烟草花叶病毒(普通株中国分离物)及其弱毒疫苗-N14(番茄株)基因组侵染性cDNA核苷酸全序列测定与分析

用双脱氧末端终止法对侵染性烟草花叶病毒普通株中国分离物 (TMV vulgar,ChineseIsolate,TMV Cv)和番茄株弱毒疫苗TMV N14(AttenuatedTMVvaccinestrain)基因组cDNAs的核苷酸全序列进行了测定 ,并分析和比较了其基因组的结构和特征。结果表明 :普通株基因组 (Genbank接收号 :AF16 5 190 )为 6 395个核苷酸 ;4个功能性开放阅读框架 (ORF) ,分别编码 12 6kD/ 183kD的复制酶、30kD运动蛋白和 17 6kD外壳蛋白。弱毒疫苗TMV N14基因组 (Genbank接收号 :AF15 5 5 0 7)为 6 384个核苷酸 ;5个功能性ORF分别编码 98 5kD/ 12 6kD/ 183kD的复制酶、2 7kD运动蛋白和 17 6kD外壳蛋白。与参比序列核苷酸和氨基酸序列比较 :普通株核苷酸序列同源率为99 4% ;推断的复制酶与运动蛋白分别有 5个和 2个氨基酸残基不同。TMV N14核苷酸序列同源率为 99 7% ;核苷酸位置 2 6 70～ 2 6 72和 5 6 32～ 5 6 34分别发生乳石 (Opal)突变 (UGA)和赭石 (Ochre)突变 (UAA) ;推断复制酶有13个氨基酸残基发生了变异。

烟草花叶病毒及其弱毒疫苗-N14基因组cDNA克隆的构建与侵染性分析

植物病毒弱毒疫苗在防治植物病毒病害中发挥着重要的作用,但对于其致弱的根本原因和机理仍不十分清楚。弱病毒能够在植物体内生存和繁殖,却不严重危害植物的生长、开花和种子生产,而对外来病毒具有杀灭和防治作用,这种共生和保护宿主的现象是大多数植物弱病毒所具有的共同...

IL-6通过活化STAT3/Notch信号促进癌相关成纤维细胞衰老及宫颈癌上皮细胞侵袭与放疗抵抗的机理研究

背景与目的:肿瘤微环境中衰老的癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)介导上皮肿瘤的转移和放化疗抵抗,而CAFs分泌的炎性细胞因子IL-6可能促进宫颈癌的侵袭和放疗抵抗,但其作用机制并不清楚。该研究旨在探讨IL-6对CAFs衰老及宫颈癌上皮细胞侵袭与放疗抵抗的作用。方法:以宫颈癌CAFs、宫颈组织正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、宫颈癌细胞系He La、Siha和ME180为材料,采用IL-6、STAT3和Notch抑制剂处理不同细胞,用细胞染色、免疫荧光、蛋白[质]印迹法(Western blot)和流式细胞术等方法测定细胞衰老、STAT3、Notch信号、细胞侵袭能力和对放射线诱导的细胞凋亡变化。结果:CAFs条件培养基(conditioned medium,CM)或IL-6可以激活STAT3和Notch信号诱导细胞衰老或促进宫颈癌细胞的侵袭能力;CAFs与宫颈癌细胞混合培养能促进宫颈癌细胞的侵袭,但IL-6抗体、STAT3抑制剂S31-201或Notch抑制剂DAPT处理细胞则会抑制宫颈癌细胞的侵袭。IL-6/STAT3作为Notch信号的上游分子,可能主要通过自分泌或旁分泌的方式上调成纤维细胞或癌细胞中Notch信号关键配体Jagged-1而活化Notch信号,最后赋予宫颈癌细胞对放射线的抵抗作用。结论:CAFs在肿瘤微环境中可能通过IL-6/STAT3活化Notch信号诱导宫颈癌上皮细胞的侵袭和放疗抵抗,靶向STAT3/Notch信号相关分子有可能提高宫颈癌的放疗效果。

棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因5′端截短片段的表达及增效活性测定

将带有棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白 (HaGVenhancin)基因的重组表达载体 pET 30a En分别用BalⅠ和DraⅠ酶切后连接 ,构建重组表达载体pET 30a Ben和 pET 30a Den ,其外源基因的开放阅读框分别为HaGV增效蛋白基因 5′端的 1 7kb和 2 2kb。IPTG诱导表达产生 66 7kD和 85 1kD的多肽并命名为Ben和Den。初步纯化的Ben和Den显示了对棉铃虫核多角体病毒 (HaNPV)及Bt的增效活性。Ben可对棉铃虫核多角体病毒增效 1 0 5%～2 6 5% ,LT50 缩短 0 9d ,Den增效 1 0 2 %～ 33 0 % ,LT50 缩短 1 2d～ 1 9d。重组增效蛋白可对Bt(1∶2 50 0稀释 )增效 2 0 7%～ 35 4% ,Den增效 1 6 7%～ 31 5% ,Ben增效 1 1 7%～2 7 4%。

两株大蒜病毒外壳蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

利用建立cDNA库的方法 ,通过RT PCR分别扩增和克隆了感染我国天津地区大蒜的大蒜花叶病毒 (GMVc)和大蒜潜隐病毒 (GLVc)的外壳蛋白 (CP)基因 ,并对其分别在原核细胞中进行了诱导表达和表达产物的分析。克隆基因的序列测定与分析表明 ,GMVc的CP基因全长 867个核苷酸 ,编码 2 89个氨基酸 ,与报道的一株GMV的核苷酸和氨基酸的同源性分别为 88 5%和 97 2 % ,属于马铃薯Y病毒属 (Potyvirus)的成员 ;GLVc的CP基因全长 885个核苷酸 ,编码 2 94个氨基酸 ,与报道的一株GLV的核苷酸和氨基酸同源率分别为 73 6%和 90 9% ,属于香石竹潜隐病毒属 (Carlavirus)的成员 ;克隆基因的表达产物经SDS PAGE分析表明 ,GM Vc和GLVc的外壳蛋白分别约 32kD和 34kD ,与预测的结果一致。本实验结果对感染我国大蒜的病毒进行分子水平的确切诊断、分类和调查奠定了基础 ,将对大蒜病毒病的防治与脱毒大蒜的生产具有重要的意义。

小规模多中心骨质疏松生物样本库的构建及应用探索研究

目的为了满足骨质疏松流行病学调查、公共卫生防治及个性化临床干预研究的需要,建立小规模多中心骨质疏松前瞻性生物样本库。方法以骨质疏松样本库建设项目为依托,利用社区及医院体检数据平台,选择40~70岁愿意配合长期随访且无影响骨代谢特定疾病的人群作为样本库样本入库对象,收集流行病学调查问卷并签署知情同意书,采集空腹尿10 mL,促凝血和抗凝血各5 mL。利用双能X射线骨密度测定仪测定入库人群的腰椎(L_(1~4))、总髋、股骨颈、Ward’s三角区等部位的骨密度。抗凝血中白细胞提取DNA进行骨质疏松易感基因位点基因分型。血尿相关指标每年测定一次,骨密度正常阶段5年测定一次,骨量减少-2.0以上3年测定一次,-2.0以下和骨质疏松人群一年测定一次。首次测定作为基线数据,连续随访10年。结果样本库包括5000人的骨密度数据、流行病学调查资料,血清、血浆白细胞及DNA等生物样本,血钙、尿钙、遗传易感基因位点SNP分型等数据。结论该骨质疏松样本库可以用于骨质疏松病因学调查、干预新靶点探索及个性化临床干预的研究,同时首次将睡眠质量纳入到骨质疏松流行病学调查体系中。

贵州部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增和表达与HPV感染的相关性分析与比较

背景与目的:用FISH检测人端粒酶RNA组分(human telomerase RNA component,hTERC)扩增是筛查宫颈组织早期癌变的有效方法,但是其检测结果的准确率尚不清楚。本研究旨在分析贵州省部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增和表达与HPV感染的相关性。方法:用FISH检测hTERC基因的扩增,结合免疫组化检测端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、HPV16/18 E6抗原和HPV16 E7抗原的表达,分析和比较了贵州省部分地区少数民族(苗族、侗族和土家族)与汉族宫颈癌患者之间的扩增或表达的差异。结果:少数民族与汉族之间在hTERC扩增,hTERT、E6和E7表达上差异无统计学意义(P>0.05);在少数民族和汉族中,hTERC基因的扩增与hTERT表达差异无统计学意义(P>0.05),但HPV16/18感染与hTERC扩增或与hTERT表达之间具有显著相关性(P<0.01)。说明宫颈癌中,HPV感染可能是导致hTERC扩增与hTERT高表达的主要原因之一。结论:检测HPV16/18 E6和hTERT表达,并结合测定hTERC扩增可提高贵州省部分地区少数民族以及汉族妇女宫颈癌筛查的准确率。

