目的 克隆人 B7.1全长 c DNA及构建相应的逆转录病毒表达载体。 方法 应用逆转录多聚酶链反应从人 B淋巴瘤细胞系 Raji中克隆 B7.1全长 c DNA ,再将 c DNA插入到质粒 p Bluescript中 ,经自动荧光测序证实无误后 ,再通过定向克隆构建...目的 克隆人 B7.1全长 c DNA及构建相应的逆转录病毒表达载体。 方法 应用逆转录多聚酶链反应从人 B淋巴瘤细胞系 Raji中克隆 B7.1全长 c DNA ,再将 c DNA插入到质粒 p Bluescript中 ,经自动荧光测序证实无误后 ,再通过定向克隆构建相应的逆转录病毒表达载体 PL XSNh B7。 结果 逆转录多聚酶链反应扩增产物长度与预期的 889bp一致 ;用 M13正、反向引物进行荧光测序证实 ,克隆出的序列与 Gen Bank的 B7.1c DNA序列完全一致 ;人 B7.1全长 c DNA被成功地插入到质粒 PL XSN中。 结论 人 B7.1全长 c DNA的克隆及相应逆转录病毒表达载体的构建为今后应用 B7.1进行肿瘤免疫基因治疗提供了可能性。展开更多
目的 构建单顺反子表达人 GM- CSF和 B7.1融合基因真核表达载体。 方法 应用巨引物 PCR技术对 h GM- CSF基因 c DNA进行定点突变 ;应用 PCR重叠延伸法 ,将 h GM- CSF和 h B7.1基因的 c DNA编码序列通过一 linker序列拼接 ,构建 h GM-...目的 构建单顺反子表达人 GM- CSF和 B7.1融合基因真核表达载体。 方法 应用巨引物 PCR技术对 h GM- CSF基因 c DNA进行定点突变 ;应用 PCR重叠延伸法 ,将 h GM- CSF和 h B7.1基因的 c DNA编码序列通过一 linker序列拼接 ,构建 h GM- CSF与 h B7.1融合基因 h GM- B7.1,将其插入 pc DNA3真核表达载体 ,测定核苷酸序列。 结果 序列分析表明 :(1) h GM- CSF突变体基因 c DNA编码序列的 178位核苷酸由 C变为 A,其余核苷酸序列均未发生变化 ;(2 ) h GM- CSF、linker、h B7.1的连接顺序、方向及序列完全正确。 结论 构建 pc DNA3- h GM- B7.展开更多
目的 探讨活动期和稳定期系统性红斑狼疮 (SL E)患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体 (s TNF- R )、可溶性肿瘤坏死因子受体 (s TNF- R )及肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平的变化在疾病发生、发展过程中的意义。 方法 应用 EL ISA方法测...目的 探讨活动期和稳定期系统性红斑狼疮 (SL E)患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体 (s TNF- R )、可溶性肿瘤坏死因子受体 (s TNF- R )及肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平的变化在疾病发生、发展过程中的意义。 方法 应用 EL ISA方法测定 46例 SL E患者及 30例正常人对照血清中 TNF-α和 s TNF- R 、s TNF- R 水平 ,及其与补体 C3 、抗双链 DNA抗体 (ds DNA)、抗核抗体 (ANA)及血沉的相关性。 结果 与对照组相比 ,SL E患者血清中 TNF-α、s TNF- R 和 s TNF- R 都显著升高 ,且活动期升高更为显著 (P<0 .0 1)。活动期患者 s TNF- R 和 s TNF- R 的变化与补体 C3 、ds DNA、ANA及血沉有非常显著的相关性 (P<0 .0 1) ,但与 TNF-α水平无相关性(P>0 .0 5 )。 结论 TNF-α在 SL E的免疫损伤机制中起重要的作用 ,而 s TNF- R 和 s TNF- R 在疾病中具有免疫调控作用 ,并可作为疾病活动的参考指标之一。展开更多
文摘目的 构建单顺反子表达人 GM- CSF和 B7.1融合基因真核表达载体。 方法 应用巨引物 PCR技术对 h GM- CSF基因 c DNA进行定点突变 ;应用 PCR重叠延伸法 ,将 h GM- CSF和 h B7.1基因的 c DNA编码序列通过一 linker序列拼接 ,构建 h GM- CSF与 h B7.1融合基因 h GM- B7.1,将其插入 pc DNA3真核表达载体 ,测定核苷酸序列。 结果 序列分析表明 :(1) h GM- CSF突变体基因 c DNA编码序列的 178位核苷酸由 C变为 A,其余核苷酸序列均未发生变化 ;(2 ) h GM- CSF、linker、h B7.1的连接顺序、方向及序列完全正确。 结论 构建 pc DNA3- h GM- B7.
文摘目的 探讨活动期和稳定期系统性红斑狼疮 (SL E)患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体 (s TNF- R )、可溶性肿瘤坏死因子受体 (s TNF- R )及肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平的变化在疾病发生、发展过程中的意义。 方法 应用 EL ISA方法测定 46例 SL E患者及 30例正常人对照血清中 TNF-α和 s TNF- R 、s TNF- R 水平 ,及其与补体 C3 、抗双链 DNA抗体 (ds DNA)、抗核抗体 (ANA)及血沉的相关性。 结果 与对照组相比 ,SL E患者血清中 TNF-α、s TNF- R 和 s TNF- R 都显著升高 ,且活动期升高更为显著 (P<0 .0 1)。活动期患者 s TNF- R 和 s TNF- R 的变化与补体 C3 、ds DNA、ANA及血沉有非常显著的相关性 (P<0 .0 1) ,但与 TNF-α水平无相关性(P>0 .0 5 )。 结论 TNF-α在 SL E的免疫损伤机制中起重要的作用 ,而 s TNF- R 和 s TNF- R 在疾病中具有免疫调控作用 ,并可作为疾病活动的参考指标之一。
