仿生双模态肿瘤靶向纳米气泡超声造影剂的制备及其功能

目的制备仿生靶向纳米气泡IR780-红细胞膜@纳米气泡(IR780-RBCM@NBs),探讨其超声增强显影、逃避免疫监视和靶向肿瘤细胞的能力。材料与方法从小鼠血液中提取RBCM,通过改良薄膜水化法制备IR780-RBCM@NBs,检测纳米气泡理化特性。使用体外自制装备检测纳米气泡超声增强显影能力,激光共聚焦荧光显微镜观察纳米气泡保留RBCM表面CD47的特性,观察巨噬细胞吞噬纳米气泡情况及后者对不同肿瘤细胞的靶向探查能力。结果新制备的IR780-RBCM@NBs混悬液外观为乳液状,粒径约为(522.4±58.6)nm,分散性良好,显微镜下呈大小均一的球形,在纳米气泡上可以探测到IR-780,纳米气泡具有近红外荧光成像和超声增强显影的能力。在纳米气泡表面可探测到RBCM特异蛋白CD47,该纳米气泡具有优异的逃避免疫吞噬功能和高效靶向不同肿瘤细胞的能力。结论新制备的仿生靶向纳米气泡IR780-RBCM@NBs性能良好,能逃避免疫吞噬并高效靶向探查肿瘤,为肿瘤的分子靶向精准诊疗提供了新的思路。

细菌脂多糖诱导小鼠DC2.4细胞TLR7蛋白的表达

目的:探讨细菌脂多糖(LPS)对小鼠树突状细胞(DC)系DC2.4TLR7蛋白表达的诱导作用。方法:用RPMI1640完全培养液培养DC2.4细胞,光学显微镜观察LPS刺激前后的细胞形态特征,RT-PCR和Western blot分别测定TLR7 mRNA和蛋白表达。结果:LPS刺激前后,细胞中均有TLR7 mRNA转录。LPS刺激前,细胞较小而透亮,树突较少,无TLR7蛋白表达;LPS刺激后,细胞体积增大,树突增粗增多,刺激后12h、24h、48h,TLR7蛋白均有表达,且在3个时间点的表达量基本一致。结论:LPS可诱导DC2.4中TLR7蛋白的表达。

超声术前评估及精准定位在真空辅助微创旋切系统治疗乳腺多发良性包块中的应用

目的探讨超声术前评估及精准定位在真空辅助微创旋切系统治疗乳腺多发良性包块中的价值。方法选取我院经病理确诊的52例乳腺多发良性包块患者(共156个病灶),其中经超声术前评估及精准定位后行超声引导下乳腺包块旋切手术的患者26例(78个病灶,研究组),仅经常规超声检查后行超声引导下乳腺包块旋切手术的患者26例(78个病灶,对照组);比较两组患者的手术旋切时间、旋切刀数及术中出血率。结果两组患者所有包块均被完整切除。研究组手术时间显著短于对照组[(19.88±5.73)min vs.(30.38±9.27)min],旋切刀数显著少于对照组(14.54±6.35 vs. 21.81±9.46),差异均有统计学意义(t=-4.915、-3.254,均P<0.05)。研究组术中出血率[7.7%(2/26)]明显低于对照组[38.5%(10/26)],差异有统计学意义(χ2=6.933,P<0.05)。结论超声术前评估及乳腺包块精准定位联合术中超声引导下真空辅助微创旋切系统治疗乳腺多发包块,可缩短手术时间,减少手术刀数,降低术中出血率,可作为乳腺良性多发包块快速、微创治疗的重要手段。

