常染色体显性遗传多囊肾病合并男性不育患者植入前遗传学检测的临床结局

目的:探讨常染色体显性遗传多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)合并男性不育患者行植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)对临床结局的影响。方法:回顾性分析2020年3月—2021年12月南京医科大学附属苏州医院生殖与遗传中心行PGT治疗的7例ADPKD合并男性不育患者的影像学、精子质量、精子超微结构、遗传病因和胚胎植入前遗传学分析的资料。结果:7例患者均表现为少弱精子症,遗传病因均为多囊肾病基因1(polycystic kidney disease,PKD1)杂合突变。多数患者出现生殖道的扩张或囊性病变,患者精子鞭毛超微结构部分出现紊乱。7例患者行辅助生殖后,5例妊娠并成功生育。结论:对ADPKD合并男性不育者,遗传检测可以指导治疗,采用PGT可以改善妊娠结局。

原位膀胱癌动物模型的建立及应用

背景与目的:表浅性膀胱癌术后膀胱灌注丝裂霉素等药物进行化疗,肿瘤仍有较高的复发率。有研究报道往膀胱内灌注小型干扰RNA(siRNA)可抑制裸鼠膀胱肿瘤生长。本研究目的是建立荷人膀胱癌的原位动物模型,通过磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)监测肿瘤生长过程,并利用此模型评价靶向Survivin的干扰质粒对丝裂霉素的增效作用。方法:直视下经尿道机械损伤BALB/c裸鼠膀胱粘膜,将人膀胱癌细胞T24经尿道种植于25只裸鼠膀胱,建立荷人膀胱癌原位动物模型。以钆-二乙三胺五乙酸作为膀胱造影剂,用MRI监测肿瘤的生长,同时取裸鼠膀胱组织标本行HE染色进行病理学检查。同法建立膀胱癌裸鼠动物模型18只,分为对照组、丝裂霉素组和联合组3组,每周两次膀胱灌注,联合组为靶向Survivin的干扰质粒和丝裂霉素交替用药;膀胱灌注6次后荷瘤膀胱称重。结果:25只裸鼠在种植T24细胞后均形成膀胱肿瘤。种植后7天裸鼠膀胱MRI检查无明显变化,l4、21、28天MRI检查均可发现膀胱不同程度的充盈缺损,MRI图像与肿瘤实际大小吻合。病理检查显示:种植后7天,肿瘤生长于裸鼠膀胱粘膜或浅层肌肉;14～28天局限于肌层;35天时侵及浆膜层。丝裂霉素组和联合组的抑瘤率分别为33.45%、56.34%,联合组优于丝裂霉素组(P<0.05)。结论:成功建立了裸鼠原位膀胱癌动物模型,肿瘤生长基本模拟了人膀胱癌的发生、发展过程;MRI检查可作为对裸鼠膀胱原位肿瘤动态观察的可靠方法。靶向Survivin的干扰质粒增加了丝裂霉素的抗肿瘤作用。

睾丸穿刺取精术睾丸标本病理学检查的价值

目的:探讨睾丸穿刺取精术(TESA)睾丸标本病理学检查的价值。方法:分析96例TESA睾丸组织倒置显微镜下检查和病理学检查结果,比较两种方法对睾丸组织是否存在精子的诊断价值。结果:11例镜检有精子患者中病理检查9例有精子,2例无精子;57例镜检未见精子患者中,病理检查发现11例有精子(19.30%)。镜检未见精子的睾丸病理类型分别为唯支持细胞综合征34例,精子成熟停滞12例,生精功能低下11例。结论:TESA睾丸组织镜下未见精子者,病理学检查可能发现精子,并为再次睾丸取精提供参考。

无精子症患者中无精子因子微缺失分布

目的探讨Y染色体无精子症因子（AZF）微缺失不育男性的临床特点。方法对2009年8月至2012年7月就诊于本院的非梗阻性无精子症及严重少精子症患者共355例进行Y染色体AZF微缺失检测，分析AZF微缺失男性精子浓度、睾丸总体积、生殖激素的特点。结果检测出AZF微缺失34例（9．58％），非梗阻性无精子症中发生率10．61％（14／132），严重少精子症中发生率8．97％（20／223）。未检测到AZFa区缺失；AZFb区微缺失4例，3例为无精子症；AZFc区微缺失25例，6例无精子症，16例精子浓度〈1×10^6／ml；AZFb＋C联合缺失5例均为无精子症。AZF微缺失导致的无精子症与梗阻性无精子症相比，睾丸体积小，血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）升高。AZF微缺失的严重少精子症男性血清FSH、LH、睾酮（T）与非AZF微缺失的严重少精子症无统计学差异，睾丸体积小于后者。3种微缺失类型间FSH、LH、T和睾丸总体积无明显差异。结论AZF微缺失在非梗阻性无精子症或严重少精子症男性中有一定的发生率（9．58％），建议对无精子症和严重少精子症男性参考血清FSH、睾丸体积进行AZF微缺失筛查。

