基于高分辨率熔解曲线检测MD肿瘤微卫星不稳定性

本研究旨在通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)方法检测马立克病(Marek′s disease,MD)肿瘤中存在的微卫星不稳定现象(microsatellite instability,MSI)。通过临床症状、病理剖检、组织病理学、PCR及测序确定为马立克病。采集5只发病鸡的肌肉、肝、脾、血液及肿瘤组织,提取DNA,采用15对扩增微卫星DNA序列的引物进行HRM检测,得到归一化处理的差异熔解曲线,比较分析各组织熔解曲线的差异,分析15个微卫星标记是否存在基因突变(即MSI)。结果表明,发病鸡的各种临床、病理表现符合为马立克病的特征,病毒meq基因序列与近年来国内流行的MDV强毒株有较高的同源性。HRM分析结果显示,MD发病鸡的肌肉、肝、脾、血液、肿瘤组织中微卫星标记PCR扩增后的熔解曲线存在明显的差异,即存在MSI现象,而且不同的病鸡个体和不同的微卫星标记发生MSI的频率不同。15个微卫星标记在5只鸡的病料中存在MSI的微卫星标记的个数分别为14、7、5、3和1。在15个微卫星标记中,MCWO200、MCW0220这两个微卫星标记在所有的病鸡中都存在MSI,而ADL0158微卫星标记在所有的病鸡中都不存在MSI。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和测序分析进一步证明这些微卫星PCR扩增片段确实存在片段大小不同,碱基序列中存在微卫星重复单位的增多、减少或基因片段的插入或缺失。结果提示,通过HRM分析可以检测MD肿瘤中的MSI现象,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。

犬支气管肺泡灌洗术建立及灌洗液细胞学统计分析

旨在建立规范的支气管肺泡灌洗术(BAL)操作、支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞学检测流程和健康犬BALF相关指标的参考数据,为BAL在兽医临床上的应用提供参考。本研究选择无呼吸道疾病指征的14只健康比格犬进行多次经支气管镜肺泡灌洗术,回收BALF,统计回收率,并对其进行有核细胞总计数(TNCC)、细胞分类计数分析,通过BAL操作绘制健康犬的内镜下支气管解剖图。结果显示,98份BALF中样品合格回收率是92.1%,出血的概率为3.4%;成功采集的89份样本中,犬BALF回收率较高的肺叶为右副叶(64.5%)、左前叶后部(60.4%)、左前叶前部(57.7%),其余肺叶回收率均在40%~50%之间;BALF平均有核细胞数304.48×10~6个/L,细胞类型出现频率由高到低依次为巨噬细胞(85.9%)、淋巴细胞(13.0%)、中性粒细胞、肥大细胞、浆细胞,而上皮细胞比例受人为操作影响较大,一般在分类计数时忽略不计。本研究绘制了健康犬内镜下支气管镜解剖图,建立了兽医临床犬BAL操作流程,获得了健康犬BALF细胞学参考值,为兽医临床上犬的下呼吸道疾病的诊断和鉴别诊断提供帮助。

