γδT淋巴细胞及其亚型在毒性弥漫性甲状腺肿中的分布研究

目的研究γδT淋巴细胞及其亚型在毒性弥漫性甲状腺肿(GD)中的分布并探讨γδT淋巴细胞在GD免疫学发病机制中的作用。方法选取2022年6-12月上海市嘉定区中心医院内分泌门诊确诊的GD患者59例作为GD组,另选择同期65例健康志愿者作为对照组。检测两组相关甲状腺指标[包括游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)、抗促甲状腺激素受体抗体(TRAb)],采用流式细胞术检测两组外周血中γδT淋巴细胞及其亚型的比例,分析γδT淋巴细胞表面活化分子CD69、HLA-DR及协同刺激分子CD40配体(CD40L)与诱导性共刺激分子(ICOS)的表达水平。结果GD组TSH水平低于对照组,FT3、FT4、TPOAb、TG-Ab、TRAb水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组γδT淋巴细胞比例比较,差异无统计学意义(P>0.05);GD组Vδ1γδT淋巴细胞比例高于对照组,Vδ2γδT淋巴细胞比例低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GD组γδT淋巴细胞表面活化分子CD69、HLA-DR表达水平及协同刺激分子CD40L、ICOS的表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GD患者外周血γδT淋巴细胞亚型改变表现为Vδ1γδT淋巴细胞比例上调与Vδ2γδT淋巴细胞比例下调,γδT淋巴细胞功能活化并表达协同刺激分子CD40L、ICOS可能是促进GD产生自身抗体及自身体液免疫应答的重要病理机制。

弓形虫SAG1、ROP18真核表达载体的构建及在诱导小鼠保护性免疫中的作用研究

目的观察弓形虫速殖子表面抗原1(SAG1)、棒状体蛋白18(ROP18)真核表达载体单独及联合使用诱导BALB/c小鼠的保护性免疫作用。方法制备重组真核表达质粒p3×FLAG-Myc-CMV TM-24-SAG1,p3×FLAG-Myc-CMV TM-24-ROP18及空质粒p3×FLAG-Myc-CMV TM-24(空载体),以磷酸盐缓冲液(PBS)稀释至1μg/μL。将102只BALB/c小鼠随机分成6组,每组17只,前4组分别注射PBS(PBS对照组)、空载体(空载体对照组)、SAG1载体(SAG1组)、ROP18载体(ROP18组)各100μL,其余两组均注射SAG1与ROP18对半混合载体,分别注射量为200μL(全量混合组)、100μL(半量混合组),每组间隔2周免疫1次,共免疫3次。末次免疫4周后,各组随机取7只小鼠,无菌条件下取脾,流式细胞术检测小鼠脾脏CD4^(+)、CD8^(+)T细胞亚群分布,荧光定量PCR分析各组小鼠脾细胞中细胞因子白细胞介素(IL)-4、IL-12、干扰素γ(IFN-γ)的表达;每组其余10只小鼠腹腔接种1×103个弓形虫速殖子,观察各组小鼠的生存时间。结果各组小鼠脾脏CD4^(+)T细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);与PBS对照组比较,SAG1组、ROP18组、全量混合组、半量混合组、空载体对照组CD8^(+)T细胞比例明显升高(P<0.01),半量混合组较其他组更高(P<0.05)。半量混合组、全量混合组CD4^(+)/CD8^(+)较两对照组(PBS对照组和空载体对照组)降低,差异有统计学意义(P<0.05)。全量混合组、半量混合组小鼠脾细胞中IL-12、IFN-γ相对表达水平与两对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且半量混合组IFN-γ相对表达水平与ROP18组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但各组间IL-4相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。弓形虫速殖子攻击感染小鼠试验中两单基因疫苗组(SAG1组和ROP18组)、全量混合组、半量混合组均较两对照组生存时间延长(P<0.05),且半量混合组较全量混合组生存时间也显著延长(P<0.01),但全量混合组与两单基因疫苗组差异无统计学意义(P>0.05)。结论弓形虫DNA重组载体能诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫应答及部分抗虫免疫保护作用,且构建的两种真核载体在合适浓度联合免疫能诱导小鼠产生更强的免疫保护作用。

