奶(黄)牛卵母细胞体外受精及体外发育的研究

自屠宰场获得150头淘汰黑白花奶牛和19头黄牛的卵巢,取得优、良级卵母细胞2060枚,采用两种培养液(A.B.)和三种不同试剂(Aa、Ba、Bb),对解冻牛精子获能(capacitation)。在38.5℃和相对湿度为100％的5％CO_2箱中进行成熟、受精、发育培养至196小时,其结果表明A液所获得的效果优于B液,但差异不显著;Aa试剂获能优于Bb,差异显著。共获得桑椹胚和囊胚58枚、非手术移植10头牛16次,三头妊娠,其中二头受体在妊娠二月半月后返情,外阴流血,确认为胚胎早期死亡,一头受体妊娠产犊,于1990年4月10日产公犊1头,体长87公分、身高78公分、体重29公斤、妊娠284天,正常分娩。(移植天为0天)。

不同营养水平对杜—哈白F_1猪肌组织影响的研究

用光镜观察和测量了杜—哈F_1猪90公斤时肌组织的形态学特征:a.背最长肌(M.longissimus dorsi)和股二头肌(M.biceps femoris)基本上均属于中间型(氧化糖酵解型)纤维构成的肌肉,该纤维肌浆均匀,肌原纤维孔氏区(Cohnheim)明显。红肌纤维位于1级肌束中部,常以2,3条肌纤维集聚,形态多为圆形,其周围的肌肉膜清楚,常与周围中间型肌纤维分离,其肌浆充盈,故不易见孔氏区象。白肌纤维极少,肌浆贫乏,肌原纤维呈密集点状(横断面);b.F_1代猪肌小束(1级肌束)以35～50条肌纤维组成,小束间结缔组织膜H.E染色不清,仅以裂隙示之,但PAS染色,Osimic acid处理的肌组织Ⅰ级肌束膜清楚。以数条到十数条肌小束构成Ⅱ级肌束;c.F_1代猪肌纤维直径45～65微米,雌性的大于阉雄的;肌小束膜及肌束膜厚,阉雄的大于雌性的。d.股二头肌肌内膜比背最长肌肌内膜发达,说明背最长肌柔嫩、细腻,肉的品质高于股二头肌。e.根据观察和生物统计二因素方差分析表明,第1组早期18％,后期14％的蛋白及5％的鱼粉混合料对肌纤维粗度、密度有显著影响,但在肌纤维类型的比率上无明显差别。根据肉质标准,该组饲料配方效果,尚需商计。其它7组饲料配方,无规律性变异。

猪精子体外获能与顶体反应的超微结构研究

用４种方法，检测了猪精子体外获能的效果。结果证明：高离子浓度的前培养液和猪卵泡液，具有促进获能过程的作用，实验还获得了获能后顶体反应的一些重要的形态学变化资料，包括质膜的膨胀、断裂．顶体膨胀，顶体外膜内陷或原位局部囊泡化，质膜再全部丢失。顶体内膜直到与卵母细胞质膜融合，才发生可见的变化。受精过程无论体内或体外，都容易发生多精入卵，体外受精则更甚。在精子穿过卵丘细胞之间时，一方面开始进行顶体反应，另一方面，未发生顶体反应或衰亡的精子又可以被卵匠细胞吞噬。本工作进一步支持并发展了质膜不参与顶体外膜囊泡化的假说。

牛体外受精的程序及超微结构研究

牛体外成熟卵母细胞体外受精后３小时精子入卵，８小时原核形成，２４小时原核迁移到卵中央．精子发生顶体反应的部位主要在透明带表面，方式是顶体外膜自身囊泡化。发生顶体反应的精子可斜向或垂直穿过透明带、卵丘细胞可吞噬大量精子．在阻止多精受精中发挥重要作用。高尔基复合体、线粒体、环状片层和滑面内质网等在原核周围形成细胞器集团。牛体外受精卵的雌雄原核结合比体内受精的要延迟，胞吐到卵周隙中的皮质颗粒内容物扩散不完全。

