牛副流感病毒3型抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

旨在建立牛副流感病毒3型(BPIV3)抗体间接ELISA检测方法。克隆NP-HN截短串联基因并构建原核表达载体pET28a(+)-NP-HN,诱导纯化NP-HN重组蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立BPIV3抗体间接ELISA检测方法,进一步与病毒中和试验和进口ELISA试剂盒进行比较,应用本方法对270份临床血清样本进行了检测。结果表明,表达的NP-HN重组蛋白大小为44ku,具有良好的反应原性,建立的ELISA检测方法特异性强,与牛的主要呼吸道病原如牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等均无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数小于8%,与病毒中和试验和进口商品化ELISA试剂盒的总符合率分别为96.67%和98.89%。对采自山东、辽宁和天津的270份临床血清样本检测后总的阳性率为82.59%(223/270)。建立的BPIV3抗体间接ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可应用于BPIV3的流行病学调查和抗体检测研究。

人工肝支持系统在肝衰竭治疗中的应用

肝衰竭是临床常见的严重肝病症候群,病死率极高。人工肝支持系统是肝衰竭有效的治疗方法之一,广泛应用于肝衰竭患者。系统介绍了人工肝支持系统的原理及分类。总结了近年来非生物人工肝支持系统的最新研究进展和治疗方法。对生物型人工肝研究热点进行了阐述。最后提出了李氏人工肝支持系统未来的发展方向。

环状RNA circLRP6介导的miR-5590-5p改善肝衰竭机制研究

目的探究环状RNA circLRP6、miR-5590-5p和C5aR1在肝衰竭中的保护作用及调控机制。方法通过D-半乳糖胺和脂多糖(D-galactosamine and LPS,D-GalN/LPS)诱导来构建体外肝衰竭细胞模型,流式细胞术检测L02细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测circLRP6和miR-5590-5p的表达,Western blot法检测C5aR1蛋白的表达,RNA免疫共沉淀和双荧光素酶报告基因实验检测circLRP6和miR-5590-5p之间的结合作用,同时利用双荧光素酶报告基因实验检测C5aR1和miR-5590-5p的结合作用。结果与对照组比较,D-GalN/LPS诱导L02细胞凋亡率上升(P<0.05),circLRP6和C5aR1表达上调,miR-5590-5p表达下调(P<0.05)。同时,与D-GalN/LPS+miRNA-NC组比较,D-GalN/LPS+miR-5590-5p模拟物组的L02细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。另外,双荧光素酶报告基因实验显示,circLRP6能够直接与miR-5590-5p结合,并且miR-5590-5p直接调控C5aR1。检测结果还发现,与D-GalN/LPS+shRNA组比较,D-GalN/LPS+sh-circLRP6组circLRP6基因和C5aR1蛋白表达下调。然而,与D-GalN/LPS+shRNA组比较,D-GalN/LPS+sh-circLRP6组L02细胞凋亡率显著下降。结论环状RNA circLRP6介导的miR-5590-5p具有改善肝衰竭的作用,其作用机制可能是通过靶向C5aR1来实现的。

随机调研的云南实践

开展调查研究是领导干部的一项基本功。但一段时间以来。受层层陪同、提前打造“景点”、搭台“彩排”等不良风气的影响，许多流于形式的“调研”开始蔓延。为还原调研本质、本真、本源，云南省组织系统探索出了一条“不打招呼、不搞层层陪同，深入基层，一竿子插到底”的随机调研之路。

白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表达

研究分析固态发酵酸性蛋白酶生产菌株及其产品,ITS序列鉴定结果表明,该菌株为曲霉属,质谱分析结果表明其产品为Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I（EC.3.4.23.18）。根据Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I基因序列pep1（GI：473517）设计引物,以固态发酵酸性蛋白酶生产菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得pep1基因。序列分析结果表明,扩增片段与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶基因组序列相似性为99%,其编码蛋白与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶（GAA90749.1）相似性为100%,将该基因命名为pep B。构建黑曲霉表达载体p SZHG-pep B,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462,筛选得到在gla A位点发生同源重组纯合转化子。经摇瓶发酵后,对产物进行SDS-PAGE、酶活检测以及酸性蛋白酶酶学性质和酶稳定性研究。结果表明,纯合同源重组菌株经SDS-PAGE检测时在47 ku左右处有明显目的蛋白条带,其发酵产物酸性蛋白酶酶活达5 543 U·m L-1,为出发菌株152倍。对菌株所产酸性蛋白酶酶学性质研究发现,该酶最适反应温度为50℃,最适反应p H 3.0,在4℃和25℃条件下,酶在p H 3.0~4.0时较稳定。

砚山县:让群众在家门口上班

＂这里离家近,坐车1个小时就能到,工作、生活环境都可以,每个月能拿2500元的工资。现在连我弟弟都在园区里找到了工作,开始上班了。＂李志艳高兴地说。李志艳是云南省砚山县稼依镇店房村人,2015年6月高中毕业后,她便在位于砚山工业园区的中触光电公司找到了工作,负责仓库管理。

