脂肪源性干细胞对多发性硬化患者Th17的免疫调控作用

目的:探讨人脂肪源性干细胞(h ASCs)对多发性硬化(MS)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)的免疫调控作用机制。方法:分离、纯化脂肪组织中的h ASCs。采用密度梯度离心法分离MS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选CD4+T细胞,体外刺激细胞向Th17极化,并加入不同比例的h ASCs(h ASCs∶CD4+T为1∶4和1∶10)共培养4 d,设立添加anti-LIF抗体组;流式细胞术检测共培养后Th17细胞占CD4+T细胞的比例,real-time PCR检测白细胞介素6受体(IL-6R)、白细胞介素23受体(IL-23R)、白血病抑制因子受体(LIFR)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)及白血病抑制因子(LIF)的mRNA水平变化;ELISA法检测共培养体系上清液中LIF的水平。结果:分离的h ASCs经流式细胞术鉴定可基本判定为h ASCs;PBMCs经磁珠法分选后获得90%以上纯度的CD4+T细胞。共培养后,1∶4组和1∶10组中Th17细胞所占比例下降,且存在高浓度抑制效应;共培养后RORγt、IL-6R和IL-23R的mRNA表达水平下降,LIFR和LIF的mRNA表达水平均升高;加入anti-LIF抗体后,Th17细胞比例回升至对照组水平;RORγt和IL-6R的mRNA表达水平回升;ELISA检测各组LIF的水平,共培养组LIF分泌均较对照组明显增多,加入anti-LIF抗体后明显减少。结论:h ASCs可抑制MS患者Th17细胞的分化,其作用可能与其分泌LIF、通过IL-6/LIF轴竞争性抑制有关。

骨髓间充质干细胞治疗实验性自身免疫性重症肌无力的作用机制探讨

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用机制。方法将Lewis大鼠随机分为移植组、模型组和正常对照组,每组各10只。移植组、模型组大鼠腹腔注射单克隆抗体35(m Ab35)建立EAMG模型,正常对照组大鼠腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。分离培养BMSCs并作鉴定后,调整密度至1.5x106/600μl PBS,移植组尾静脉注射细胞悬液600μl,模型组和正常对照组均予600μl PBS。采用双盲法、免疫荧光检测、ELISA和real-time RT-PCR分别测定3组大鼠Lennon临床评分、腓肠肌乙酰胆碱受体(AChR)数量变化、血清乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)含量和腓肠肌AChR、基质金属蛋白酶9(MMP-9)m RNA表达。结果移植组Lennon临床评分、血清AChR-Ab含量、腓肠肌AChR m RNA表达均低于模型组(P<0.05)。正常对照组大鼠神经肌肉接头处可见明显红色荧光,移植组可见断断续续、较为微弱的荧光,模型组未见红色荧光。模型组大鼠腓肠肌MMP-9 mRNA表达量明显高于移植组(P<0.05)。结论 BMSCs能缓解EAMG大鼠的临床症状,抑制MMP-9 mRNA表达可能是其作用机制。

血清白球蛋白比值在评估重症肌无力患者病情严重程度及预后中的价值

目的探讨重症肌无力患者血清白球蛋白比值（AGR）水平对其病情严重程度及预后的评估价值。方法选取温州医科大学附属第一医院2009年2月1日至2015年3月31日收治的135例重症肌无力（MG）患者为研究对象，将患者住院第1天检测所得的血清AGR水平从低到高平均分为3个等级，T1（AGR〈1．34）、T2（1．34≤AGR≤1．53）、T3（AGR〉1．53）。将出院定为结局事件，应用Kaplan-Meier曲线分析3组重症肌无力患者出院的累积概率，Log-rank检验评价组间差异。采用单因素及多因素Cox比例风险回归模型分析影响出院有关因素。对住院期间发生肌无力危象的相关因素进行多因素Logistic回归分析。结果3组中位住院天数分别是T1：25（13．0-38．3）d，T2：18（13．0～26．0）d，T3：15（11．0～20．5）d，Log-rank分析3组间差异有统计学意义（P〈0．001）。单因素Cox分析显示：白蛋白水平、血清肌酐、临床MGFA分型和AGR与患者病情严重程度及预后有关；多因素Cox分析显示：AGR、临床MGFA分型为重症肌无力患者的独立病情严重程度及预后的评估因素（P〈0．001），其相应的HR值分别是4．655（95％CI：2．355-9．202），0．596（95％CI：0．492-0．723）。住院期间发生肌无力危象与AGR、临床MGFA分型相关。结论血清白球蛋白比值可能是评估重症肌无力患者病情严重程度及预后的简单有效指标。