增龄因素对牙源干细胞生物学特性的影响

背景:牙源干细胞在再生医学与组织工程等领域的研究不断深入,为牙相关组织修复及全身疾病治疗带来了希望。但目前对不同年龄区间牙源干细胞生物学特性上的差异缺少系统的分析。目的:探讨脐血源血小板裂解液培养人乳牙、恒牙牙髓干细胞的生物学特性,为人血小板裂解液代替胎牛血清提供可靠依据。方法:取出乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓组织,在含体积分数为10%胎牛血清或5%,10%,15%人血小板裂解液的DMEM/F-12培养基中培养,采用细胞计数法检测4组细胞增殖情况,选取最佳人血小板裂解液浓度进行后续实验。在最佳人血小板裂解液浓度条件下,体外培养乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓干细胞,显微镜下观察细胞生长状态,流式细胞术检测细胞表面特异性抗原,细胞计数法和CCK-8法检测细胞增殖能力,三系分化实验观察细胞体外分化能力。结果与结论:①10%人血小板裂解液组的细胞增殖速率最高;②各组牙髓组织块周围均有梭形成纤维状细胞生长并扩增,乳牙与少年恒牙细胞形态无明显差异;与同代次乳牙和少年恒牙细胞相比,成年恒牙细胞体积偏大;③流式细胞术检测结果显示乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓干细胞均符合间充质来源干细胞的表型特征;④成年恒牙牙髓干细胞增殖能力明显低于乳牙及少年恒牙牙髓干细胞(P<0.01);⑤成年恒牙牙髓干细胞中成骨相关基因碱性磷酸酶、骨形态发生蛋白2 mRNA表达,成脂相关基因脂蛋白脂肪酶、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 mRNA表达,成软骨相关基因Ⅱ型胶原α1、软骨寡聚基质蛋白mRNA表达均显著低于乳牙及少年恒牙牙髓干细胞(P<0.01);⑥结果表明,人乳牙与少年恒牙牙髓干细胞相较于成年恒牙牙髓干细胞具有更强的增殖能力与多向分化潜能,更适用于临床研究和疾病治疗。

干细胞资源库信息管理系统的建立及在转化医学中的应用

转化医学、干细胞技术、信息技术等多学科的交叉和融合发展促使干细胞成为21世纪最具发展前景的技术。随着信息技术在干细胞行业的广泛应用以及转化医学在临床研究的快速发展,干细胞资源库信息管理系统逐渐被广泛重视。该系统综合管理干细胞资源库的日常工作和临床应用,为转化医学的查询、治疗、反馈及总结提供了有效平台。

T细胞亚群的生物学特性及临床应用进展

细胞免疫治疗技术作为一项新的治疗手段,近年来在临床上相对传统疗法发挥了其特有的优势,已逐渐成为研究的热点。T细胞作为免疫细胞的重要组成部分,已在细胞治疗领域得到越来越广泛的应用。作者对辅助型T细胞、细胞毒性T细胞和调节性T细胞3类亚群的作用机制与临床应用进行综合评述,并对树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞、自然杀伤T细胞、γδT细胞、CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞4种T细胞亚群在肿瘤治疗领域的应用进行详细比较。随着医学免疫学、细胞生物学及病理生理学的发展,细胞免疫治疗将发挥其更为重要的作用。

