鸡胚法分离福建省甲型H1N1流感病毒及分离株特征

目的建立甲型H1N1流感病毒鸡胚分离方法,了解病毒分离株特征,为疫苗制备和开展实验室常规监测等奠定基础。方法呼吸道标本接种鸡胚尿囊腔;血凝(HA)法测定收获的尿囊液中病毒滴度;逆转录PCR法检测病毒亚型特异性。使用甲醛灭活鸡胚分离物,灭活效果采用鸡胚接种法评价。血凝抑制(HI)实验检测急性期和恢复期血清,评价检测病毒感染后的免疫应答情况。结果从13份患者的呼吸道标本中分离出12株甲型H1N1流感病毒。多数病毒可在第二次传代鸡胚中分离到。病毒分离株的血凝滴度较低,为1∶1～16。阳性分离物再次接种鸡胚无法显著提高其HA效价。同鸡和人"O"型红血球比较,使用豚鼠红细胞可得到更高的血凝滴度。1‰甲醛可在24h内完全灭活病毒,但同时病毒的HA效价显著降低。病毒感染后,恢复期的HI滴度较急性期有2～16倍升高,HI抗体4倍增长需要约3w时间。结论鸡胚分离可应用于甲型H1N1流感病毒的分离,病毒的HA滴度较低。尽管甲醛可迅速灭活病毒,但灭活后病毒抗原血凝效价难以维持。病毒感染后,特异性血凝抗体产生较慢,同时滴度较低。基层实验室采用豚鼠血球更适合于病毒的HA滴度测定。

福建省2004-2008年职业暴露人群H9亚型禽流感病毒抗体血清流行病学调查

目的了解福建省职业人群H9亚型禽流感病毒感染状况,为人禽流感防治提供基础资料和科学依据。方法定期采集职业暴露人群血清标本,应用常规血凝抑制试验微量半加敏法检测福建省不同地区职业暴露人群H9亚型禽流感病毒抗体,描述抗体阳性人群分布特征,并作统计分析。结果 2004-2008年共检测血清标本5897份,共检出阳性标本243份,总阳性率为4.12%;阳性标本中,抗体滴度普遍较低,平均抗体滴度为1∶22.8;全省9个地市中,宁德市阳性率最高(6.24%,26/417),福州市抗体阳性率最低(1.46%,13/893);2005年检出率最高(6.68%,49/733),2004年最低(1.33%,8/603);从事家禽养殖、家禽经营屠宰、兽医防疫的3种职业暴露人群抗体阳性率分别为4.38%、3.52%和3.14%。结论福建省职业暴露人群中存在H9亚型禽流感病毒感染,但感染率不高,职业暴露人群H9抗体阳性率在地区、年龄上无显著性差异,从事家禽养殖、家禽经营和屠宰、兽医防疫3种职业的人群抗体阳性率无显著性差别。

福建省人感染高致病性禽流感病毒的分离及灭活病毒抗原的制备

目的从患者呼吸道标本中分离高致病性禽流感病毒(H5N1),摸索病毒灭活条件,用于制备安全和有效的高致病性禽流感病毒灭活抗原。方法鸡胚分离法分离高致病性禽流感病毒,应用甲醛和戊二醛两种灭活剂对分离物进行灭活。用鸡胚培养法进行病毒增殖试验,以确定灭活效果,同时测定灭活病毒的血凝效价。结果应用鸡胚分离法,并用电子显微镜及RT-PCR鉴定,确认从福建省人感染病例中分离出高致病性禽流感病毒。在应用甲醛和戊二醛对病毒进行灭活时,在1‰～5‰终浓度、4℃作用24h的条件下,两者均能完全灭活病毒;灭活病毒的血凝效价随着灭活剂的浓度增高而逐渐下降;灭活病毒随保存时间的延长,其血凝活性逐步下降;应用甲醛灭活后的病毒抗原,其血凝效价可维持更长时间。结论首次分离成功福建省人感染高致病禽流感病毒。应用1‰终浓度的甲醛可使高滴度的病毒完全灭活,并保持较好的血凝活性,适用于大量制备高致病性禽流感病毒灭活抗原。

