HO-1对IPEC-J2细胞氧化损伤的缓解作用

旨在研究HO-1对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化损伤的缓解作用。利用不同浓度H_(2)O_(2)(100、200、300、400、500、600、1000μmol/L)分别处理IPEC-J2细胞6、12、24 h,利用CCK-8法检测细胞活力,确定H_(2)O_(2)处理细胞的浓度。将IPEC-J2细胞分为对照组(CT)、H_(2)O_(2)组、HO-1+H_(2)O_(2)组,每组3个重复。RT-qPCR检测IPEC-J2细胞中IL-1α、IL-6、IL-8、Keap1、Nrf2 mRNA的相对表达丰度;ELISA检测IPEC-J2细胞中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性;化学荧光法检测细胞中活性氧(ROS)水平。结果显示,随着H_(2)O_(2)浓度的增加,IPEC-J2细胞活力降低,400μmol/L H_(2)O_(2)处理12 h,600μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h或24 h,IPEC-J2细胞活力均降至50%以下。根据细胞活力下降50%的原则,后续选用400μmol/L H_(2)O_(2)处理IPEC-J2细胞12 h。与CT组相比,H_(2)O_(2)组IPEC-J2细胞中的IL-1α(P<0.05)、IL-6(P<0.01)和IL-8(P<0.01)mRNA相对表达丰度增加,细胞中ROS荧光强度增强(P<0.01)和MDA含量(P<0.001)升高。与H_(2)O_(2)组相比,HO-1+H_(2)O_(2)组IPEC-J2细胞中IL-6(P<0.05)、IL-1α(P<0.01)和IL-8(P<0.05)mRNA相对表达丰度降低,细胞中ROS荧光强度减弱(P<0.05)和MDA含量显著下降(P<0.01)。Keap1/Nrf2信号结果显示,H_(2)O_(2)上调Keap1 mRNA表达(P<0.01),下调Nrf2 mRNA表达(P<0.01),降低CAT活性(P<0.01);HO-1与H_(2)O_(2)共处理,IPEC-J2细胞中Keap1 mRNA表达下调(P<0.01),Nrf2 mRNA表达上调(P<0.01),CAT活性升高(P<0.01)。提示400μmol/L H_(2)O_(2)能诱导IPEC-J2细胞发生氧化损伤,HO-1能在一定程度上缓解H_(2)O_(2)诱导IPEC-J2细胞的氧化损伤,HO-1能激活H_(2)O_(2)抑制的Keap1/Nrf2信号,促进抗氧化酶CAT的产生,发挥抑炎、抗氧化作用。

艾美耳球虫对高原鼠兔繁殖的影响

寄生物对宿主繁殖的影响取决于宿主对当前繁殖值和剩余繁殖值的权衡。球虫为微型寄生物,而微型寄生物对宿主当前繁殖值的影响较剩余繁殖值要大。因此,本研究检验了寄生在高原鼠兔肠道内的艾美耳球虫可影响其当前繁殖的假设。在繁殖早、中、晚期,野外共观测高原鼠兔170只。结果表明,不同繁殖期感染率有显著差异。在繁殖中期,未感染雌性的妊娠率显著高于感染雌性。且未妊娠雌性较妊娠雌性有更高的感染强度,但在另外两个繁殖期没有发现此效应。在雄性中,任何繁殖期的感染强度和感染率与睾丸和附睾指数均无显著相关性,且感染和未感染球虫雄性睾丸及附睾指数无显著差异。此外,野外观测实验结果表明,感染雌性的胚胎重较未感染雌性显著降低,与野外感染对胚胎重量影响的实验结果相一致。说明艾美耳球虫感染可影响胚胎的发育。上述结果说明,艾美耳球虫对高原鼠兔繁殖的影响随繁殖期而有不同效应,且存在性别间差异,这种效应可能与不同性别间的繁殖对策有关。