鲍曼不动杆菌多重耐药性与外排泵机制研究

目的分析江苏大学附属医院鲍曼不动杆菌外排泵对其耐药性形成的作用。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院住院患者44株鲍曼不动杆菌。应用K-B纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌对抗生素的敏感性。经Realtime PCR法检测外排泵基因ade B m RNA水平。扩增外排泵调控基因ade R和ade S全长片段并测序比对。结果在44株鲍曼不动杆菌中,27株为多重耐药株且对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、米诺环素较为敏感。耐药菌株ade B m RNA表达水平明显高于敏感株,且发现ade R的2639位碱基发生A→G突变,其对应的219位氨基酸则呈现AAA(赖氨酸)→GAA(谷氨酸)改变,而ade S无有义突变。结论鲍曼不动杆菌的多重耐药性可能与ade ABC外排泵系统的过表达相关,且其表达可能与调控基因ade R的突变相关。

多重耐药鲍曼不动杆菌膜孔蛋白OprD与标准敏感株同源建模的比较

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌膜孔蛋白OprD的模型,并将其与标准药物敏感株(SDF)相比较。方法选取2017年11月至2018年5月临床标本中分离的多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)菌株29株;应用K-B纸片扩散法检测菌株对抗菌药物的敏感性;应用nested-PCR检测OprD,并用DNAMAN将其连接后进行Blast比对分析。结果 29株MDR-AB的OprD与SDF株比较均发生同一突变,其中第98位的苏氨酸(T)突变为丙氨酸(A),278位的天冬氨酸(D)突变为甘氨酸(G),将其递交给swiss-model建模后可明显发现其β桶状结构的突变。结论多重耐药鲍曼不动杆菌中膜孔蛋白OprD发生了突变,且其突变很可能是引起鲍曼不动杆菌多重耐药性的原因之一。

胃癌患者外周血nuocytes相关因子的检测及其免疫病理意义

目的检测转录因子维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)、细胞表面受体T1/ST2和IL-17RB以及IL-5和IL-13等细胞因子的表达水平;了解胃癌患者外周血中nuocytes细胞的极化状态,探讨其与胃癌发生发展的关系。方法常规Ficoll-泛影葡胺密度梯度离心法分离外周血单个核细胞;实时荧光定量PCR检测30例胃癌患者PBMC中RORα、IL-17RB、T1/ST2、IL-5、IL-13 mRNA表达水平。结果胃癌患者外周血PBMC中RORα、IL-17RB、T1/ST2、IL-5 mRNA表达水平明显高于健康对照组,而IL-13的表达水平则明显低于健康对照组。相关性分析结果表明,胃癌患者RORαmRNA水平与IL-17RB、T1/ST2、IL-5、IL-13 mRNA水平呈正相关。结论胃癌患者机体存在着nuocytes极化状态,可能是构成胃癌患者Th1/Th2细胞平衡失调的基础,也与MDSC、M2巨噬细胞参与的免疫抑制微环境有着密切的关系。

哮喘小鼠模型肺组织nuocytes和Th9相关分子受体表达水平的变化及意义

目的分析nuocytes转录因子RORα及其分泌的细胞因子受体特异性结合链和Th9特征性细胞因子在哮喘小鼠肺组织表达的变化,探讨nuocytes对Th9细胞极化的影响,了解哮喘时肺组织对nuocytes和Th9细胞的应答状态。方法采用qRTPCR法检测RORα、IL-4Rα、IL-5Rα、IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-9和IL-9R等m RNA表达水平;对2类细胞特征性细胞因子受体表达水平的相关性及其与Ig E的表达水平的关系进行统计学分析。结果在哮喘小鼠模型中,RORα、IL-5Rα、IL-13Rα2和IL-9、IL-9R的m RNA表达水平均明显升高;相关性分析发现,IL-9及其受体的m RNA水平与RORα、IL-5Rα和IL-13Rα2 m RNA水平呈明显正相关,肺组织总Ig E的水平也随之增加。结论在哮喘小鼠肺组织中nuocytes和Th9相关分子及其受体优势表达,反映肺组织对2类细胞的积极应答状态,其在哮喘炎症中的作用由此可见一斑。