乌龙镇:一个山区小镇的新希望

9月,是收获的时节,驱车从云南省昆明市东川城区前往乌龙镇,只见河床中一座座桥墩拔地而起,装载机、挖掘机、运土车正忙着作业,给这静寂的山区增添了一份活力。＂

让法治阳光照亮村村寨寨——云南省法治乡村建设见闻

＂法律意识心中有,幸福生活保长久＂。走进云南省寻甸县七星镇必寨村委会窝子田村民小组,映入眼帘的首先是这一条醒目的标语。2015年3月,居住着汉族、苗族群众,有着800多户3000多人的必寨村,被国家司法部、民政部表彰为第六批＂全国民主法治示范村（社区）＂。＂现在我们村治安比以前好了很多。

走近“绿色地平线”——迪庆州生态农业发展见闻

8月初,山脚下的马铃薯开花了。紫色的、白色的,点缀在绿色枝叶中,一大片、一大片连绵不绝,如锦似绣,与远处的草地、山林融成一幅美丽的画卷。这是位于香格里拉县小中甸镇联合村唐安古村民小组的马铃薯示范种植基地。＂这里是州农科所和农户合作打造的马铃薯基地,收成最好的能达到每亩5吨!＂

绿色明珠放异彩——德宏州生物特色产业发展见闻

11月初,云南省德宏州依然弥漫着春的气息,到处一片葱绿。从芒市城区到遮放镇路边,随处可见一块块绿油油的玉米地。玉米已经长到了一人多高,开始抽穗扬花。＂这里种的主要是冬季甜脆玉米,过不了多久就可以上市了。＂德宏州农业局乡镇企业管理科科长杨善立告诉记者,去年冬季甜脆玉米售价达4~5元1公斤,效益可观,种植冬季玉米已成为当地群众增收致富的一项新来源。

高原鱼子酱的秘密

鱼子酱，对于喜欢美食的人而言一定不会陌生。它营养价值极其丰富，位居西方三大珍味之首，被誉为“软黄金”。鱼子酱是怎样生产出来的？为什么被冠以“软黄金”称誉？走进云南省目前唯一能生产鱼子酱的地方——位于玉溪市华宁县盘溪镇的云南阿穆尔鲟鱼集团盘溪基地，记者探访了这一神秘美食背后的故事。

向“零艾滋”迈进——云南省大力推进防治艾滋病工作

3年前的一天，一位进入临产期女子的求助电话让陈锋（化名）和同事们一下子急得像热锅上的蚂蚁。这位女子是HIV（人类免疫缺陷病毒）感染产妇，她非常希望把宝宝生下来，但连日来辗转于昆明市多家医院，却没有一家医院愿意接收她。

共绘云岭大地新画卷——云南统筹城乡协调发展纪实

为破除城乡二元结构难题，缩小城乡差距，推动城乡发展一体化进程，近年来，云南省出台和落实一系列政策措施，统筹城乡协调发展，不断加快城乡基础设施建设步伐，加大城乡社会事业及公共服务设施建设力度，

让民主的阳光洒照大地

“基层旁听席”、“记者抽签提问”、“社会开放日”……这些出现在2012年12月29日至30日于蒙自召开的红河州七届二次党代会上的词汇，让与会者耳目一新。两天的会议安排紧凑，一股开放、透明、民主的会风扑面而来。

龙头企业助推农业产业化

沿着珠江源公路进入沾益县炎方乡后不久，只见一条新铺的柏油路在小山坡间蜿蜒延伸，路两边的地里，满是一排排刚吐出新芽、半人多高的小树苗。

郑进美:有了进步才是美

“90后”、“19岁”、“身高155厘米”、“女孩”……走进普洱军分区之前，当有关她的这些关键词传人耳中的时候，记者还很难将她与荣立一等功，连连获誉的巾帼英雄联系在一起。她叫郑进美，普洱军分区通信站的一名女兵。

让服务遍及村村寨寨

为更好地服务群众，孟连县通过“8433”管用实在的创新做法，走出了一条创建基层服务型党组织之路。这是对“盂连经验”的深化、拓展、充实和提升。

走近“插甸经验”

深入开展“四群”教育以来，武定县插甸乡的变化日新月异，人民群众绽放出更加灿烂的笑靥。是什么力量让一个闭塞落后的少数民族杂居地在短短时间内发生巨变？让我们——

昆明市:让城乡同发展共繁荣

近年来，昆明市通过规划全覆盖、推进城镇化、促进农民进城等举措，着力破解难题、统筹城乡，一幅城乡同发展、共繁荣的现代新昆明画卷正徐徐展开。

盐津:因地制宜筑“岩城”

乌蒙山脉关河深谷中段沿河两岸，一幢幢楼房依山而建、傍水而筑，鳞次栉比，绵延数里连成一个城镇，这就是盐津县城。多年以来，盐津人在几乎没有一块平地的山谷中，建起了一座令人叹为观止的“岩城”。