苏州地区不育男性性生活频率调查分析

目的:调查在苏州市立医院本部因不育就诊男性的性生活频率,分析其相关影响因素。方法:对607例因不育就诊的男性问卷调查,包括年龄、结婚年限、每月性生活次数、是否两地分居、是否排卵期同房。分析不育人群中性生活频率与年龄、结婚年限的关系。结果:在调查人群中两地分居24例,占3.95%;排卵期进行性生活20例,占3.29%。性生活≤3次/月的95例,占15.65%。20岁～人群性生活频率明显高于其他年龄组(P<0.05);随年龄增长性生活频率降低。结婚～1年组性生活频率明显高于其他组(P<0.05);结婚1年以后性生活频率趋于稳定。结论:对因不育就诊的患者应常规询问性生活频率及相关影响因素;年龄和结婚年限对性生活频率有一定影响。

靶向生存素基因的shRNA抑制膀胱癌细胞裸鼠移植瘤生长

目的观察稳定转染靶向生存素（survivin）基因短发夹RNA（shRNA）对膀胱癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法将靶向生存素基因的shRNA真核表达载体转染人膀胱癌细胞T24并获得稳定的单克隆细胞,实时定量PCR检测转染后生存素mRNA表达的变化;分别将转染和未转染细胞种植于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;通过免疫组化检测肿瘤组织生存素蛋白表达的差异。结果RNA干扰使T24细胞生存素表达下调92.86%;未转染组在20～29d均形成体积超过2000mm3的肿瘤,转染组在43d时经病理证实3只裸鼠形成肿瘤,最大体积62.5mm3;免疫组化显示转染组形成的肿瘤生存素蛋白表达明显减弱。结论靶向生存素基因的shRNA明显下调了生存素表达,并抑制了膀胱癌细胞T24裸鼠移植瘤的生长。

精子形态与体外受精胚胎移植临床妊娠结局的关系

目的：当前精子形态对体外受精（IVF）的影响尚存争议,本研究旨在评估正常形态精子百分率在体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中的应用价值。方法：选择生殖遗传中心659对IVF-ET治疗夫妇,按正常形态精子百分率分为4组,A组（〈2%）112个周期,B组（≥2%-〈4%）180个周期,C组（≥4%-〈5%）74个周期,D组（≥5%）293个周期。比较各组间的受精率、正常受精率、卵裂率、优胚率以及新鲜移植周期的生化妊娠率、临床妊娠率、流产率及活产率等指标。结果：4组间的受精率、正常受精率和可移植胚胎率有差异。C组（71.90%）和D组（72.89%）的受精率均显著高于A组（57.97%）和B组（63.29%）（P均〈0.05）,C组与D组间、A组和B组间均无显著差异（P均〉0.05）。D组的正常受精率（57.16%）显著高于A组（46.52%）和B组（50.89%）（P均〈0.05）,C组正常受精率（54.67%）显著高于A组（P〈0.05）,其余组间无显著差异（P均〉0.05）。D组的可移植胚胎率（55.62%）显著高于B组（45.75%）（P〈0.05）,其余组间均无显著差异（P均〉0.05）。D组的无可移植胚胎患者比例（8.87%）显著低于A组（20.54%）和B组（18.89%）（P均〈0.05）,C组（12.16%）与其余组间均无显著差异（P均〉0.05）。各组间新鲜移植周期的生化妊娠率、临床妊娠率、种植率、流产率和活产率均无显著差异（P均〉0.05）。结论：正常形态精子百分率对IVF-ET的受精率及胚胎形成有一定影响,用于评估IVF受精结局时,5%临界值略优于4%。