儿童耐氨苄西林流感嗜血杆菌耐药机制及同源性研究

目的探讨儿童耐氨苄西林流感嗜血杆菌(Hi)的耐药机制及同源性。方法收集Hi临床分离株117株。采用微量肉汤稀释法测定菌株耐药情况;采用硝酸噻吩试纸法测定氨苄西林耐药菌株β-内酰胺酶;采用聚合酶链反应(PCR)扩增产β-内酰胺酶氨苄西林耐药(BLPAR)菌TEM-1和ROB-1基因;采用PCR扩增耐药菌株ftsI基因,并对ftsI基因进行测序,通过与Hi RdKW20标准菌株的ftsI基因进行Blast比对确定其氨基酸置换形式,明确ftsI基因突变介导的不产β-内酰胺酶氨苄西林耐药(BLNAR)菌耐药机制;采用多重PCR测定Hi同源性,明确其分子流行病特点。结果117株Hi中氨苄西林耐药率为56.4%(66/117),β-内酰胺酶检出率为46.2%(54/117),产酶基因均为TEM-1基因。BLNAR菌检出率为10.3%(12/117),ftsI基因一代测序BLPAR菌、BLNAR菌突变率分别为68.5%(37/54)、75.0%(9/12),ftsI基因型Ⅲ型分别为73.0%(27/37)、77.8%(7/9),BLPAR菌与BLNAR菌发生Asn526Lys置换合并Ser385Thr置换分别占51.4%(19/37)、77.8%(7/9);BLPAR菌多重PCR分型分为a、b、c、d和e型,BLNAR菌多重PCR分型分为a、e型,2种菌均具有克隆传播趋势,a型分别占63.0%(34/54)、75%(9/12)。结论耐氨苄西林Hi的耐药机制以产TEM-1型β-内酰胺酶为主,不产酶菌株的耐药机制主要是由KTG基序附近发生Asn526Lys置换合并SSN基序附近发生Ser385Thr置换介导ftsI基因突变所致。BLPAR菌与BLNAR菌ftsI基因型均以Ⅲ型为主,且均具有克隆传播趋势。

血清胃蛋白酶原在胃癌复发预测中的临床价值

目的研究胃癌患者治疗中血清胃蛋白酶原(pepsinogen, PG)含量的变化,探讨血清PG检测对胃癌治疗和预后的临床价值。方法选择117例经胃镜和病理组织学确诊为胃癌的患者纳入胃癌组,应用雅培Abbott全自动化学发光仪检测其外周血血清PG含量。对胃癌组中59例术后7~16个月的患者依据CT扫描、胃镜复查及肿瘤标志物等检查结果综合判断有无复发,分为术后稳定组32例、术后复发组27例,检测其血清PG含量。探讨血清PG含量与预后的关系,评估PG在胃癌预后方面的临床价值。结果胃癌组PGⅠ含量为(47.74±20.18)ng/ml, PGⅡ含量为(14.87±10.99)ng/ml, PGR为3.85±1.70;胃癌术后稳定组PGⅠ含量为(36.82±13.97)ng/ml, PGⅡ含量为(11.42±4.39)ng/ml, PGR为3.56±1.40;胃癌术后复发组PGⅠ含量为(119.08±36.81)ng/ml, PGⅡ含量为(30.56±14.27)ng/ml, PGR为4.47±1.31。胃癌术后复发组与术后稳定组相比,血清PGⅠ、PGⅡ含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),PGR差异无统计学意义(P>0.05)。PGⅠ鉴别胃癌复发的ROC曲线下面积为0.916,cut-off值为73.35 ng/ml,灵敏性为81.5%,特异性为69.0%;PGⅡ的ROC曲线下面积为0.894,cut-off值为13.90 ng/ml,灵敏性为85.2%,特异性为87.5%;PGR的ROC曲线下面积为0.657,cut-off值为3.76,灵敏性为63.0%,特异性为65.6%。结论术后血清PGⅠ和PGⅡ含量再次升高提示有胃癌复发风险;PGⅠ、PGⅡ及PGR联合检测对胃癌治疗及预后具有重要的临床价值,有助于胃癌复发的早发现和早治疗。