猪卵母细胞体外成熟与体外受精的超微结构研究

取猪卵巢，从２～６ｍｍ有腔卵泡中抽取未成熟的卵丘卵母细胞复合体。分组处理后，各取１０枚按常规方法制片，光镜和电镜下观察测量。结果表明，对照组的卵丘细胞呈多层包围卵母细胞，其胞质突起与卵母细胞微绒毛交叉伸入透明带中，卵周隙尚未出现。高尔基复合体在卵皮质区成团分布。皮质颗粒位置分散。线粒体多成群存在于卵皮质区，嵴少，基质密度高。脂滴遍布胞质，由间断的滑面内质网包统。培养成熟后，卵丘细胞扩展松散，其突起和卵母细胞微绒毛，均自透明带中缩回，卵周隙出现。皮质颗粒成排贴于质膜下。高尔基复合体未见或仅残留少量囊泡。线粒体中出现空泡。脂滴内絮状物增多。卵母细胞生发泡破裂，第一极体分出，核处于第２次成熟分裂中期。受精后皮质颗粒内容物外倾或颗粒完整外排，线粒体多呈圆形。雌、雄原核形成，致密核仁出现。结果说明，体外受精与体内受精过程基本相同，仅有某些环节不完整或不规则。

牛卵丘－卵母细胞复合体体外成熟前后超微结构

实验用透射电镜技术研究了牛卵立－卵母细胞复合体（ＣＯＣ）体外成熟前后卵母细胞、卵丘细胞及它们之间联系的结构特征．体外培养前，卵母细胞微绒毛数量较少，有的伸入秀明带中；各种细胞器集中分布于皮质区，形成“细胞器带”；核膜可打褶，核仁致密化．卵母细胞与卵丘细胞间及卵丘细胞之间形成间隙连接；卵丘细胞中线粒体致密、形态多样．成熟培养后．微绒毛增多．卵周隙形成；高尔基复合体消失，脂滴伴随着线粒体内迁．少数线粒体转变为幼稚型，皮质区形成“细胞器游离带’；皮质颗粒开始沿质膜下呈线状排列，但有的仍成团分布；排出第一极体处无微绒毛．中期赤道板附近无细胞器；卵丘细胞间及卵丘细胞与卵母细胞间联系中止；卵丘细胞中线粒体转变为幼稚型．

牛体外成熟卵母细胞冷冻保存的研究

本实验探讨了用６种不同方法冷冻保存的牛体外成熟卵母细胞体外受精后的发育潜力及其冷冻损伤。尽管用不同方法冷冻的牛卵母细胞多数（８６．１％）形态正常，仅体外受精后的受精率（３０．０％）和卵裂率（７．４％）明显低于对照组（６９．０％和５２．９％），卵裂后继续发育的能力严重受损。在６种冷冻方法中，１．６Ｍ丙二醇分步平衡、程序冷冻效果最好，受精率和卵裂率分别达３６．４％和１３．５％。冷冻后卵母细胞发育潜力下降的原因是皮质颗粒胞吐引起的透明带变硬及亚细胞结构损伤。玻璃化法冷冻的卵母细胞损伤较轻，是值得进一步研究的一种方法。

牛卵泡卵母细胞冷冻保存后发育潜力的研究

对用３种不同方法（Ａ法：１．０ｍｏｌ／Ｌ甘油平衡，从２０℃开始以１℃／ｍｉｎ的速度降至－℃，植冰，１０ｍｉｎ后以０．３℃／ｍｉｎ降至－３０℃，再以０．１℃／ｍｉｎ降至－３３℃，投入液氮；Ｂ法：１．６ｍｏｌ／Ｌ丙二醇＋０．ｌｍｏ１／Ｌ蔗糖平衡，５℃冰箱中保存１５ｍｉｎ，从Ｏ℃开始按Ａ法中的程序降温；Ｃ法：即玻璃化法）冷冻保存的牛ＧＶ期卵母细胞的发育潜力进行了研究。解冻后，Ｃ组卵母细胞形态正常率显著高于Ａ、Ｂ两组。３种方法冷冻的卵母细胞成熟培养后，平均卵丘扩展率为６０％，其中Ｃ组最高（６９．９％）。卵丘扩展的卵母细胞中，７９．３％发生ＧＶＢＤ，但大多数没有达到ＭＩ期。３组冷冻卵母细胞的体外成熟率、体外受精率分别为１４．２％、８．３％、２０．０％和１０．０％、７．１％、１２．１％，其中Ａ组中有１枚卵裂。