SCSA和SCD检测精子DNA完整性结果比较及与精子质量参数的相关性分析

目的:近年来精子DNA碎片预测男性生育受到广泛关注,其检测方法较多,但方法学的比较研究很少,本文旨在比较精子DNA完整性常用检测方法之间的差异,并分析DNA碎片与精子质量的相关性。方法:选择108例精液样本,采用精子染色质结构分析试验(SCSA)和精子染色体扩散实验(SCD)对样本分别进行精子DNA碎片检测分析,对两种方法的结果进行比较,并与精液常规、精子形态以及患者年龄进行相关性分析。结果:两种方法检测的精子DNA碎片化指数(DFI)存在显著的一致性(P<0.01),DFI与精子活动率、前向运动精子百分率以及正常形态精子百分率呈显著负相关(P<0.01),与畸形精子指数呈显著正相关(P_(SCSA)<0.01,P_(SCD)<0.05),SCSA得出的DFI与年龄呈显著正相关(P<0.01),而SCD法的DFI并未发现类似的现象。结论:两种方法检测的结果对精子质量均有较好的预测价值,精子DFI作为一个检测指标,对男性生育力预测有一定的临床价值。但不同方法之间的检测结果差异较大,检测方法的标准化有待进一步研究。

单纯超重与肥胖不育患者体外受精-胚胎移植助孕临床结局

目的探讨体重指数(BMI)对非多囊卵巢综合征(PCOS)不孕妇女体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期的临床结局影响。方法回顾性分析2011年6月至2015年9月在本中心进行IVF-ET治疗的不孕症患者的临床资料,共1 344个周期,年龄≤38岁,均采用短效长方案。根据BMI分为两组,正常体重组:18kg/m^2<BMI<24kg/m^2,1 021个新鲜周期;超重肥胖组:BMI≥24kg/m^2,323个新鲜周期。比较两组患者的一般临床资料和妊娠结局以评估BMI对IVF-ET治疗结局的影响。结果两组患者的基础内分泌、促性腺激素(Gn)刺激天数、获卵数、正常受精率、优质胚胎率、临床妊娠率及自然流产率均无显著性差异(P>0.05)。超重肥胖组的平均年龄[(30.44±3.70)vs.(29.60±3.56)Y]、不孕年限[(4.26±2.87)vs.(3.82±2.68)Y]及Gn刺激总量[(2 223±882)vs.(1 900±850)U]均高于正常体重组,且差异均有统计学意义(P<0.05);而全胚冷冻率低于正常体重组[49.84%(161/323)vs.58.86%(601/1 021)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论排卵正常的肥胖患者IVF促排卵时Gn用量明显增加,临床妊娠率并不受影响。

20例嵌合型Turner综合征的辅助生殖助孕及相关文献复习

目的探讨嵌合型Turner综合征患者的生育功能及辅助生殖助孕的方式。方法选择2011年4月至2017年10月于苏州市立医院生殖中心收治的20例因不孕症要求行辅助生殖助孕的嵌合型Turner综合征患者,回顾性分析临床资料、辅助生殖助孕治疗过程、妊娠结局及其子代核型。结果 20例患者经过辅助生殖助孕,15例分娩正常核型子代(其中14例行IVF/ICSI,1例行PGS),1例孕早期稽留流产(绒毛染色体核型为47,XY,+13),1例生化妊娠,3例未孕(其中包括1例赠卵IVF)。结论对于卵巢功能尚未衰竭的嵌合型Turner综合征患者,结合临床具体情况,可尊重患者意愿尝试自体卵母细胞的辅助生殖助孕,治疗前需知情同意、充分评估。

畸形精子超微结构观察的研究与应用进展

精子超微结构畸形往往与精子的活力、遗传物质完整性、受精潜能息息相关,而其观察离不开显微技术的不断变革。本文通过介绍精子形态学观察中显微技术的发展,并描述显微技术在精子各部位常见畸形以及凋亡生精细胞超微结构观察方面的应用,来阐述其在如今临床工作中的重要性。对于一些特殊的畸形精子症患者,在分析病因和采取辅助生殖手段之前,对其精子的超微结构进行分析是有必要的。

不同顶体精氨酸酰胺酶活性精子的其他精子参数分析

目的通过研究精子顶体精氨酸酰胺酶活性与精子常规和形态之间的关系,评估其在男性不育诊疗中的价值。方法用化学比色法检测精子顶体精氨酸酰胺酶活性,采用计算机辅助分析检测精液常规参数、精子形态精子。结果顶体酶异常组与顶体酶正常组的精子浓度、活动率、前向运动率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。顶体酶正常组与顶体酶异常组精子头部畸形百分率、颈和中段畸形百分率、主段和尾部畸形百分率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论精子顶体精氨酸酰胺酶对判断精子质量具有非常高的价值,可作为评价精子功能,辅助诊断男性不育的有效指标。