细菌性阴道病流行特点、危险因素及与支原体感染的关系探究

目的了解妇女细菌性阴道病(BV)的流行特点,探讨相关的危险因素及与支原体感染的关系。方法选取2017年1月至2018年1月确诊的BV患者白带标本80例(BV组),非细菌性阴道炎患者白带标本160例作为非BV组,健康体检者白带标本60例作为对照组。分别检测3组支原体感染率,分析支原体阳性率是否具有统计学意义;再通过对上述入选者进行问卷调查,经Logistic单因素及多因素分析探讨与BV可能有关的危险因素。最后通过就诊患者的唾液酸苷酶阳性率,分析其流行特点,包括发病年龄及季节等。结果 BV总感染率是13.49%,以40岁以上妇女及秋季好发;问卷调查共回收288份,回收率为96%,合格率为92.01%,年龄大于40岁、有生育史、有阴道病史、内衣非棉质4个因素是BV的独立危险因素;3组在人型支原体(MH)感染、解脲支原体(UU)感染及MH+UU混合感染中总体阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但均以BV组感染率最高。结论在日常生活中,特别对于40岁以上妇女需养成良好卫生习惯、健康的生活方式,还需加强自身身体素质,适当进行季节性防护,以更好预防BV发生。

原发性肝癌患者免疫细胞变化及其与HBV-DNA、HBeAg和肿瘤大小的关系

目的 探讨原发性肝癌患者机体免疫细胞变化及其与乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)和肿瘤大小的关系,为原发性肝癌发病免疫机制的研究提供依据。方法 选择2017年7月至2018年12月该院消化科住院的原发性肝癌患者120例为HCC组,选择同期82例健康体检者为对照组。比较两组研究对象外周血T淋巴细胞亚群水平,并比较不同HBV-DNA载量、HBeAg表达及不同肿瘤大小的原发性肝癌患者T淋巴细胞亚群情况。结果 HCC组患者CD3 +T淋巴细胞、CD4 +T淋巴细胞以及CD4 +/CD8 +低于对照组,CD8 +T淋巴细胞高于对照组,差异有统计学意义( P <0.05);不同HBV-DNA表达水平者、不同HBeAg表达患者CD3 +T淋巴细胞、CD4 +T淋巴细胞、CD8 +T淋巴细胞以及CD4 +/CD8 +比较,差异均无统计学意义( P >0.05);大肝癌组CD4 +/CD8 +低于小肝癌组,差异有统计学意义( P <0.05)。结论 原发性肝癌患者T淋巴细胞亚群的检测能较好地反映患者的细胞免疫水平。

E-cadherin、CA199及HE4在子宫内膜异位症患者血清中的表达及与自身抗体的相关性

目的:探究E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、糖类抗原199(CA199)及人附睾分泌蛋白E4(HE4)在子宫内膜异位症(endometriosis,EM)患者血清的表达及与自身抗体的相关性。方法:选取2017年12月至2019年12月于我院治疗的156例EM患者,根据AFS分期分为Ⅰ期(n=31)、Ⅱ期(n=42)、Ⅲ期(n=47)、Ⅳ期(n=36),另选取健康体检者50例作为对照组,对比各组患者血清内分泌激素、炎症因子、E-cadherin、CA199、HE4水平及自身抗体,分析E-cadherin、CA199及HE4水平与内分泌激素、炎性因子水平及自身抗体的相关性。结果:Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期及对照组患者血清雌二醇(E2)、泌乳素(PRL)、胰岛素(INS)水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);EM各分期患者血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);EM患者血清FSH、LH、T水平均低于对照组(P<0.05)。Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期及对照组患者血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)。EM各临床分期患者血清E-cadherin、CA199及HE4水平均较对照组升高,各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者抗精子抗体(ASAb)、抗绒毛膜促性腺激素抗体(HCGAb)、抗卵巢抗体(AOAb)、抗心磷脂抗体(ACAb)、抗子宫内膜抗体(EMAb)总阳性率升高,各组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,血清E-cadherin、CA199及HE4水平与E2、INS、FSH水平存在负相关性,与PRL、IL-1β、IL-18、MCP-1及TNF-α水平存在正相关性(P<0.05);E-cadherin、CA199及HE4水平与各自身免疫抗体阳性率存在正相关性(P<0.05)。结论:EM不同AFS分期患者血清内分泌激素、炎症因子水平及自身免疫抗体存在显著差异并与E-cadherin、CA199及HE4水平存在相关性,检测血清E-cadherin、CA199及HE4水平有助于了解EM患者病情严重程度。