犬心脏、肺动脉CT造影技术研究

[目的]本研究旨在确定犬心脏、肺动脉CT血管造影最佳造影方案。[方法]造影时对于同一体型的犬固定注射持续时间和注射速率,采用不同质量浓度的碘海醇对心脏、肺动脉血管进行造影。心脏造影碘海醇浓度(以碘含量计):小型犬,100~200 mg·mL-1;中型犬,200~300 mg·mL-1;大型犬,250~350 mg·mL-1。肺动脉造影碘海醇质量浓度:小型犬,50~100 mg·mL-1;中型犬,50~100 mg·mL-1;大型犬,150~200 mg·mL-1。犬麻醉后头静脉注射造影剂,动态扫描,获取感兴趣区域时间-密度曲线,确定扫描延迟时间,心脏造影采用主动脉窦CT值>200 HU的时间作为扫描延迟时间,肺动脉造影采用肺动脉干CT值峰值时间作为扫描延迟时间,然后进行容积扫描,获得造影图像。采用定量和定性的方法对不同造影方案获得的图像进行评价,确定最佳造影方案。[结果]心脏造影条件:小型犬:200 mg·mL-1碘海醇10 mL,生理盐水5 mL,注射速率1 mL·s-1;中型犬:250 mg·mL-1碘海醇15 mL,生理盐水10 mL,注射速率1 mL·s-1;大型犬:350 mg·mL-1碘海醇30 mL,生理盐水20 mL,注射速率1 mL·s-1。肺动脉造影条件:小型犬:75 mg·mL-1碘海醇15 mL,生理盐水15 mL,注射速率5 mL·s-1;中型犬:100 mg·mL-1碘海醇20 mL,生理盐水20 mL,注射速率5 mL·s-1;大型犬:175 mg·mL-1碘海醇30 mL,生理盐水30 mL,注射速率5 mL·s-1。在这些条件下得到的血管增强后的CT值较高,且图像质量高,造影效果良好。[结论]本试验所使用的造影剂条件可获得满意且利于临床诊断的图像,可用于犬心脏、肺动脉疾病的CT造影检查。

犬鼻腔金黄色葡萄球菌的分离及耐药性监测

旨在了解犬源金黄色葡萄球菌的耐药现状。采集动物医院就诊犬鼻拭子样本,对金黄色葡萄球菌进行分离、纯化及鉴定,并进行甲氧西林耐药基因mecA和耐药表型检测,同时分析影响携带率的相关因素。结果:共采集229份样品,其中犬鼻腔金黄色葡萄球菌携带率为35.4%(81/229);该菌mecA基因检出率为23.5%(19/81)。影响金黄色葡萄球菌携带率的因素有性别和年龄,未发现影响该菌携带mecA基因的因素。金黄色葡萄球菌对青霉素G耐药最严重(耐药率77.78%),对复方新诺明耐药较严重(耐药率为60.49%),对其余药物呈不同水平耐药性(耐药率6.17%~23.46%)。以上结果说明,金黄色葡萄球菌在犬中较为流行,犬年龄和性别是影响其携带率的重要因素,同时这些菌株已呈较高耐药性,且存在mecA耐药基因,应加强对该菌流行情况及对兽医临床中抗生素使用的监测。

犬急性水肿型胰腺炎MRI多序列扫描及增强扫描的影像特征

探究犬胰腺磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)扫描序列总结归纳犬急性水肿型胰腺炎(acute edematous pancreatitis,AEP)的MRI影像表现。选用10只成年本地杂种犬为研究对象,手术经副胰管逆行注入牛磺胆酸钠与胰蛋白酶混合液建立犬急性水肿型胰腺炎模型,然后进行MRI扫描。MRI多序列扫描图像主观与客观分析结果显示,门控采集快速自旋回波T2加权成像(FSE-T2WI-TRIG)序列与门控采集脂肪抑制快速自旋回波T2加权成像(FSE-T2WI-FS-TRIG)序列评分较高,可作为犬胰腺首选MRI扫描序列,必要时可进行造影增强扫描。FSE-T2WI-TRIG、FSE-T2WI-FS-TRIG序列AEP表现为胰腺体积呈弥散性增大,外形不规则,胰腺实质T2WI信号呈不均匀增高,强度高于同层肝组织信号。胰腺与周围脂肪界限稍有不清,胰腺周围伴有渗出,呈条片状T2WI高信号。造影后胰腺实质不均匀强化,平均强化峰值时间为注射造影剂后60~90 s,存在明显延迟强化。研究结果表明,本研究筛选的MRI扫描序列可用于临床上犬AEP的检查,同时AEP的MRI影像表现可为临床上犬AEP的诊断提供重要的依据。