HO-1在巨噬细胞中的抗炎和抗氧化作用

【目的】旨在揭示血红素加氧酶1(HO-1)在巨噬细胞中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度脂多糖(LPS,0、3、5、10、15、20、25μg/mL)、HO-1(0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10μg/mL)及锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZPP;0、5、10、15、20、30 ng/mL)分别处理巨噬细胞(RAW264.7),12 h后通过CCK8法检测RAW264.7细胞活力,计算LPS、HO-1和ZPP处理RAW264.7细胞的最佳浓度。将RAW264.7细胞随机分为对照组(CT)、LPS组(LPS)、LPS+HO-1组(LH)、HO-1组(HO-1)、LPS+HO-1+ZPP组(LHZ),每组3个重复。CT组细胞用含10%胎中血清的DMEM培养基培养;LPS组细胞用LPS处理;LH组细胞用LPS和HO-1共处理;HO-1组细胞用HO-1处理;LHZ组细胞用LPS、HO-1和ZPP共处理,各组细胞的处理时间均为12 h,收集细胞和上清。采用ELISA法检测上清液中白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)含量,实时荧光定量PCR法检测细胞中IL-6、IL-8、TNF-α、核因子E2相关因子2(Nrf2)、HO-1 mRNA表达,Western blotting检测细胞中Nrf2、HO-1蛋白的表达。【结果】与0μg/mL LPS处理细胞相比,20和25μg/mL LPS均能极显著降低RAW264.7细胞活力(P<0.01);与0μg/mL HO-1处理细胞相比,0.08和0.10μg/mL HO-1均极显著提高细胞活力(P<0.01);与0 ng/mL ZPP处理细胞相比,15、20、30 ng/mL ZPP极显著降低细胞活力(P<0.01),后续选用20μg/mL LPS、0.08μg/mL HO-1、15 ng/mL ZPP处理RAW264.7细胞。与CT组相比,LPS组细胞中IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达极显著上调(P<0.01),IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、ROS含量均极显著升高(P<0.01),GPx、SOD含量均极显著降低(P<0.01);与LPS组相比,LH组细胞中IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达均极显著下降(P<0.01),IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、ROS含量均极显著降低(P<0.01),GPx、SOD含量均极显著升高(P<0.01);与LH组相比,LHZ组细胞中IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达均极显著上调(P<0.01),IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、ROS含量均极显著升高(P<0.01),GPx、SOD含量均极显著降低(P<0.01)。Nrf2/HO-1信号通路分子表达结果表明,与CT组相比,LPS组细胞中Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达极显著上调(P<0.01);与LPS组相比,LH组细胞中Nrf2和HO-1 mRNA表达极显著下调(P<0.01),Nrf2蛋白表达极显著下降(P<0.01),而HO-1蛋白表达极显著上升(P<0.01);与LH组相比,LHZ组细胞中Nrf2和HO-1 mRNA表达均极显著上调(P<0.01),Nrf2蛋白表达极显著上升(P<0.01),HO-1蛋白表达极显著下降(P<0.01)。与CT组相比,HO-1组各项指标均差异不显著(P>0.05)。【结论】20μg/mL LPS诱导巨噬细胞产生炎性反应和氧化应激,0.08μg/mL HO-1具有抗炎和抗氧化作用,HO-1调节Nrf2信号通路发挥抗炎和抗氧化作用。