加强管理提高基础医学实验室整体运行质量

实验室是高校的重要组成部分,是实践教学的重要基地.作为可开展多重实验的基础医学实验室,其对于综合研究型高校的医学、农学、生命科学、环境等学科科研发展和教学品味的提升尤其具有重要的作用.然而传统的实验室运行模式对于当前的实验教学工作的顺利、高效的开展已经显得落伍且越发跟不上现代医学实验室发展需求的步伐,所以研究适应新时期高校基础医学实验室新的管理办法对实验室仪器设备资源进行充分、合理的配置、对实验室工作人员进行分工明确的任务安排,建立健全相关实验室规章制度使实验室的各项工作有序的进行就特别需要对现有的实验室管理体系进行科学的配置,使之高效地为教学科研服务.本文通过分析传统基础医学实验室管理模式的诸多不足;探讨现代医学实验室的综合化管理模式和基础医学实验室发展的方向,在此基础上提出加强和规范医学实验室管理,提高实验室整理运行质量,适应时代促进资源共享的几方面的建议为综合大学的医学学科建设和多学科融合建设提供借鉴.

胃癌组织IL-17RB的表达及意义

分析胃癌组织IL-17RB和IL-17B表达水平,探讨其与胃癌发生发展的关系及其可能机制。留取25例胃癌组织及其配对的癌旁组织,应用普通PCR和实时荧光定量PCR法检测IL-17RB和IL-17B的mRNA,采用Pearson法进行相关性分析;western blot和免疫荧光法检测胃癌组织及其配对的癌旁组织IL-17RB蛋白水平表达差异。结果显示,胃癌组织IL-17RB和IL-17B mRNA表达水平均明显高于癌旁组织,两者呈明显正相关;胃癌组织IL-17RB蛋白水平明显高于癌旁组织。在胃癌组织,IL-17B/IL-17RB信号对胃癌的发生发展具有一定作用。

原始细胞不增多骨髓增生异常综合征骨髓细胞发育异常特征分析

目的:分析原始细胞不增多骨髓增生异常综合征(MDS)骨髓细胞发育异常特征,初步探讨发育异常类型及组合对MDS分型的诊断价值。方法:回顾分析2008-04—2017-08形态特征符合WHO2008分型标准的原始细胞不增多MDS患者132例,对照组83例(包括巨幼细胞贫血37例,免疫性血细胞减少12例,缺铁性贫血12例,类风湿性关节炎及治疗后12例,ITP激素治疗无效4例,肿瘤细胞骨髓润4例,获得性再生障碍性贫血2例)。比较MDS组和对照组中骨髓细胞发育异常类型的约登指数(Youden's index,YI)和特异度不同,根据MDS组与对照组发育异常YI差异,剔除负值YI和无统计学意义的类型,将MDS特异度100%单列等条件进行组合,粒、红二系发育异常组合分为Ⅰ类异常(YI<0.3)、Ⅱ类异常(YI≥0.3)和Ⅲ类异常(单列)三类;巨系发育异常组合分为Ⅰ类异常(YI≥3)、Ⅲ类异常(单列);并将其初步应用于MDS组和对照组中所有病例。结果:发育异常表现类型不同,临床价值也有差异。粒系环形杆粒细胞;红系核出芽、环状铁粒幼红细胞≥15%和巨核系淋巴样小巨核细胞等MDS组中的特异性均为100%,对照组均为0;粒系双核粒细胞、难分叶、假性Pelger-Huet畸形;红系奇数核,母子核;巨系小巨核细胞、单圆巨核细胞、多圆巨核细胞;既有较高的特异度又有一定的敏感度,也有较强的临床意义。3%≤原始细胞<5%,处于正常与诊断阳性之间,此项国内标准、FAB和WHO均未列入,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),同时通过跟踪观察,发现其向下转化为高危的概率较其他发育类型大。各组合初步应用结果可以看到,组合后发育类型的最高YI均有提高,红系表现的较显著。结论:Ⅰ类、Ⅱ类异常和Ⅲ类细胞发育异常对MDS诊断均有一定的价值;红系、粒系若仅表现Ⅰ类异常,应高度重视,排除影响因素,进一步观察;若同时表现Ⅰ类、Ⅱ类异常,MDS可能性很大;若同时表现Ⅰ类、Ⅱ类异常和Ⅲ类异常,MDS诊断基本可以确定。巨系若仅表现Ⅰ类,MDS可能性很大;若同时表现Ⅰ类、Ⅱ类异常,MDS诊断可以确定。