犬胰腺MRI影像解剖研究

旨在筛选犬胰腺常规磁共振成像(MRI)扫描序列,获得犬胰腺的MRI影像解剖结构图谱。利用1.5特斯拉(1.5 T)磁共振扫描10条健康本地杂种犬,采用梯度回波(GRE)序列、快速自旋回波(FSE)序列、脂肪抑制(FS)、磁共振胰胆管造影(MRCP)、平衡稳态自由进动梯度回波序列(GRE_BSSFP)、弥散加权成像序列(EPI_DWI)对犬胰腺的横断面和冠状面进行了扫描;对所获取的图像进行详尽的解剖学注释,对比了不同成像序列中犬胰腺、胰管等组织结构的显影效果,分析不同序列获得的MRI图像。推荐临床犬胰腺常规MRI扫描序列:横断面FSE、FSE_FS、GRE、EPI_DWI,冠状面FSE_FS,横断面对比增强T1WI,依此得到了一套较为完整的犬胰腺MRI影像解剖图谱。本研究结果可为犬胰腺疾病的影像学诊断提供参考。

部分鸡场鸡大肝和大脾病的血清学调查

以免疫琼扩试验对３个省的４个鸡场进行了鸡大肝和大脾病的血清学调查。结果，４个鸡场中２１，５５，６０周龄鸡血清样品的阳性率分别为６．０％，２７．７％和３６．７％；肝脾材料的阳性率分别为１７．５％，３３．３％，４６．７％。

犬猫粉碎性长骨骨折内固定术疗效观察

犬猫粉碎性长骨骨折内固定术疗效观察杨德吉，侯加法，邹敦铎，张柳良（南京农业大学动物医学院，２１００９５）犬猫四肢长骨的粉碎性骨折在犬猫骨折的病例占比例很大，尤其是后肢￣［１］。在临床实践中，整复后外固定的治疗效果不能令人满意。这是因为犬猫活泼好动，难...

药物防治肉鸡腹水症的研究进展

药物防治肉鸡腹水症的研究进展杨德吉（南京农业大学动物医学院２１００９５）侯世忠（山东胜利油田肉鸡场）肉鸡腹水症（ＡｓｃｉｔｅｓｉｎＢｒｏｉｌｅｒＣｈｉｃｋｅｎｓ）是当今世界各国肉鸡养殖业的一大难题，与猝死症、腿病并列为肉鸡养殖业的三大新病。自８０年代...

膀胱尿道逆行造影对犬前列腺增生的诊断

膀胱尿道逆行造影是应用造影剂从尿道口注入尿道和膀胱,使得尿道和膀胱显影,从而观察其形态、位置以及与周围器官组织关系。前列腺增生是公犬的常见病,增生的前列腺挤压尿道,使其发生狭窄。尿道逆行造影后,在前列腺尿道部位可见造影剂的充盈缺损。其影像清晰直观,结合临床症状,容易得出诊断意见。

早孕因子化学本质的研究进展

早孕因子化学本质的研究进展杨德吉，吉传义，龚晓明（南京农业大学动物医学系，南京２１００９５）关键词早孕因子早孕因子（ＥＰＦ，ＥａｒｌｙＰｒｅｇｎａｎｃｙＦａｃｔｏｒ）是存在于早孕血清中的一种免疫抑制因子。胎儿在母体内不被当作异体抗原而受到免疫排斥，这...

犬急性颅脑损伤的CT诊断1例

对1例急性颅脑损伤犬,利用医学CT诊断设备进行体层扫描。结果从CT影像上可见右侧大脑颞叶部有近似圆形的高密度区,其周围有环形低密度区,初步诊断为外伤所致的脑内血肿。表明CT诊断设备在小动物颅脑损伤的诊断方面有一定的应用价值。

红原鸡基因组序列中两段染色体未知序列的连锁定位

利用来杭鸡的蛋壳强系和弱系的F2 代进行蛋壳强度相关QTL分析时 ,绘制了相应的连锁图谱。经过连锁分析 ,发现微卫星标记ABR36 2和ABR4 2 4分别与染色体已知的标记相连锁 ,分别位于 1号和 9号染色体。而在已经公布的红原鸡基因组序列中 ,这 2个标记的PCR产物序列染色体尚未定位。通过连锁关系分析 ,这 2段序列也分别定位于红原鸡 1号和 9号染色体上。

犬的人工肠套叠初期钡灌肠影像观察

犬的人工肠套叠初期钡灌肠影像观察杨德吉范涤尚学东（南京农业大学动物医学院２１００９５）犬的肠套叠是由于肠道过于活跃和痉挛性蠕动所引起的。有单纯性肠套叠，也有由于犬瘟热及犬细小病毒病等继发引起的肠套叠。继发性肠套叠往往不易及时诊断，因其症状易被原发性疾...