不同亚型抗心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体与体外受精结局的关系

目的探讨不同免疫亚型抗心磷脂抗体(ACA)和抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP-1)对流产以及体外受精结局的影响。方法回顾性分析2016年6月至2017年12月在我院本部生殖与遗传中心就诊、因"不明原因不孕"行体外受精治疗的563对夫妇(共623个周期)的临床资料。按周期类型分为冻融胚胎移植周期组和鲜胚移植周期组;按结局分为妊娠失败组、流产组与活产组,分析组间3种ACA与anti-β2GP-1的差别,以及两种抗体不同免疫亚型与鲜胚移植周期优质胚胎率、临床妊娠率、流产率、活产率等参数的相关性。结果冻融周期流产患者的ACA IgM、IgG及anti-β2GP-1IgG数值均显著高于其余两组患者(P<0.05);鲜胚移植周期流产患者ACA IgG及anti-β2GP-1IgG均显著性升高(P<0.05);ACA IgA与鲜胚移植周期过程中的使用Gn持续天数呈负相关(P<0.05),而ACA IgG与获卵数呈显著负相关(P<0.05);多因素Logistics回归分析发现ACA IgM、IgG及anti-β2GP-1IgG的升高与流产率有统计学关联(P<0.05)。结论两种抗体的IgM与IgG与流产率显著相关,但其阈值与治疗方案的确定仍需要更多的实验论证。

精子质量参数与体外受精结局的相关性

目的观察精子质量参数如精子活动率、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率、前向运动精子总数、正常形态精子总数及正常形态前向运动精子总数与体外受精(IVF)结局的相关性。方法选取2018年1月至2019年12月女方年龄<35岁、因单纯输卵管因素行首次IVF治疗的546对夫妇,严格按照《人类精液检查与处理实验室手册》(第5版)要求对男方精液进行精子浓度、活动率及形态学分析,并采用Pearson分析对精子活动率、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率、前向运动精子总数、正常形态精子总数、正常形态前向运动精子总数与IVF受精率、种植率、优质胚胎率及临床妊娠率进行相关性分析。结果正常形态精子百分率与受精率、种植率、优质胚胎率无相关性(P>0.05),而精子活动率、前向运动精子百分率与受精率呈正相关(r分别为0.092、0.093,P<0.05),正常形态精子总数、前向运动精子总数与受精率呈正相关(r分别为0.159、0.498,P<0.01),与优质胚胎率亦呈正相关(r分别为0.157、0.119,P<0.01),仅正常形态前向运动精子总数与受精率、种植率和优质胚胎率均呈正相关(r分别为0.201、0.196、0.112,P<0.01)。但上述参数与临床妊娠率无相关性。结论正常形态前向运动精子总数相比于正常形态精子百分率、精子活动率、前向运动精子百分率、前向运动精子总数、正常形态精子总数,与IVF结局有更好的相关性,但与临床妊娠结局均无相关性。

基于深度学习的色彩迁移生物医学成像技术

传统病理学检测中,由于复杂的染色流程和单一的观察形式等限制着病情的诊断速度,而染色过程实质上是将颜色信息与形态特征关联,效果等同于现代数字技术的生物医学图像的图义分割,这使得研究者们可以通过计算后处理的方式,大大降低生物医学成像处理样品的步骤,实现与传统医学染色金标准一致的成像效果。近些年人工智能深度学习领域的发展促成了计算机辅助分析领域与临床医疗的有效结合,人工智能色彩迁移技术在生物医学成像分析上也逐渐表现出较高的发展潜力。文中回顾了深度学习色彩迁移的技术原理,列举此类技术在生物医学成像领域中的部分应用,并展望了人工智能色彩迁移在生物医学成像领域的研究现状和可能的发展趋势。