福州市人群甲型H1N1流感血清流行病学研究

目的了解在不同流行时期福州市人群的甲型H1N1流感(甲流)血清抗体水平。方法自2009年11月30日至2010年3月22日,共5次在福州市的4家医院和1家采供血机构随机选择调查对象,每次调查采集400例血清。以血凝抑制试验方法 (haemagglutination inhibition,HI)检测血清HI抗体。结果 5次调查的人群甲流HI抗体阳性率依次为1.75%、8.00%、11.25%、12.50%和14.25%,抗体几何平均滴度(GMT)则分别为5.49、6.81、7.59、8.83和8.54。不同时间段之间抗体阳性率和GMT的差异有显著统计学意义(P<0.01)。4个年龄组中,以6-17岁的抗体阳性率和GMT的增长幅度最大且有显著统计学意义(P<0.01)。男女性别之间抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。在接种甲流疫苗的人群中,抗体阳性率和GMT分别为46.43%和28.99,均显著高于非接种者的7.20%和6.76(P<0.01)。结论至2010年3月20日,福州市人群甲流抗体水平显著提高,已初步形成免疫屏障,但应加强重点人群的防控措施。

150例艾滋病咨询电话分析

艾滋病是一种恶性传染性疾病，不仅对人的生命造成危害，而且影响到经济的发展、国家的兴衰、民族的存亡。为了预防和控制艾滋病病毒在我省的广泛传播，并防止或减少其不良的心理社会反应，我省于１９９４年开设艾滋病咨询热线，面向社会提供艾滋病有关咨询服务，热线自开...

2003—2004年福建省流感暴发监测分析

[目的]了解福建省流感流行动态,探索流行规律,为流感防治提供科学依据。[方法]进行流行病学调查,用MDCK细胞和鸡胚进行病毒分离,用血凝抑制实验对病毒株进行分型鉴定及血清流感抗体测定。[结果]2003—2004年我省共报告局部暴发流感疫情49起,发病3 088例,共采集咽拭子或漱口液标本360份,分离流感病毒阳性率25.8%(93/360)。其中甲3型88株(94.6%),乙型5株(5.3%)。2年共采集流感样患者急性期、恢复期血清各221份,其中甲3型抗体4倍增长阳性率58.4%(129/221),乙型抗体4倍增长阳性0.5%(11/221)。[结论]引起福建省2003—2004年流感暴发的毒株以甲3型为主,暴发的时间主要集中在每年的4月和9月。

流感病毒不同分离方法的比较

[目的 ]比较 MDCK细胞和鸡胚对流感病毒的敏感性。 [方法 ]对 1998年采集的上呼吸道标本分别接种 MD-CK细胞及鸡胚进行比较。 [结果 ]两种方法从 433份标本中共分离流感病毒 31株。其中甲 3型 2 5株、乙型 6株。MDCK细胞分离甲 3型 2 5株、乙型 5株 ;鸡胚分离甲 3型 9株、乙型 5株。 [结论 ]MDCK细胞分离甲3亚型流感病毒比鸡胚敏感 ;乙型无显著差别。因此 ,要提高分离率 。

2006年福州流感监测点病原监测结果分析

[目的]分析2006年福州市流感监测点分离的58株流感毒株,为防治提供依据。[方法]用鸡胚法和MDCK细胞法分离病毒,用红细胞凝集抑制试验对病毒进行型和亚型鉴定。[结果]病毒阳性率8.1%(58/712)。其中甲1亚型(H1N1)39株;乙型(B)19株,其中Yamagata系8株,Victoria系11株。[结论]2006年福州市全年流感以H1N1型为主,与往年不同的是流行高峰除4月外,1月形成一个更高的流行峰,夏季高峰仍在7月。2007年应密切关注甲3亚型流感的趋势。

一起甲3型流感的流行特征及其病原学分析

[目的]对2003年8月福建省某县司前乡的一起暴发流感进行流行病学调查与病原学分析。[方法]进行流行 病学调查,用MDCK细胞和鸡胚进行病毒分离,用血凝抑制试验对分离到病毒的标本进行分型鉴定。[结果]司前乡暴发疫 情波及4个行政村,发生疑似流感326例,罹患率7.7%;流感病毒分离阳性率75%(7/9)。[结论]是一起由甲3型流感病 毒引起的暴发流行。