乙肝表面抗原a表位粘膜疫苗的构建及免疫原性检测

利用DNA重组技术 ,构建霍乱毒素B亚单位与乙肝病毒表面抗原a表位的融合基因 ,并在大肠杆菌表达体系pET 30a BL2 1 (DE3)中获得以包涵体形式的高效表达。免疫印迹表明表达产物具有免疫学活性 ,包涵体复性后 ,表达产物能够象CTB那样形成五体 ,以腹腔注射、灌胃。

宫颈癌干细胞相关标记物的研究进展

宫颈癌具有很强的侵袭力,其复发与转移严重影响患者的预后与生存。随着肿瘤干细胞学说的兴起和发展,妇科肿瘤专家也开始关注肿瘤干细胞在宫颈癌发生、发展中的作用,试图通过研究其生物学特性为宫颈癌的诊治开辟新的思路。目前,宫颈癌干细胞的研究还处于初级阶段,已有证据支持宫颈癌干细胞的存在,但尚无明确的标记物。本文就肿瘤干细胞理论、宫颈癌干细胞标记物、宫颈癌干细胞的分离和鉴定做一简单综述。

应用PPA－ELISA法检测同一猪群滤纸血样与血清中猪瘟免疫抗体的比较试验

应用ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法检测同一猪群滤纸血样与血清中猪瘟免疫抗体的比较试验杨恭，史永年，高生智，韩庆彦，毛树德（甘肃省兽医技术推广总站兰州７３００４６）近年来，用ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法检测猪瘟免疫抗体水平已成为考核猪瘟防治效果及某些试验研究的重要手段之...

过碘酸盐氧化法制备固相载体除抗非目的蛋白抗体

Sephacryl凝胶经过碘酸盐氧化将产生醛基 ,非目的蛋白通过氨基与醛基反应结合到凝胶上制备固相载体。装柱后 ,抗体经过长时间循环上样 ,抗非目的蛋白的抗体被吸收 ,抗体得到了纯化。用经本法处理过的抗体做免疫印迹 。

血肿病案一则

省供销社奶牛场引进的一头丹麦黑白花奶牛,于1989年8月下旬在左侧腹部(肩关节水平线上)出现一肿块,且逐渐增大。9月3日邀笔者诊治。症见肿块高突,形状似急性瘤胃臌气,触诊敏感,较硬,叩诊呈实音,肿区下部与健区界限明显,上部与健区界限不清。

甘肃省河西地区14县(市区)猪瘟实验考核

为了更好地开展猪瘟预防工作,我们于1990～1992年采用免疫荧光抗体技术检查疑似猪瘟病料中的病原,用PPA-ELISA法检测血清免疫抗体的方法,对甘肃省河西地区14县(市)区猪瘟防治效果进行了实验考核。

戊型肝炎病毒(HEV)开读框架2中1.3kbcDNA的克隆与序列分析

以戊型肝炎 (HepatitisE)病人高热期血清为原材料 ,设计特定引物 ,经RT PCR扩增获得开放阅读框 2 (ORF2 ) 1.3kb基因片段 ,用EcoRI和BamHI插入克隆载体 pUC18,测定了该克隆基因片段的核苷酸序列并进行了比较分析。其片段长度为 130 9bp ,其A =2 4 9(19.2 % ) ,G =318(2 4 .2 9% ) ,T =339(2 5.9% ) ,C =4 0 3(30 .79% ) ;与印度株和缅甸株的同源性在 92 %以上 ,而与乍得和墨西哥株的同源性分别为 90 .7%和 77.4 %。

兔瘟研究的现状

兔瘟(兔病毒性出血症)是家兔的一种烈性传染病。对本病的研究与报道始于1984年,但至今仍有许多问题尚未搞清。本文就笔者工作所见及部分收集的资料对本病研究的现状作一综述。

