猪细环病毒1型间接ELISA抗体检测方法的建立

【目的】建立一种检测猪细环病毒1型抗体的血清学方法。【方法】以猪细环病毒1型衣壳蛋白为包被抗原,筛选和优化抗体检测反应条件来建立一种检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法,之后进行特异性和重复性试验,并进行初步临床应用检测。【结果】确定了检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法的各项最佳反应条件;对8种猪源病毒阳性血清的检测结果显示只有猪细环病毒1型阳性血清为阳性,显示出良好的特异性;批内变异系数均小于5%,批间变异系数均小于10%,显示出良好的重复性。对来源于北京和湖南地区的400份猪血清样品的检测结果显示,猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体阳性率为75.25%,PCR阳性率为71.00%,二者之间没有显著差异(P>0.05),表明这两个地区存在较多的的猪细环病毒1型感染。【结论】建立了一种特异性和重复性都良好的检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA,可用于猪细环病毒1型抗体的临床检测。

中药对致犊牛腹泻大肠杆菌体外抑菌效果

本试验旨在探讨黄连、白头翁和黄芩等中药对致犊牛腹泻大肠杆菌的体外抑菌效果,为犊牛腹泻的防控提供参考。试验菌株为致犊牛腹泻大肠杆菌,采用水提法提取黄连、白头翁和黄芩等24种中药,以抑菌圈直径大小、药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)为观测指标评判中药对引发犊牛腹泻大肠杆菌的体外抑菌效果。结果显示,黄芩、地榆2种中药对致犊牛腹泻大肠杆菌的体外抑制效果最明显,抑菌圈直径分别是10.15 mm和10.07 mm,MIC均为31.3 mg/mL;其余22种中药对试验菌株的体外抑菌效果较差,未表现出明显的抑菌效果。本试验结果表明,黄芩、地榆2种中药对致犊牛腹泻大肠杆菌有一定的体外抑制作用,具备一定的临床应用潜力。

富硒饲粮对农药Diquat诱导的鸡心脏氧化应激和细胞凋亡的影响

为探究饲粮加硒对Diquat诱导的鸡心脏氧化应激和细胞凋亡率的影响,将同一批次(180日龄)的健康且体重[(1.1±0.1)kg]相近的康乐黄鸡40只随机分成4组,经适应性饲养1周后,A、B组饲喂基础饲粮,C、D组饲喂添加亚硒酸钠饲粮(0.5 mg/kg硒),饲喂14 d后,B、C组腹腔注射15 mg/kg BW Diquat,A、D组腹腔注释等量生理盐水,处理4 d后处死所有鸡,采取心脏组织,采用苏木精-伊红(HE)染色方法观察心脏组织病理损伤情况,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)观察心脏细胞凋亡的情况,采用氧化指标试剂盒测定心脏抗氧化相关指标,采用Western blot和实时荧光定量PCR方法在蛋白和基因水平上进行定量分析。结果表明:HE染色结果显示,与A组相比,B组心肌纤维断裂明显,组织界限模糊不清,而C组断裂的心肌纤维数量明显减少。TUNEL分析结果显示,B组的心脏细胞凋亡率极显著高于A组(P<0.01),C组的心脏细胞凋亡率极显著低于B组(P<0.01)。抗氧化测定指标结果显示,B组心脏中的过氧化氢酶(CAT)活性显著低于A组(P<0.05),C组的心脏CAT活性显著高于B组(P<0.05),B组心脏中丙二醛(MAD)的含量显著高于A组(P<0.05),C组的心脏MAD含量极显著低于B组(P<0.01)。Western blot结果显示,心脏的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达量在3组间并无统计学差异(P>0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与A组相比,B组心脏中的Caspase-3和NF-κB mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),C组心脏中NF-κB和Caspase-3的mRNA相对表达量比B组显著下降(P<0.05)。以上研究结果表明,Diquat能够成功诱导康乐黄鸡心脏发生氧化应激和细胞凋亡,而饲喂富硒饲粮鸡心脏的氧化应激和细胞凋亡率都能得到一定程度的改善。

京津冀地区猪圆环病毒3型的全基因组克隆与分析

【目的】监测近期在京津冀地区流行的猪圆环病毒3型毒株及其基因变异情况。【方法】以近期京津冀地区猪圆环病毒3型阳性临床样品为模板,用PCR技术扩增猪圆环病毒3型全基因组片段,随后进行基因克隆、序列测定和序列分析。【结果】PCR扩增、序列测定和BLAST比对结果显示获得4株大小都为2000个核苷酸的猪圆环病毒3型全基因组序列。基于全基因组核苷酸分析结果显示,这4株猪圆环病毒3型与选取的国内外15株猪圆环病毒3型的同源性均达98.4%以上,系统发育树显示上述PCV3毒株所处的分支虽有所不同但却都非常近,表明不同猪圆环病毒3型毒株之间的全基因组核苷酸有非常高的同源性和保守性。基于开放阅读框2基因核苷酸的系统发育树显示上述猪圆环病毒3型毒株被分成3个分支,所得4株猪圆环病毒3型分别归属于基因型a与c,并呈现出一定的地域差异。【结论】获得了京津冀地区4株猪圆环病毒3型全基因组序列,虽然它们具有很高的全基因组核苷酸同源性与保守性,但却分属于2种基因型,并呈现出一定的地域差异。