2006年福建不同地区流感监测点病原学监测结果分析

[目的]分析2006年福州市和龙岩市流感监测点病原分离结果,为预防工作提供依据。[方法]用鸡胚和MDCK细胞分离流感病毒,红细胞凝集抑制试验进行毒株型和亚型鉴定,对龙岩监测点分离的2007—2008流感流行代表株B/福建新罗/54/2006进行抗原分析。[结果]2006年福州市病毒分离阳性率8.1%?58/712?,其中H1N1型39株,乙型19株(Victoria系11株,Yamagata系8株);龙岩市阳性率4.9%(20/412),其中H1N1型18株,乙型2株(Yamagata系),未分离出乙型Victoria系毒株。2007—2008流感代表株B/福建新罗/54/2006与B/上海/361/2002和B/天津/144/2005比较,抗原已发生变异。[结论]2006年福州和龙岩市监测点分离的流感均以H1N1为主,未分离出H2N3。流行高峰均在1月,不同的是福州市监测点在4月形成另一个高峰,而龙岩市在3月形成一个高峰,2个监测点在7月都形成一个小高峰。

1999年福建省不同流感监测点人群抗体水平分析

[目的 ]监测不同监测点人群流感抗体水平和流行趋势 ,为预防和控制提供依据。 [方法 ]采用微量半加敏血凝抑制方法检测抗体。 [结果 ]3个监测点人群抗体阳性率依次为甲 3亚型 5 9.9%、甲 1亚型 5 3.7%、B/北京 / 184 / 93为4 3.3%、B/北京 / 2 4 3/ 97为 6 .2 %。不同监测点流感抗体型别阳性率不同 ,甲 1型 3个监测点间无差异 (P>0 .0 5 ) ,而不同型别的抗体阳性率存在显著差异 ,不同年龄组抗体阳性率也不同 ,抗体滴度低 ,GMT均 <1∶ 4 0。 [结论 ]福建省流感 B/北京/ 2 4 3/ 97感染率非常低 ,其余 3型阳性率接近或大于 5 0 % ,但抗体滴度低 ,GMT均小于人群流感感染保护水平 ,应加强监测 ,做好预测预报工作。

AA/福建/411/02(H3N2)的基因序列分析及个案调查

目的了解A/福建/411/02(H3N2)病毒抗原性变异与临床症状的意义。方法用流感病毒血凝抑制实验检测流感血凝素的抗原性,用新鲜病毒细胞培养液提取病毒RNA,进行逆转录-聚合酶链式反应,扩增产物用纯化试剂盒纯化后测序,用Meg Align软件进行序列分析。结果A/福建/411/02(H3N2)与A/福建/151/2000(H3N2)相比较,抗原性发生较大变异,抗原决定簇A、B、D、E上有8个氨基酸,受体结合部有5个氨基酸发生替换。结论感染新变异较大A(H3N2)流感病毒患者的临床表现更重。

福建省甲型H1N1流感病毒分离及首例分离株全基因组序列分析

目的分离甲型H1N1流感病毒,分析福建省首例病毒分离株全基因组序列和遗传特征,为研究病毒进化、致病性、流行规律提供科学依据。方法采用MDCK细胞和Real-time PCR法进行病毒分离、鉴定;提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增其8个基因片段,测定核苷酸序列,利用生物信息软件拼接全基因组序列;分析重要基因位点,利用GENBANK中相关序列对首例病毒分离株A/Fujian/01/2009(H1N1)进行基因进化树分析。结果从82例甲型H1N1流感确诊病例标本中分离出50株甲型H1N1流感病毒,第一代分离阳性率60.98%。在福建省首次获得甲型H1N1流感病毒株及全基因组序列。基因组序列分析证明:该毒株与2009年大流行株高度同源,其基因组存在四源重组现象;氨基酸位点分析其对达菲药物敏感,对金刚烷胺类药物耐药;相对于猪流感代表株A/Swine/Iowa/15/1930(H1N1)存在6个HA抗原决定簇位点变异。结论MD-CK细胞对甲型H1N1流感病毒具有较高敏感性;福建省首例甲型H1N1流感病例分离病毒株与北美流行株高度同源;相对于以往古典型猪流感代表株出现了HA蛋白抗原性漂移;为今后进一步开展甲型H1N1流感病毒分子生物学研究奠定基础。

