产肠毒素大肠杆菌对断奶仔猪肠道形态、紧密连接蛋白及细胞外基质的影响

【目的】探究产肠毒素大肠杆菌(ETEC)对断奶仔猪肠道形态、紧密连接蛋白及细胞外基质(ECM)表达的影响。【方法】选取35日龄杜长大断奶仔猪12头,随机分成2组(每组6个重复,每个重复1头):对照组灌喂20 mL生理盐水;产肠毒素大肠杆菌组(K88组)灌喂20 mL 1×10^(9)CFU/mL ETEC K88悬浮液,连续灌喂3 d。试验期间所有仔猪自由采食和饮水,在试验第1和4天,以重复为单位称量仔猪体重,记录耗料量。计算每组的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G);在试验第4天屠宰并采集肠道组织样品,切片观察空肠和回肠的组织形态以及肠道内胶原纤维的含量;采用实时荧光定量PCR分析肠道紧密连接蛋白基因的表达;采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法测定ECM中胶原蛋白分子以及调控酶系的表达。【结果】与对照组相比,K88组仔猪平均日增重显著降低(P<0.05),平均日采食量极显著降低(P<0.01);空肠绒毛高度及绒毛高度与隐窝深度的比值极显著降低(P<0.01),回肠的绒毛高度也显著降低(P<0.05);空肠闭锁蛋白(Occludin)mRNA表达量显著降低(P<0.05),闭合蛋白-1(Claudin-1)mRNA表达量极显著降低(P<0.01),回肠闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、Occludin mRNA表达量极显著降低(P<0.01),Claudin-1 mRNA表达量也显著降低(P<0.05);空肠、回肠胶原纤维含量显著减少(P<0.05);空肠Ⅳ型胶原蛋白α2链(COL4A2)、COL5A1、COL6A1的mRNA表达量极显著降低(P<0.01),空肠COL4A2以及COL6A1蛋白表达量均显著降低(P<0.05);空肠基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA相对表达量显著增加(P<0.05),纤溶酶原激活物(PAs)的mRNA相对表达量则极显著降低(P<0.01);MMP9蛋白含量极显著提高(P<0.01)。【结论】灌喂ETEC K88降低了断奶仔猪平均日增重以及平均日采食量,损伤肠道形态并降低肠道紧密连接蛋白的表达。并且可通过减少肠道中胶原纤维的含量、降低胶原蛋白分子以及ECM调控酶系的表达进而造成肠道中ECM的变化。

纳米硒对氟化钠诱导小鼠肝组织细胞凋亡的影响

旨在探究纳米硒对氟化钠诱导肝细胞凋亡的影响,40只28日龄昆明小鼠(25 g±2 g)适应性饲养7 d后,随机分为对照组(Control,生理盐水)、氟化钠组(NaF,24 mg·kg^(-1))、纳米硒组(Nano-Se,1 mg·kg^(-1))、纳米硒治疗组(NaF+Nano-Se,24 mg·kg^(-1) NaF+1 mg·kg^(-1) Nano-Se),每组10只,灌胃给药,试验周期为28 d。通过HE染色评价小鼠肝细胞的病理损伤,Tunel染色评估肝细胞凋亡水平,免疫荧光,Western blot,RT-qPCR检测凋亡相关基因蛋白的表达水平。结果表明:1)纳米硒有效缓解了氟化钠处理引起的肝细胞肿胀、空泡变性以及核碎裂等现象,下调Bax、Caspase3/9及蛋白P53、Caspase3等凋亡发生相关基因的表达,提高了Bcl-2/Bax的表达水平(P<0.05);2)Tunel染色结果显示,氟化钠处理显著提高了细胞的凋亡率(P<0.01),纳米硒可有效减少细胞凋亡的发生(P<0.05);3)Cyt-C在氟化钠组表达水平较对照组显著升高(P<0.05),而在纳米硒治疗组的表达呈下降趋势。综上所述,纳米硒通过调控凋亡相关因子的表达能有效缓解氟化钠诱导的小鼠肝细胞凋亡。

靶向代谢物组学检测不同日龄断奶仔猪血清中B族维生素含量

B族维生素(VB)是维持机体健康的重要营养素,在生命体的重要代谢等方面有重要作用,被作为饲料添加剂广泛应用于畜禽养殖。由于血清成分复杂且部分VB含量极低,现有方法较难准确监测血清中VB的动态变化。本研究利用超高效液相色谱⁃串联质谱⁃多反应监测(UPLC⁃MS/MS⁃MRM)的靶向代谢组学技术成功检测了不同日龄仔猪血清中VB_(1)、VB_(2)、VB_(3)(Nicotinamide,烟酰胺)、VB_(6)(Pyridoxal,吡哆醛)、VB_(9)共5种VB含量。结果显示,随着日龄的增加,断奶仔猪血清中的VB含量均有不同程度的升高,在35日龄时断奶仔猪血清中的VB含量较28日龄升高,在63日龄时较35日龄降低并高于28日龄断奶仔猪,呈现出先升高后降低的趋势。断奶仔猪血清中烟酰胺的的含量最高,检出范围为422.95~1805.58 ng/mL;VB_(2)的含量水平次之,检出范围为182.33~561.33 ng/mL;断奶仔猪血清中VB_(1)的检出范围为23.36~72.95 ng/mL;吡哆醛的检出范围为3.48~27.90 ng/mL;断奶仔猪血清中VB_(9)的的含量最低,检出范围为5.22~22.72 ng/mL。综上,本研究利用ULPC⁃MS/MS⁃MRM技术开展靶向代谢组学分析,高效、定量地检测了猪血清样品中5种VB的含量,以期为后续畜禽的VB研究提供参考。

玉米赤霉烯酮诱导睾丸细胞线粒体路径的凋亡损伤小鼠生殖能力

玉米赤霉烯酮(ZEA)污染谷物饲料危害动物健康,研究表明,ZEA能诱导小鼠睾丸细胞的凋亡,并对生殖能力造成影响,但相关分子机制尚未完全探明。本试验将20只雄性小鼠随机分为对照组(CON组)和玉米赤霉烯酮处理组(ZEA组)(20 mg/kg,每天1次,灌服)处理28 d后,观察睾丸病理变化,检测精子活力,评估精子染色质状态和线粒体功能,检测Bax、Bcl-2、Cytc、P53、Caspase-3、ATG5、LC3-Ⅱ、P62、Beclin1的蛋白和mRNA表达。结果显示,与CON组相比,ZEA组中能动精子百分比下降(P<0.01),未成熟精子比例增高、活跃线粒体的活精子比例和精子浓度呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05);睾丸生精管畸形、管内生精细胞排列紊乱;Bax、Cytc、P53的mRNA表达上升,其中Bax的mRNA的表达上升差异极显著(P<0.01);Bax、Bcl-2、P53的蛋白表达呈下降趋势,而Caspase-3、Cytc的蛋白表达上升,其中Cytc表达差异极显著(P<0.01);ATG5,LC3-Ⅱ、P62、Beclin1等自噬相关蛋白及mRNA表达上升,但差异均不显著(P>0.05)。结果表明,ZEA通过诱导睾丸组织细胞线粒体路径的凋亡,损伤小鼠生殖能力。