人羊膜上皮细胞培养工艺的优化及生物学特性

背景:目前人羊膜上皮细胞分离、培养及冻存的研究较为分散,难以形成全面有效的方案以满足未来对移植用干细胞的临床需求。目的:建立人羊膜上皮细胞优化的分离、培养与冻存工艺,并对其生物学特性进行研究。方法:运用正交法研究各因素对人羊膜上皮细胞分离、培养及冻存指标的影响,极差法分析数据得到优化的分离、培养与冻存工艺条件。对人羊膜上皮细胞进行原代与传代培养,通过镜下形态学观察,绘制细胞生长曲线,进行流式细胞术检测、免疫荧光染色及向肝样细胞分化等实验,观察人羊膜上皮细胞的生物学特性。结果与结论:(1)获得优化的人羊膜上皮细胞分离条件为:胰酶浓度0.25%,分4次消化,每次消化时间20 min;优化培养条件为:细胞接种浓度为4×108 L-1,表皮生长因子质量浓度为10μg/L,血清体积分数为5%;优化冻存条件为:细胞冻存浓度为1×1010 L-1,二甲基亚砜浓度为10%,血清体积分数为80%;(2)原代细胞在接种二三天内贴壁生长,贴壁后细胞呈不规则多角形,以铺路石样生长,传代后细胞贴壁与生长速度加快,冻存复苏的传代第2代细胞生长与扩增能力无明显下降;(3)免疫荧光染色显示,原代人羊膜上皮细胞强表达CK19、SSEA-4,不表达Vimentin、CD45和HLA-DR;原代与传代第4代免疫表型检测显示,人羊膜上皮细胞在培养传代过程中有上皮间充质转化现象发生;(4)向肝样细胞分化实验中,免疫荧光染色显示,诱导后的人羊膜上皮细胞肝细胞标志物白蛋白、CK18表达量明显上升,糖原染色显示诱导3周后的人羊膜上皮细胞有糖原合成;(5)结果表明,人羊膜上皮细胞易于获得且体外增殖能力强,表达胚胎干细胞保持未分化状态的表面标志物。

脐带间充质干细胞体外调节CD34^+CD126^-细胞向巨核系诱导的研究

目的:研究CD34+CD126-细胞向巨核细胞诱导分化及间充质干细胞对诱导过程的调节。方法:免疫磁珠分选获得CD34+CD126-细胞,设置3个实验组:无间充质组、间充质直接接触组和非直接接触组,以脐带血单个核细胞作对照,诱导向巨核细胞分化14 d,分别在7 d末与14 d末进行悬浮细胞数计数,流式测定CD34与CD41表型及镜下细胞形态观察。胶原蛋白凝胶培养基诱导CD34+CD126-细胞形成巨核细胞集落形成单位(CFU-Mk),12 d末CD41特异性抗原染色并镜下计数CFU-Mk。结果:(1)诱导7 d或14 d末,间充质组(CD34+CD126-细胞与MSC接触或非接触共培养组)获得悬浮细胞数均显著高于无间充质组(均为P<0.001),但MSC接触与非接触组间获得悬浮细胞数差异无统计学意义(P>0.05);(2)诱导7 d末,间充质组CD34阳性细胞数均显著大于无间充质组(均为P<0.001),MSC接触组CD34阳性细胞数显著小于非接触组(P<0.05),诱导14 d末,各组CD34阳性细胞率均下降至2%左右;(3)诱导7 d或14 d末,间充质组CD41阳性细胞数均显著大于无间充质组(均为P<0.001),而MSC接触与非接触组间CD41阳性细胞数均无显著性差异(P>0.05),CD34+CD126-细胞各组CD41阳性数均显著大于CBMCs的对应各组(均为P<0.001);(4)CD34+CD126-细胞组诱导得到的大CFU-Mk(≥50个细胞)与中CFU-Mk(21~49个细胞)数量显著大于CBMCs组(PCFU-Mk;≥50 cells<0.01,PCFU-Mk;21-49 cells<0.05)。结论:脐带间充质干细胞的旁分泌作用对于巨核细胞分化过程中CD34+细胞或CD41+细胞的增殖均具有促进作用,但MSC的微环境能显著降低CD34+细胞的增殖速率。诱导前筛选较为原始的巨核细胞祖细胞作为起始细胞对于巨核细胞诱导效率的提升具有显著作用。

脐带血造血干细胞向巨核细胞诱导分化研究进展

大剂量的放、化疗或进行造血干细胞移植会导致患者血小板急剧减少而致出血,严重时危及生命。输注他人捐献的血小板成为目前主要的治疗手段。但血小板储存时间短、易于激活、储存条件苛刻的原因导致血小板供应紧张[1].