牛卵泡卵母细胞冷冻损伤的研究

把牛卵泡卵母细胞进行平衡、冷冻和玻璃化冷冻解冻后，对其微细结构损伤和成熟培养后的变化进行了研究。冷冻解冻后经台盼蓝染色判断为存活的卵母细胞，表现为不同程度的结构损伤，包括微绒毛几乎消失，有的部位质膜模糊甚至破裂；线粒体膨胀，电子密度下降，帽及峪消失；囊泡变形融合；高尔基复合体及微管消失；内质网囊池扩大；细胞基质出现空白区。台盼蓝染色判为死亡的卵母细胞，表现为细胞基质、细胞膜及细胞器崩解。体外培养后的冷冻卵母细胞微细结构呈现某些恢复及成熟迹象，但不能与正常情况相提并论。冷冻解冻后卵丘细胞除内质网囊池膨大外，结构保存完好。

猪体外受精精子冷冻后的超微结构研究

猪鲜精冷冻后，虽保持了一定的活力，但受精能力明显降低。精子结构特别是顶体遭到不同程度的损伤。应用超微结构方法，观察了鲜精体外获能顶体反应（对照组）及冻精解冻（实验组）后顶体结构的改变。二者在质膜膨胀断裂、囊泡化方面，有着十分相似之处，显示冷冻解冻后，可以使有些精子产生一种假顶体反应（ＰｓｃｕｄｏａｃｒｏｓｏｍａｌＲｅａｃｔｉｏｎ），从而导致受精率下降。

牛卵母细胞体外受精及体外发育的研究

本研究利用从屠宰场收集到的牛卵巢,获取卵母细胞,经体外成熟后进行体外受精,其受精率为73±2％。受精卵分别用发育培养基TCM—199+10％FCS(MA)、颗粒细胞单层(MB)和卵管上皮单层(MC)进行培养,其8—16细胞的发育率分别为52％、54％和61％;而囊胚的发育率分别为20％、28％和42％。相比较而言,MB和MC培养基内突破8—16细胞阻断发育到囊胚的发育率优于MA。

人组织型纤溶酶原激活剂乳腺定位表达载体的构建及其表达

将编码人组织型纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ） 的１７６６ｂｐ 基因片段插入大鼠β－乳酪蛋白 （β－Ｃａｓｅｉｎ） 启动子的下游及ｐＳＶＬ质粒的ＰｏｌｙＡ上游。构建了ｐβ－Ｃａｓｅｉｎ－ＰＡ１、ｐβ－Ｃａｓｅｉｎ－ＰＡ２ 两个乳腺定位表达载体。将其分别与脂质体混合制备转染液后， 直接注入妊娠２９ 天的青紫蓝母兔乳腺中。结果表明：两种载体均能在乳腺中表达，且具有溶纤活性，表达量在２００—５００ｎｇ／ｍ ｌ之间。这不仅证明了所构建载体可用于转基因乳腺生物反应器的建立， 而且提示，

性成熟前牛卵母细胞体外受精研究

性成熟前牛卵母细胞体外受精研究孙青原，侯艺，刘国艺，杨庆章，秦鹏春（东北农业大学生物工程系哈尔滨１５００３０）前言在国内，牛体外受精的最大困难之一，就是卵巢来源不足。如果能用小牛作为卵母细胞供体，不仅可扩大卵母细胞来源，还可缩短世代间隔的时间，加快牛...

牛卵母细胞体外成熟的研究

牛卵母细胞的成熟过程中，包括细胞膜、细胞质、细胞核的成熟。其中细胞质的成熟最为复杂。线粒体、皮质颗粒数量的变化和位移，脂滴类型的变化和形态改变，空泡形态学的变化等是鉴别卵母细胞幼稚、成熟和老化的重要特征。透明带随着培养而外侧疏松，内侧致密，卵母细胞膜上伸出的微绒毛为膨大泡状和细长毛状两种。在培养１４小时后颗粒细胞与透明带脱离联系。根据综合指标判定，１８小时之前为成熟生长期，１８～２６小时为成熟期，２６小时进入老化期．１８～２４小时为授精最佳时间。