一常染色体显性遗传性耳聋家系基因的突变筛查及分析

目的对一常染色体显性遗传聋大家系的听力学特征及遗传学特征进行分析。方法通过家系调查,对家系成员进行听力学检测及全身体格检查,抽取外周血;绘制系谱图,整理分析家系资料;提取外周血DNA。对2例家系患者进行已知耳聋致病基因的全外显子测序。结果该家系共6代,可追朔的有122人,耳聋患者26例。系谱特征表现为世代连续传递,男女均可发病,且耳聋患者的后代有50%左右的发病率,符合常染色体显性遗传特征。听力学表现为:先天性、双侧对称性、感音神经性全频听力损失。已知的耳聋致病基因全外显子及线粒体DNA测序结果分析均无阳性发现。结论该耳聋家系为一个先天性非综合征型、常染色体显性遗传,双耳对称性感音神经性全频听力损失;初步分子遗传学筛查提示该家系可能为新基因突变所致病。

流式细胞术检测精液细胞异质性与精子质量的相关性研究

目的探索流式细胞仪检测的精液内细胞大小分布异质性与精液质量的关系。方法收集2019年3~4月在本中心行精液检查的男性不育患者的241例精液样本。采用Navios流式细胞仪检测精子DNA碎片的同时,记录前向散射光(FSC)通道反应的精液中细胞大小的整体变异系数(CV)。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),评估整体CV值预测精子质量的可靠性。结果相关性分析发现,精液内所有细胞分布的异质性(总CV值)以及多数精子分布的异质性(C区CV值)与精子浓度、活动精子百分率、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率均呈显著负相关(P<0.01),而与DNA碎片指数(DFI)和高DNA着色性(HDS)数据呈显著正相关(P<0.01)。采用整体CV值判断活动精子百分率、前向运动精子百分率和正常形态精子百分率的ROC曲线,曲线下面积分别为0.723、0.713、0.607,表明整体CV值对这3个参数有一定的预测价值,预测效果适中。结论精液内细胞大小分布的异质性对精子质量有较好的预测作用,采用流式细胞仪检测可以简便、快速、准确的给出结果,但是仍需要特异性抗体来提高检测的准确性。

靶向survivin的siRNA表达载体的构建及生物活性鉴定

目的构建靶向survivin的siRNA表达载体。方法设计合成靶向survivin的siRNA相应DNA模板单链,将其克隆入空质粒pRNAT-U6.1/Neo,模板链两端分别设计两个不同的酶切位点,退火形成siRNA载体插入片段。用限制性酶切将空载体线性化,T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中,对该重组表达载体进行鉴定,获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-sur-vivin。脂质体法将pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入膀胱癌T24细胞株,实时定量PCR法检测对T24细胞survivin基因表达的抑制情况。结果PCR、酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变。重组载体能干扰T24细胞survivin基因的表达,并具有新霉素抗性,能够用G-418筛选稳定转化的细胞株。结论成功构建了靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体pR-NAT-U6.1/Neo-survivin,并转染膀胱癌细胞株,为进一步运用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。

98例生精障碍患者细胞遗传与分子遗传学分析

目的探讨生精障碍患者的细胞遗传和分子遗传病因。方法对7l例少弱精症和27例无精症患者进行外周血染色体G显带分析，同时采用多重PCR分析Y染色体AZ,Fa、b、c区域12个STS位点的微缺失情况。结果98例生精障碍患者中遗传学异常达19．39％，其中染色体异常12例，占12．25％；AZFIX微缺失7例，占7.14％。结论染色体异常和AZF区微缺失是导致男性生精障碍的重要病因。

精子形态学特定缺陷与运动特征的相关性研究

目的探讨精子活力与具体形态学缺陷的相关性,以评估目前精子形态学标准的诊断价值。方法常规采集精液标本,参照世界卫生组织手册的标准进行精液常规分析和精子形态学应用评估,对具体精子形态异常与精子活力数据进行相关性分析。结果活动精子百分率分别与小顶体、头颈弯曲、短尾、卷尾呈显著负相关(P<0.01),前向运动精子百分率与圆头、梨形头、小顶体、头颈弯曲、短尾、卷尾呈显著负相关(P<0.05),精子游动速度与锥形头、梨形头、不规则头、小顶体、头颈弯曲、短尾、卷尾呈显著负相关(P均<0.01),有效精子浓度与圆头(P<0.05)、梨形头、不规则头、小顶体、头颈弯曲、短尾、尾部弯折、卷尾呈显著负相关(P<0.01),而颈部异常粗与以上各个活力参数呈显著正相关(P<0.01)。结论目前对精子形态缺陷的分类具有一定的诊断价值,但仍需进一步改进。