犬猫的火器创

犬猫的火器创杨德吉（南京农业大学动物医学院）门诊犬猫的火器创病例多半由气枪和猎枪所致。随着宠物的增多，其火器创作为一种特殊的外科创伤也在增多。原因主要是恶作剧的射击取乐以及误伤。前者多见于宠物，后者见于猎犬。ｌ主要特点近三年来，共收治犬猫弹伤８例（犬...

犬腮腺X线造影解剖学研究

犬腮腺Ｘ线造影解剖学研究杨德吉，杨明印，徐在品，侯加法，范涤（南京农业大学动物医学院，２１００９５）腮腺是主要的唾液腺，病理情况下，临床检查主要通过视诊和触诊，故对其疾病的性质、程度及发展难以诊断和鉴别诊断￣［１］。据报道，犬腮腺的疾病有急、慢性炎症...

鸵鸟前胃积砂的手术治疗

鸵鸟前胃积砂的手术治疗杨德吉沈向真邹敦铎李刚范涤（南京农业大学动物医学院，２１００９５）由于饲养管理不当，可能导致鸵鸟尤其是青年鸵鸟大量摄入异物而致前胃嵌塞综合征，其中又以前胃积砂最为常见。如不及时采取措施，可导致患鸟的死亡。本病唯一有效的治疗方法是...

甲状舌管囊肿

甲状舌管囊肿杨德吉邹敦铎（南京农业大学动物医学院，２１００９５）甲状舌管囊肿（Ｔｈｙｒｏｇｌｏｓｓａｌｃｙｓｔ）是由于胚胎时期甲状舌管发育异常所致，它是一种先天性疾病。本病在人、犬、猫、猪、牛等动物均可发生［１］［２］。其主要症状是在颈部环状软骨与下...

PCV2与PPV体外混合感染猪肺泡巨噬细胞对细胞因子的影响

通过PCV2与PPV混合感染猪肺泡巨噬细胞,探讨PCV2与PPV体外混合感染的致病机制。体外分离猪肺泡巨噬细胞(PAMs),分为PCV2、PPV、PCV2/PPV混合感染组和对照组,采用实时荧光定量PCR技术检测PAMs中PCV2与PPV病毒拷贝数及细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-10的mRNA转录水平的变化。结果表明,PPV能在PAMs中增殖,而PCV2在肺泡巨噬细胞中增殖效率较低;PCV2能促进PPV增殖;PPV单独感染PAMs后能促进IFN-γ和TNF-α的表达;PCV2单独感染PAMs后能促进IFN-γ的表达,并在感染早期促进TNF-α的表达;PCV2与PPV混合感染后能显著抑制IFN-γ的表达,在感染早期对TNF-α的促进作用高于PCV2单独感染组,并能短暂的刺激IL-10的过量表达。说明PCV2与PPV混合感染存在协同致病作用,两种病毒共同刺激了TNF-α和IL-10的大量表达,抑制了IFN-γ的表达。

血红蛋白降解菌的分离筛选与鉴定

为了从环境中筛选高效降解血红蛋白的菌株,采用鲜血琼脂平板,以产生溶血圈比值大小为判定标准,从南京某屠宰场下水道中分离到一株具有较强降解血红蛋白能力的菌株NJ M4。经形态学观察、生理生化测定和16S rRNA基因分析(GenBank登陆号为EU234500),初步认为该菌株为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。该菌株在血红蛋白溶液中可将其逐渐降解为小分子的多肽。在血红蛋白发酵培养基中于37℃、120 r/min培养24 h,降解率达53.64%。