地锦草水提物在IPEC-J2细胞中的抗炎与抗氧化作用

【目的】为了揭示地锦草(EH)在猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度EH水提物(0、5、10、50、125、200μg/mL)处理IPEC-J2细胞12 h,通过CCK-8法检测IPEC-J2细胞活力,确定EH处理细胞的最佳浓度。将IPEC-J2细胞随机分为对照组(CT)、脂多糖(LPS)组(LPS)、EH+LPS组(ELP),每组3个重复。CT组细胞正常培养不做任何处理,LPS组细胞用5μg/mL LPS处理,ELP组细胞用5μg/mL LPS和最佳浓度EH共处理,各组细胞均处理12 h后,收集细胞和上清。利用实时荧光定量PCR方法检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)mRNA表达;ELISA法检测上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,化学荧光法检测上清液中活性氧(ROS)水平。【结果】与0μg/mL EH组相比,5、50μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力显著增加(P<0.05);10μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著增加(P<0.01),125μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力下降,但差异不显著(P>0.05),200μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著下降(P<0.01)。因此,后续选用10μg/mL EH处理IPEC-J2细胞。与CT组相比,LPS组IPEC-J2细胞中IL-6、TNF-α基因mRNA的表达极显著增加(P<0.01),上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度极显著增加(P<0.01),Keap 1、Nrf 2和HO-1基因mRNA表达极显著下降(P<0.01),抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量极显著下降(P<0.01)。与LPS组相比,ELP组IPEC-J2细胞中IL-6基因mRNA表达极显著下降(P<0.01),TNF-α基因mRNA的表达显著下降(P<0.05),细胞上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度均极显著下降(P<0.01),Keap 1、Nrf 2、HO-1基因mRNA表达极显著增加(P<0.01),GSH-Px含量极显著升高(P<0.01),SOD含量显著升高(P<0.05)。【结论】EH水提物在猪小肠上皮细胞中通过激活Keap1/Nrf2信号,提高抗氧化酶SOD和GSH-Px含量,启动下游靶基因HO-1表达,发挥抗炎和抗氧化的作用,且10μg/mL EH水提物作用效果最佳。

过渡季节两种采暖方式室内温度场的实验研究

使用IMP数据采集系统,对过渡季节西安地区集中采暖房间和变频空调采暖房间温度进行测试。结果显示,与集中采暖相比,变频空调采暖房间工作区域的温度场的温度梯度为2.35℃和同一水平面上温度不均匀性较大,其最大差值有1.2℃。因此,对过渡季节西安地区房间的热舒适性而言,集中采暖比变频空调采暖优越。

共轭亚油酸(CLA)对乳脂肪球粒径和磷脂酰胆碱含量的影响

随机选取16头处于泌乳中期的荷斯坦奶牛,分为2组。对照组仅饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加400 g/d共轭亚油酸(CLA)微囊粉,试验为期8 d,对第8天采集乳样进行乳成分分析,重力法分层后分析牛乳脂肪球粒径大小,液相色谱串联质谱测定大粒径和小粒径乳脂肪球的磷脂酰胆碱(PC)含量。结果发现,与对照组相比,饲喂CLA可降低牛乳的乳脂肪含量(P<0.05)。牛乳经重力分层后,CLA处理组平均粒径参数D[3,2]、D[4,3]、DV(10)、DV(50)、DV(90)在F1~F6层均显著降低(P<0.05),比表面积(SSA)则显著升高(P<0.05)。磷脂含量分析发现与CON组相比,CLA组在F1层中的PC(28∶0)、PC(30∶0)、PC(31∶0)、PC(32∶0)、PC(30∶1)含量显著下降(P<0.05)。在F6层中21种PC化合物含量都显著降低(P<0.05)。这些结果表明CLA处理可降低牛乳脂肪、脂肪球粒径和磷脂酰胆碱的含量,增加乳脂肪球比表面积,从而为生产不同粒度的乳脂肪球打下基础。