实时三维超声对中孕期大鼠子代生长发育及神经行为发育的影响

目的研究对中孕期大鼠给予不同时间的实时三维超声辐照,观察其对子代神经发育的影响,为实时三维超声的安全应用提供依据。方法妊娠SD雌性大鼠20只,孕14 d,体质量350-380 g。随机分为辐照0 min组（对照组）、辐照10 min组、辐照20 min组、辐照30 min组4组,每组各5只。分别给予0、10、20、30 min超声辐照[探头频率1.5-5.5 MHz,机械指数（MI）=0.8,骨热指数（TIB）=0.8]。观察大鼠子代生长发育及神经行为发育情况。结果辐照30 min组张耳、开眼、门齿萌出时间较对照组延迟（P〈0.05）,而辐照10 min组及辐照20 min组与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。辐照20 min组及辐照30 min组平面翻正、听觉惊愕、空中翻正、断崖回避的达标时间均较对照组延迟（P〈0.05）。开场实验中,辐照30 min组中央区域驻留时间较对照组显著减少（P〈0.05）。结论中孕期实时三维超声辐照20 min以上会导致大鼠子代生长发育及神经行为发育的迟缓。

携ApoPep-1纳米微泡靶向成像评价活体内肿瘤凋亡的实验研究

目的以ApoPep-1为分子探针设计一种新的靶向纳米微泡,研究其在活体肿瘤组织内靶向凋亡细胞的成像能力,探讨其用于早期抗肿瘤疗效评价的意义。材料与方法多肽固相合成法合成生物素化ApoPep-1,并分析其分子量和纯度;将生物素化ApoPep-1以“生物素-亲和素-生物素”系统与生物素化纳泡连接得到靶向纳米微泡(ApoPep-1-NB),并分析其粒径大小和稳定性;采用超声仪检测其体外显影效果;顺铂治疗裸鼠建立肿瘤凋亡模型,超声造影观察其靶向成像能力;体外免疫荧光验证分析。结果ApoPep-1-NB粒径为(588.61±19.89)nm,且具有较好的稳定性和体外显影效果。ApoPep-1-NB在肿瘤组织中(60 s:107.56±3.96;120 s:116.06±2.88;180 s:118.68±2.08)较AV-NB(60 s:73.39±0.60;120 s:76.20±0.86;180 s:63.14±1.09)表现出更好的造影增强效果(P<0.01),且造影增强时间更长,尤其能清楚地显示内部高增强的凋亡区。免疫荧光实验与超声造影结果一致。结论本研究设计的ApoPep-1-NB稳定性更好,在肿瘤组织凋亡区的靶向成像能力更强,为早期肿瘤疗效评价提供了更有力的实验证据。

部队常见皮肤病健康教育效果调查分析

目的:了解基层医务人员皮肤病诊治水平、部队官兵皮肤病预防常识及健康教育效果。方法:对基层医务人员进行皮肤病诊治知识教育,对官兵进行皮肤病预防常识宣教。授课前后分别对常见皮肤病诊治原则和防治常识填写调查问卷。结果:基层医务人员听课前得分(68.89±17.80)分,听课后(87.42±11.27)分,两者比较,差异非常显著(P<0.01);官兵听课前得分(67.49±12.52)分,听课后(80.80±11.99)分,两者比较,差异非常显著(P<0.01)。结论:对基层医务人员进行常见皮肤病诊治讲座及对官兵进行皮肤病防治科普教育,可显著提高医务人员的诊治水平,有利于降低官兵皮肤病发生率。

超声S-Detect分类技术在乳腺包块良恶性诊断中的应用价值

目的探讨超声S-Detect分类技术在乳腺包块良恶性鉴别诊断中的应用价值。 方法选取我院2016年1－12月间经手术或病理穿刺活检证实的47例乳腺包块患者（共61个病灶）。所有病灶分别进行二维超声成像BI-RADS分类（由3类不同年资乳腺专科超声医师进行判别）以及计算机S-Detect分类，分别计算人为BI-RADS分类及S-Detect分类对乳腺包块良恶性诊断的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值及阴性预测值。绘制各组的ROC曲线，比较ROC曲线下面积。 结果61个乳腺病灶中，病理证实良性病灶36个，恶性病灶25个。BI-RADS分类诊断的敏感性、特异性及准确性分别为：工作2年医师，69.4%、72.0%、70.5%；工作5年医师，64.0%、92.0%、75.4%；工作7年医师，69.4%、92.0%、78.7%。计算机S-Detect分类诊断敏感性、特异性及准确性分别为80.6%、96.0%、86.9%。S-Detect分类诊断特异性、准确性及阳性预测值均高于工作2年医师BI-RADS分类，差异均具有统计学意义（P〈0.05）。各组ROC曲线下面积分别为：工作2年医师，0.729 ；工作5年医师，0.786；工作7年医师，0.801；S-Detect分类，0.917。 结论与人工BI-RADS分类诊断相比，S-Detect分类在乳腺包块良恶性诊断中具有优势，尤其对于低年资医师，S-Detect分类有助于提高其诊断准确率。