一个基层教育局长的教育琐思

做一个教育局长不难,但做好一个教育局长绝不是一件容易的事。关键要看自己对教育局长的角色是如何定位的。那么,怎样才能做好一个教育局长呢？教育局长是一方教育的主管,在区域教育的发展上具有一定的话语权和决策权。从某种程度来看,教育局长对教育的认知和思想,往往就成为指导一个地方教育改革和发展的＂指南针＂。

积极拥抱“互联网+”,全面推进教育改革

互联网时代的到来,给教育带来了良好的机遇,数字化学习、翻转课堂、微课程等新型的教育教学形态不断地涌现,特别是以名师、名校和名课为特征的大规模在线网络课程“慕课”的兴起,使优质教育资源更大范围地传播,推动了教育的改革、创新和发展。另外,互联网技术的应用,使教育面临着前所未有的挑战,如何发挥互联网技术对教育的有效支撑和引领作用,如何搭建互联网与教育深度融合的平台,建立二者深度融化的保障机制,

Aurora-A促进胰腺癌细胞放射抵抗的机制研究

背景与目的:Aurora-A属于丝氨酸和苏氨酸蛋白激酶家族,其异常表达可导致肿瘤发生及其对放射线的抵抗,本研究旨在探讨Aurora-A与细胞放射敏感的相关性。方法:用Aurora-A激酶抑制剂处理Capan-1细胞,检测细胞增殖、锚定非依赖性生长和细胞周期及其周期相关蛋白的变化;处理的细胞同时用γ线照射,然后用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:Aurora-A激酶抑制剂处理后,Capan-1细胞生长速度减慢,克隆形成率降低;Aurora-A抑制可引起细胞周期G1/S以及G2/M期转化阻滞,Cyclin D1、CDK2和CDK6表达下降。Aurora-A激酶抑制剂处理后可以提高放射线照射诱导的细胞凋亡率。结论:Aurora-A激酶抑制剂可抑制胰腺癌细胞增殖,阻滞细胞周期,促进细胞对放射线照射的敏感性。因此,Aurora-A可能是胰腺癌放射治疗增敏的靶向分子之一。

渗漏型UGA终止密码在植物病毒相关基因组中的作用

弱毒疫苗ToMV K的复制酶基因在 2 6 70 2 6 72核苷酸处发生UGA突变 ,研究表明该突变是导致病毒弱化的主要原因。通过ToMV K复制酶的突变区与其它具有UGA渗漏终止密码的植物ssRNA病毒基因组通读结构区的分析和比较 ,发现ToMV K和其它植物病毒的UGA渗漏与通读相关基因的共同特征 :CGG基元 ,通读区的α 螺旋结构和一些疏水氨基酸残基使UGA的通读成为可能。这些渗漏与通读的特征可能才是ToMV K致弱的根本原因。可以根据这一模式 ,探讨对其它植物ssRNA的病毒如PVX、PVY。

癌相关成纤维细胞通过IL-6诱导的“上皮-间质”转换促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭

背景与目的：癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）能促进上皮肿瘤的侵袭和转移，细胞因子IL-6在肿瘤间质微环境中可能介导间质和上皮的相互作用，促进肿瘤的侵袭和转移，但其具体机制尚不十分清楚。方法：以宫颈癌细胞HeLa为研究模型，用ELISA测定宫颈癌CAFs和正常宫颈组织成纤维细胞（normal fibroblasts，NFs）条件培养基中IL-6的表达；用条件培养基或IL-6分别处理宫颈癌细胞系HeLa；用Western blot测定样品处理前后上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）标志物（如N-Cadherin和Vimentin等）的变化，同时用划痕和transwell小室测定细胞迁移和侵袭能力的变化。结果：CAF中IL-6表达比NF高4～5倍；与对照组相比，用CAF条件培养基或IL-6处理的HeLa细胞间充质细胞标志物Vimentin和N-Cadherin升高，而上皮细胞标志物E-Cadherin和Cytokeratin下降，表明IL-6可以促进细胞的EMT发生；进一步研究发现过量IL-6处理的HeLa细胞中干细胞转录因子Snail 1随STAT3的激活而上升；同时发现过量IL-6处理的HeLa细胞的迁移和侵袭能力大幅增加。结论：CAF在肿瘤微环境中可能通过IL-6/STAT3/Snail通路诱导宫颈癌上皮细胞的EMT转化，从而促进宫颈癌的侵袭和转移能力。