牛乳来源外泌体对巨噬细胞极化调控作用的研究

本研究旨在探究不同牛乳来源外泌体(exosomes,Exo)对巨噬细胞极化的影响。无菌采集10份牛乳样品,通过体细胞数(somatic cell count,SCC)测定和细菌学鉴定判断乳样性质;差速超速离心法富集纯化牛乳来源Exo;通过纳米颗粒跟踪分析(NTA)、透射电镜(TEM)、Western blot(WB)鉴定Exo;荧光示踪法检测Exo能否被巨噬细胞(Raw264.7)内化;实时荧光定量PCR(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测牛乳来源Exo作用于Raw264.7细胞后促炎性细胞因子、抗炎性细胞因子mRNA水平及蛋白水平的变化。通过SCC判定有4份正常乳样,6份炎症乳样;从炎症乳样中分离出4株致病菌,生物学特性分别与大肠杆菌、绿脓杆菌和克雷伯肺炎杆菌基本一致,经16S rDNA基因测序比对分析证实菌株为上述致病菌;超速离心法分离得到10份乳样Exo;不同牛乳样本来源Exo与Raw264.7共培养6 h后均能被其内化;与对照(Con)组相比,低体细胞数来源Exo(L-Exo)组和高体细胞数来源Exo(H-Exo)组均能显著增加Raw264.7细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),一氧化氮合酶(iNOS)和巨噬细胞甘露糖受体CD206蛋白表达显著升高(P<0.05),IL-10、转化生长因子(TGF)-β的mRNA和蛋白水平下降(P<0.05),精氨酸酶(Arg)-1 mRNA表达水平下降(P<0.05)。在奶牛乳腺炎症反应过程中,炎症奶牛牛乳来源Exo可促进巨噬细胞向M1型极化,高表达促炎性细胞因子,促进炎症反应,而乳腺健康状态下分泌的Exo能介导巨噬细胞向M2型极化,表达高水平的抗炎性细胞因子,参与机体免疫调节,有一定的抗炎作用,证明牛乳Exo可调节巨噬细胞极化过程。

母体密度应激与球虫感染对子代根田鼠免疫力的影响

免疫功能是影响动物个体适合度的重要因素之一,也是防御病原体入侵的重要途径,对动物的生存至关重要。种群密度与寄生物感染都能影响动物的免疫功能。本实验通过2×2析因实验设计,测定了母体密度应激+球虫感染、母体密度应激+未球虫感染、未母体密度应激+球虫感染、未母体密度应激+未球虫感染4个处理对根田鼠子代粪便皮质酮、球虫感染率、白细胞总数、各型白细胞的百分比、淋巴细胞亚型计数(CD4,CD8计数)等指标。结果表明,高密度母体应激处理可显著降低CD4数量、CD4/CD8比例、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、白细胞数,母体密度应激与球虫的耦合可使上述免疫指标进一步降低,说明母体密度应激和球虫感染对于根田鼠的免疫具有负的叠加效应。

捕食风险对越冬根田鼠肠道寄生物易感性的影响

在自然生态系统中,不同营养级物种可通过特征介导间接效应对生态系统的稳定及种群产生深刻的影响。但目前有关特征介导间接效应的实验研究多见于无脊椎动物、鱼类和两爬类。本研究以根田鼠为对象,在野外围栏内建立预防捕食者和未预防捕食者两种实验处理种群,并通过采用麦克马斯特法测定两种处理种群实验个体肠道寄生物感染种类及感染率和感染强度,采用PHA(phytohemagglutinin)反应和白细胞分类计数测定不同处理种群实验个体免疫能力,以分析捕食风险对根田鼠肠道寄生物的感染效应。结果表明,未预防捕食者处理组根田鼠PHA反应、白细胞计数和淋巴细胞计数较预防捕食者处理组实验个体显著降低,而球虫E.wenrichi的感染率和感染强度则显著增加,但绦虫和线虫以及其他3种球虫的感染率和感染强度无显著差异。结果表明,捕食者可通过介导猎物免疫力特征而间接影响猎物肠道寄生物的感染,验证了本项提出的捕食风险可通过降低根田鼠的免疫能力而增加其肠道寄生物感染的假设。

变频空调与散热器采暖房间温度场对比研究

针对西安地区某一办公房间采用变频空调或散热器两种采暖方式分别进行了IMP数据采集系统实测与数值模拟的对比研究,结果表明,变频空调采暖时工作区域内温度梯度较大,为3℃左右,散热器采暖时工作区域内温度梯度为0.7℃左右。根据房间实际尺寸建立物理模型并对两种采暖方式的室内温度场和流场进行了数值模拟,模拟结果与实测结果基本吻合。通过数值模拟和分析两种采暖方式的特点及对室内热??的影响,理论上得出散热器采暖方式的室内温度场和流场更加均匀的结果。

