生活干预或生活加二甲双胍干预前后,患者血压、BM I、FBS、TG、FINS、CRP、IL-6、HOMA-IR的差异具有显著性(P<0.05)。二甲双胍治疗组收缩压(SBP)、BM I、FBS、TG、CRP、IL-6、HOMA-IR均较生活干预组低,差异有显著性(P<0.05)。结论MS患者CRP、IL-6明显增高,存在低度炎症。单纯生活方式可改善MS多种代谢异常,加用二甲双胍能进一步改善胰岛素抵抗和炎症状态。

PAI-1和TNF—α在老年代谢综合征患者中的变化及二甲双胍对其影响

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）及肿瘤坏死因子-α（TNF—α）与代谢综合征（Metabolic syndrome，MS）及并发冠心病发病的关系，并探讨二甲双胍对PAI-1、TNF-α及MS的影响。方法老年MS患者60例，分成两组各30例：二甲双胍组予生活方式及二甲双胍干预治疗，生活干预组仅予生活方式干预。另选择同期健康体检者30例为对照组，发色底物法检测血浆PAI-1水平，ELISA法检测TNF-α水平。结果（1）老年MS患者血PAI-1活性、TNF-α水平[（0．95±0．05）AU／ml、（24．81±3．87）ng／ml]明显高于对照组[（0．66±0．10）AU／ml、（10．76±2．00）ng／ml]（P〈0．001）；（2）Ms组合并CHD者血PAI-1活性、TNF—α水平[（0．96±0．05）AU／ml、（26．12±2．83）ng／m1]明显高于未合并CHD者[（0．94±0．03）AU／ml、（23．71±4．27）ng／ml]（P〈0．05）；（3）二甲双胍干预治疗能使PAI．1、TNF-α明显下降[△值分别为（0．20±0．17）AU／ml、（4．42±0．85ng／ml），P〈0．01]，并能有效改善MS的多种成分。结论PAI-1、TNF-α参与老年MS及其并发症的发生，二甲双胍能降低这些患者的PAI-1及TNF—α水平，控制代谢综合征的各成分。

AIRE基因突变致自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅰ型两例分析

目的自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅰ型(APS-Ⅰ)是由自身免疫调节因子(AIRE)基因突变导致的罕见遗传病。本研究对2例APS-Ⅰ患者进行临床特征及AIRE基因分析,以提高对此病的认识。方法采集2例APS-Ⅰ患者及家属外周血并提取DNA,应用PCR扩增AIRE基因,通过生物信息学进行功能预测,并选取100名健康对照,对新突变位点进行检测。结果病例1为31岁女性,10岁出现手足指甲念珠菌样改变,后诊断为原发性甲状旁腺功能减退症、Addison病、桥本甲状腺炎及卵巢功能早衰。AIRE基因检测发现该患者为c.483_484insC纯合突变,其父母、弟弟均为c.483_484insC杂合突变,符合常染色体隐性遗传。病例2为34岁男性,幼时出现手足指甲念珠菌病样改变,后诊断为Addison病、原发性甲状旁腺功能减退症及桥本甲状腺炎。AIRE基因检测发现该患者有c.179A>G及c.463+2T>C复合杂合突变,其父有c.179A>G杂合突变,其母有c.463+2T>C杂合突变,符合常染色体隐性遗传。AIRE基因c.483_484insC突变可造成AIRE蛋白截短,c.463+2T>C突变位于内含子3的5′端高度保守剪切位点,这2个突变均曾报道为致病突变,而c.179A>G突变经SIFT及PolyPhen-2生物信息学预测为致病性突变,在100名健康人群中未检出,人类基因突变数据库(HGMD)未见报道,认为是新发突变。结论本研究发现了1个新的AIRE基因突变c.179A>G,拓宽了对APS-Ⅰ发病机制的认识。APS-Ⅰ临床表现多样,易误诊及漏诊,早期识别APS-I相关症状,加强基因筛查及随访有助于本病的早期诊断及治疗。