AnnexinV纳米级超声造影剂的制备及体外靶向显像的实验研究

目的探讨连接AnnexinV纳米级超声造影剂的制备、超声显影及体外与肿瘤凋亡细胞的结合能力。方法采用薄膜水化法制备包裹医用全氟丙烷气体的纳米级脂质微泡，通过生物素一亲和素系统连接AnnexinV分子，制成AnnexinV纳米超声造影剂（AnnexinV—Nanobubbles，AVNBs）；纳米粒径／电位分析仪检测AVNBs的粒径和Zeta电位；将AVNBs分别于4℃存放0h、12h、24h、72h后测粒径，并分析其稳定性；扫描电子显微镜观察其形态及均一度；超声成像系统检测其体外显影效果，并与声诺维进行对比；荧光显微镜观察AVNBs与体外肿瘤凋亡细胞的结合情况。结果测得AVNBs粒径大小为（640．2±32．1）nm，Zeta电位为（-23．30±5．71）mV，且24h内粒径基本稳定在纳米级；肉眼观察制备好的AVNBs为乳白色混悬液。扫描电镜视野下呈空心球形、大小均一、分散良好。体外超声成像显示，AVNBs与对照组声诺维有相同的显影效果。体外实验证实AVNBs与凋亡细胞结合良好，结合率为（97．55±1．30）％。结论本法制备的AVNBs粒径小，稳定性和均一性好，体外超声显影效果明显，可与体外凋亡细胞靶向性结合。

多功能纳米液滴超声造影剂对胰腺癌分子靶向诊疗的实验研究

目的探讨自制的诊疗一体化相变纳米液滴"IR780/叶酸-纳米液滴-多西紫杉醇(IR780/FA-Nds-DTX)"作为分子靶向超声造影剂,对胰腺癌荷瘤裸鼠的精准诊断和联合靶向治疗效果。方法体外培养胰腺癌细胞系,建立异位皮下移植胰腺癌荷瘤裸鼠模型50只,双模态靶向成像分实验组(IR780/FA-Nds-DTX)和4个对照组[生理盐水、Nds(FITC)、FA-Nds(FITC)、IR-780]。小动物活体成像验证IR780/FA-Nds-DTX对肿瘤的体内高效靶向探测能力及近红外荧光成像,低强度聚焦超声诱导相变及进一步超声造影成像验证IR780/FA-Nds-DTX在肿瘤局部的高效聚集及对肿瘤轮廓的精准评估。治疗效果观察分实验组(IR780/FA-Nds-DTX)和4个对照组(FA-Nds-IR780、FA-Nds-DTX、FA-Nds和生理盐水)。低强度聚焦超声辐照30 s诱导各组相变后的微泡爆破后,808 nm光热治疗仪分组辐照肿瘤局部,治疗前及治疗后3 d、9 d、15 d分别用二维超声监测各组荷瘤裸鼠肿瘤体积变化并记录,对比各组肿瘤体积变化率及抑制率。结果IR780/FA-Nds-DTX在肿瘤局部靶向聚集的量最多,实验组肿瘤平均荧光强度明显高于对照组:IR780/FA-Nds-DTX组比Nds(FITC)组[(5.12±0.69)×10^(7)比(1.06±0.23)×10^(7),P<0.05],IR780/FA-Nds-DTX组比FA-Nds(FITC)组[(5.12±0.69)×10^(7)比(2.98±0.34)×10^(7),P<0.05],IR780/FA-Nds-DTX组比IR-780组[(5.12±0.69)×10^(7)比(1.54±0.42)×10^(7),P<0.05],生理盐水组肿瘤局部无荧光显示。进一步液滴相变后形成的超声增强显影能更精准定位肿瘤边界。光热消融联合化疗后第15 d,IR780/FA-Nds-DTX治疗组肿瘤体积增长率较各对照组明显减低:IR780/FA-Nds-DTX组比FA-Nds-IR780组[(0.105±0.075)比(0.405±0.175),P<0.05],IR780/FA-Nds-DTX组比FA-Nds-DTX组[(0.105±0.075)比(1.385±0.035),P<0.05],IR780/FA-Nds-DTX组比FA-Nds组[(0.105±0.075)比(2.255±0.105),P<0.05],IR780/FA-Nds-DTX组比生理盐水组[(0.105±0.075)比(2.185±0.155),P<0.05]。而肿瘤体积抑制率明显增高:IR780/FA-Nds-DTX组比FA-Nds-IR780组[(0.93±0.06)比(0.48±0.17),P<0.05],IR780/FA-Nds-DTX组比FA-Nds-DTX组[(0.93±0.06)比(-0.51±0.105),P<0.05],IR780/FA-Nds-DTX组比FA-Nds组[(0.93±0.06)比(-1.63±0.115),P<0.05],IR780/FA-Nds-DTX组比生理盐水组[(0.93±0.06)比(-1.35±0.245),P<0.05]。结论自制的诊疗一体化双模态相变纳米液滴超声造影剂IR780/FA-Nds-DTX在胰腺癌微小病灶甚至转移灶的精准靶向探测与联合靶向治疗中具有较好的潜在临床应用价值。