动物生理学课程思政建设与实践

从教育的根本目的出发,结合动物生理学知识补充思政教育内容,深入挖掘动物生理学课程中的思政元素,丰富新时期思政教育途径,满足学生成长发展需求。

动物医学专业不同课程协同教学探索与实践——以动物生理学与生物化学课程协同教学为例

在新时代高等教育内涵式发展中,高等农业院校为适应一流学科和一流专业建设的现实需要、响应新农科建设实施卓越农林人才培养目标的客观需要,构建农林教育质量新标准和建设“金专”课程的迫切需要,高等农业院校教师必须着力进行课程内容协同更新,推动综合性、问题导向性新型课程群教学改革与创新。为适应不同课程协同教学改革的需要,动物医学教育对动物生理学和生物化学的协同课程教学进行探索和实践:成立动物生理生化教师教学团队,构建教学与学术研究教师共同体;团队凝练动物生理生化课程的结合点,进行教学内容规划、设计和设置,实施协同教学。动物生理生化课程协同教学以本科教育为基本点,以课程协同教学模式为抓手,突破原有课程的设置,实现不同课程的融合和统一,有效地提升教学质量,提高课程的高阶性、创新性和挑战度,为高等农业院校不同课程协同教学改革提供参考和借鉴。

猪肠黏膜保护因子HO-1的短小芽孢杆菌表达系统建立与分析

【目的】对猪黏膜保护因子——血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因进行克隆及原核表达,为研究高表达HO-1在肠黏膜损伤中的保护作用提供技术支持。【方法】根据GenBank中公布的HO-1序列(登录号:NM_001004027.1),利用Primer Premier 6.0设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增HO-1基因片段,将其与pMD19-T克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定;将载体pNCMO2与重组载体pMD19-T-HO-1进行SalⅠ和KpnⅠ双酶切,使用T4 DNA连接酶连接,利用电击转化技术将重组表达载体pNCMO2-HO-1转入感受态短小芽孢杆菌,使用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting分析HO-1在短小芽孢杆菌中的融合表达情况。【结果】猪HO-1基因全长897 bp,编码298个氨基酸。双酶切后在约5200和897 bp处分别观察到pNCMO2载体片段和HO-1基因片段,证明成功构建基因表达载体pNCMO2-HO-1;电转后的双酶切结果表明,在相同的位置观察到pNCMO2和HO-1片段,证明重组表达载体pNCMO2-HO-1成功导入短小芽孢杆菌。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果发现,在36.5 ku处出现了明显的蛋白印迹,表明成功表达了HO-1的重组蛋白,且为胞外分泌。【结论】本研究成功构建了HO-1的重组原核表达载体,pNCMO2-HO-1重组载体可以在短小芽孢杆菌中诱导表达。

钢铁厂电气室通风空调设计方案浅析

本文以江苏某炼钢生产线电气设备室的通风空调系统设计为例,结合项目地点的室外气象参数和室内热湿环境特点,分析了电气室常采用的全面机械通风、全空气一次回风空调系统系统的特点,并指出了设计中存在的一些问题。

节能技术在百度科技园项目中的应用

文章以建筑能耗的现状为出发点,分析了建筑能耗的主要影响因素及降低建筑能耗的具体措施。结合百度科技园项目,主要讨论内、外遮阳技术、太阳能技术、冰蓄冷空调在项目中使用情况。

河南省1996～2000年食物中毒分析

目的 研究河南省食物中毒发生的规律及趋势,探讨预防措施,以减少食物中毒的发生。方法 对河南省1996～2000年全省各地市食品卫生监督机构食物中毒个案报表汇总统计,根据其发生中毒的种类、场所、致病因素等进行归类,食物中毒的诊断按国家标准进行。结果 食物中毒的发生在河南省种类多是植物性食品、场所以农村乡镇家庭聚餐为最多。致病因素多是农药和化学物。结论 针对食物中毒发生的种类、场所及致病因素,加强预防性卫生监督,减少食物中毒的发生。