2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的通过对2010—2012年福建省分离的H3N2亚型流感毒株血凝素HA1基因进行分析，了解2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒的基因特征和变异规律。方法随机选择28株毒株，提取病毒RNA，采用RT-PCR扩增目的片段，纯化PCR产物后进行测序；利用DNAstar和Mega4．0等生物信患学软件进行核苷酸整理、拼接、校对、差异性比较以及基因进化树构建等分析研究。结果28株H3N2亚型流感病毒HAl区核苷酸同源性在96．4％～100％之间。基因系统进化分析显示，其进化规律都是沿着树枝主干随着时闻推移向，上延伸，序列的差异和年代成正比。2010—2012年间HAl区共出现43个氨基酸位点的变化，其中有10个氨基酸位点变异累计涉及4个抗原决定簇，2个变异位点发生在受体结合位点（RBS）及其附近，应予高度重视。结论相对于A／Perth／16／2009疫苗代表株，2012年的部分H3N2亚型流感出现了抗原漂移；部分毒株已出现氨基酸位点的改变，并涉及抗原决定簇及受体结合位点，提示2010—2012年福建省人群中流行的H3N2亚型流感正逐渐发生变异，应加强流感病原学监测，以及时发现新的流感变异株，为福建省流感防控提供科学依据。

福建省人感染H5N1禽流感病毒血凝素基因测定和分析

目的了解我省人感染高致病性禽流感H5N1亚型病毒血凝素基因的特点以及和其他毒株序列间的关系。方法从采集自两例福建省感染者的标本中扩增H5N1禽流感病毒血凝素基因并作序列测定,获得的序列同其他H5N1禽流感病毒的血凝素基因进行比较并作进化分析。结果获得福建省的两例感染者中的H5N1禽流感病毒血凝素基因,并推导出该基因的氨基酸序列。结果表明,两株病毒的血凝素基因在蛋白酶水解位点均含有多个连续的碱性氨基酸,符合高致病性禽流感病毒的特征。经Blast程序检索发现,我省两例感染者与国内其他省份的感染者携带的病毒血凝素基因具有很高的相似性,提示国内的H5N1禽流感病毒感染者的病毒来源可能有一定的关系。结论通过对两例福建省感染者标本中的H5N1禽流感病毒血凝素基因进行序列测定,了解病毒基因的部分特点。通过序列比较分析为分子流行病学调查提供线索,但还需对其他基因序列以及病毒的致病性等生物学特征作进一步分析。

福建省2009年甲型H1N1流感病毒NA基因特征及对达菲的耐药性

目的监测福建省甲型H1N1流感病毒NA基因的变化以及对达菲的耐药情况,为临床诊疗和疾病控制提供参考依据。方法从福建省流感监测网络中随机选取23株甲型H1N1流感病毒,经病毒核酸提取和一步法RT-PCR扩增,获得NA基因片段,双向测定核苷酸序列,分析NA基因序列和重要氨基酸位点特征。结果 23株甲型H1N1流感病毒NA片段基因与A/California/07/2009(H1N1)代表株的核苷酸序列进行比较,同源性高达98.1%以上;23株毒株NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸。结论随机选取的23株甲型H1N1流感病毒NA基因片段保持高度同源并且对达菲仍然敏感。随着国内外达菲耐药株的不断出现,应加强耐药性监测,为制定应对甲型H1N1流感流行措施提供参考。

甲型H1N1流感疫苗血清抗体消长研究

目的了解甲型H1N1流感疫苗接种后血清抗体的消长规律,为免疫策略提供依据。方法对128名接种甲型H1N1流感疫苗的研究对象在接种后的第3、6、9、12个月采集血清标本,以血凝抑制试验方法(HI)检测血清HI抗体。结果 128名对象在接种疫苗后的第3、6、9、12个月抗体阳性率和几何平均滴度(GMT)分别为61.7%和40;47.7%和28.4;40.9%和24.5;35.43%和23.6,差异有显著统计学意义(P<0.01)。不论男女,抗体阳性率和GMT均随时间推移显著降低(P<0.01)。不同年龄组的抗体GMT也显著下降(P<0.01)。79名抗体阳性者在第3、6、9、12个月的抗体阳性率和GMT分别为100%和104.09;75.95%和58.33;64.56%和45.23;54.43%和41.82,差异有显著统计学意义(P<0.01)。无论性别或年龄,抗体阳性率和GMT均随时间推移显著降低(P<0.01)。结论甲型H1N1流感疫苗的血清抗体水平随时间推移快速下降,免疫力不持久。

甲型H1N1流感血清流行病学研究进展

甲型H1N1流感（甲流）病毒是4源重配病毒，由经典猪流感病毒、欧洲猪流感病毒、禽流感病毒和人流感病毒重配而成，人群对甲流病毒普遍易感。2009年6月11日，世界卫生组织（WHO）宣布将甲流流行警告级别提升为6级，全球进入流感大流行阶段。