双靶向纳米超声造影剂在人类表皮生长因子受体2阳性乳腺癌成像中的应用研究

目的:制备肿瘤识别与人类表皮生长因子受体2(HER2)识别的双靶向纳米级超声造影剂,体外实验比较单靶性(肿瘤靶向/HER2靶向)与双靶向(肿瘤+HER2)纳米微泡(nanobubbles,NBs)对HER2阳性乳腺癌细胞的靶向结合能力。方法:改良型薄膜水化法制备纳米级超声造影剂NBs,直接吸附法或"亲和素-生物素法"将近红外荧光染料(IR783)和生物素化的抗HER2分子(Affibody)与NBs结合,制备单靶向纳米超声造影剂(NBs-Affibody,NBs-IR783)和双靶向纳米超声造影剂(IR783-NBs-Affibody),测量其粒径分布、稳定性和生物安全性等理化性质,通过流式细胞技术与免疫荧光成像技术比较以上造影剂对HER2阳性乳腺癌细胞的体外靶向识别能力。结果:NBs-Affibody、NBs-IR783、IR783-NBs-Affibody粒径分别为(538.4±95.8)nm、(551.8±114.8)nm、(482.7±54.3)nm。体外靶向结合实验显示NBs-Affibody、NBs-IR783、IR783-NBs-Affibody对HER2阳性乳腺癌细胞的靶向结合率分别为26.6%、97.6%、84.5%;HER2阴性乳腺癌细胞的靶向结合率分别为5.4%、99.9%、99.3%。双标流式细胞检测显示IR783-NBs-Affibody对HER2阳性乳腺癌细胞的IR783介导的肿瘤靶向结合率为79.5%,Affibody介导的HER2靶向结合率为19.4%;而NBs-IR783对HER2阳性乳腺癌细胞仅表现出IR783介导的肿瘤靶向结合,HER2靶向结合率仅为2.3%。结论:所制备的IR783-NBs-Affibody兼具肿瘤细胞及HER2分子的双靶向识别能力,可以更好地实现肿瘤异质性的靶向结合要求,优于单一靶向造影剂NBs-Affibody与NBs-IR783。

超声检查发现胃纤维血管脂肪瘤脱出致球阀综合征1例

患者女,19岁,因“间断性上腹部腹胀不适半年余,黑便1周”来我院门诊就诊,就诊前半年余饭后出现上腹部疼痛,呈隐痛不适伴腹胀,无反酸、嗳气,无恶心、呕吐,无呕血、黑便等伴随症状;1周前患者腹痛频率增加、疼痛加重,伴腹胀、黑便。