体细胞起源的人胚胎干细胞

根据治疗性克隆假设 ,可以通过体细胞核移植技术获得与病人具同样基因型的细胞或组织 ,这样起源的细胞或组织植回病人将不会引起免疫排斥反应。本研究将 5岁、42岁、52岁和60岁 4个不同年龄的人体细胞核植入去核的兔卵母细胞中重新启动 ,发育至囊胚 ,并分离人胚胎干细胞。研究结果提示 ,年龄不影响体细胞被重新启动的效率。经过核型分析 ,同源染色体分析 ,原位杂交 ,PCR和免疫组化染色等多种鉴定 ,ntES细胞具有人染色体。ntES细胞可以长期增殖并保持不分化状态 ,也可以形成类胚体并分化出包括神经和肌肉在内的多种细胞类型。由类胚体诱导生成的混合细胞群体表达所有三个胚层 (外、中、内胚层 )细胞类型标记 ,说明ntES细胞具有分化成所有三个胚层的潜力。因此 。

貉卵巢卵母细胞体外培养的研究

哺乳动物卵母细胞成熟是受精和胚胎发育的前提。在家畜卵巢刚排出的卵母细胞多已完成第1次成熟分裂,为次级卵母细胞;犬科动物(包括貉),卵母细胞在受精前处于初级卵母细胞阶段,直到完成第1次成熟分裂后才能受精。为了使貉卵母细胞能够用于体外受精和胚胎移植。

银狐卵巢卵母细胞体外培养的研究简报

本文对银狐的卵巢卵母细胞进行了体外培养,培养时间为24、36和48h,在倒置显微镜下观察卵丘卵母细胞复合体(简称COC)的扩展情况及生发泡破裂(简称GVBD)情况。观察结果表明:两培养组各培养时间的COC扩展率间均存在有显著差异(P<0.05);培养36h后,COC的扩展率和GVBD率不再显著地增加;hCG可以促进卵母细胞GVBD发生和卵丘细胞的发育。

貉受精的细胞学和X射线微区分析研究

应用电子显微镜和Ｘ射线微分析技术，对貉受精过程和受精卵膜元素研究的结果表明，貉卵子的卵丘细胞具有吞噬和过滤功能；卵丘细胞间的精子顶体尚未发生囊泡化，而附着于透明带的精子发生了顶体反应，并以８０°角穿入透明带，在其穿入的前方打开一个通道，最后穿过。穿过透明带的精子以赤道段或顶体后区同卵膜融合，并激发皮质颗粒释放，接着穿入卵内，最终发育成雌、雄原核。原核期受精卵质膜上具有高含量的钙，并呈集团分布，它在皮质颗粒胞吐释放中起着重要作用。

绵羊8—16细胞胚胎的超微结构

利用透射电镜技术研究了绵羊８－１６细胞胚胎的超微结构，并与２细胞胚胎作了比较．结果表明，８－１６细胞胚胎卵裂球间以间隙连接联系，胞质主要成分是一种带有界膜的囊泡，线粒体丰富，以带帽线粒体为主，也有少量横嵴线粒体，１６细胞胚胎中，后者的比例高于８细胞胚胎．与２细胞胚胎相比，８─１６细胞胚胎的高尔基体发达．但滑面内质网数量减少、８细胞胚胎卵裂球具有数个致密的球形或环形核仁前体，１６细胞胚胎的核仁中出现次级小泡腔，标志着ｒＲＮＡ开始合成．

绵羊卵母细胞的玻璃化冷冻保存

玻璃化法是近几年才建立起来的一种细胞、胚胎及卵母细胞的冷冻保存技术。Nekagata和Shaw分别于1989年和1991年用此化法冷冻保存小鼠成熟卵母细胞,取得理想结果。本实验对玻璃化法冷冻保存绵羊卵巢内卵母细胞作了尝试。1 材料与方法从屠宰后东北细毛羊取出卵巢,用注射器从直径2～6mm的卵泡中抽取卵丘—卵母细胞复合体,选择正常的用成熟培养液(M199+10%FCS)洗2次后,转入VS_1(20.5%(w/v)二甲基亚砜,