徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌病原学初步研究

目的了解徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌分布及病原学特征。方法对本地区分离到的菌株进行血清学分型、生化、药敏试验,并使用聚合酶链反应(PCR)技术检测毒力基因,同时对致病性血清型(O∶3和O∶9型)菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果2014份标本中共检出32株(分布17个血清型)小肠结肠炎耶尔森菌,总检出率为1.59%。致病菌株占18.75%,携带ystB基因的占21.87%。32株小肠结肠炎耶尔森菌分为3个生物型别,其中1A型占78.12%,3型18.75%,2型为3.12%。本地区分离的3株O∶3血清型菌株的PFGE带型相同。结论该地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌以及由此引起的腹泻疾病,尤其O∶3型菌株属于我国O∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌的主要克隆系,本地区应当进一步加强该菌的监测工作。

一起甲型副伤寒沙门菌污染水源所致腹泻暴发疫情的病原学调查

目的对一起腹泻暴发疫情进行病原学调查,以便明确病因、进行有效的预防控制。方法采用荧光PCR快速检测、常规病原学分离培养、噬菌体裂解试验、ATB微生物自动鉴定系统等方法对疑似患者、环境水源水和饮用水采样,进行病原学的检测和鉴定。结果经荧光PCR检测与病原分离培养鉴定,来自患者粪便、血液、水源水和饮用水共12份疑似标本中,10份为甲型副伤寒沙门菌阳性,检出率为83.33%,其中4份来自粪便标本,4份来自血,1份来自水源水,1份来自饮用水。10株不同来源甲型副伤寒沙门菌的血清学分型、生化反应、药物敏感性、噬菌体裂解试验均相同。结论这是一起由甲型副伤寒沙门菌水源污染所致的腹泻暴发疫情。该菌的检出为本地区腹泻病原谱增加了一种新的病原菌。

2004-2005年我国部分地区小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布调查

目的了解2004-2005年小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布情况。方法对从不同宿主样品中分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行生物化学鉴定、血清学分型、毒力基因PCR检测。结果2004-2005年从8种常见动物宿主及食品中共分离到230株小肠结肠炎耶尔森菌,35.65%分离自猪,致病性菌株中51.52%来自猪,所占比例最高,而分离自腹泻病人、兔的菌株均为致病性菌株。结论我国小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布广泛,猪是最主要的宿主动物。

1999-2006年江苏省徐州市肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染状况的流行病学研究

目的探讨徐州市肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157∶H7(以下简称O157:H7)感染的流行特征,系统观察腹泻患者、宿主动物携带O157∶H7的状况及其与发病的关系,为制定防制策略提供科学依据。方法采用描述流行病学方法对徐州市近8年来O157:H7感染状况与流行特征进行分析。结果1999-2006年徐州共累计报告O157∶H7引起的感染性腹泻并发肾衰竭(HUS)131例,病死率87.79%。徐州市丰县、铜山县发病最多,占全市发病的77.10%。6～9月份为发病高峰,占发病的77.10%。年龄以60岁以上老人为主,占发病总数的74.81%,职业以农民为主,占91.60%。男女性别比例为1∶1.34。腹泻患者、宿主动物带菌率连续性监测结果证实了其与O157:H7感染关系。不同年份O157∶H7毒力基因发生了变化。结论O157∶H7感染自1999、2000年爆发流行后,徐州市疫情一直稳定。尽管疫情发生原因复杂,传播机制不清,但与腹泻患者带菌率、宿主动物带菌率及菌株毒力基因阳性率、毒力基因变迁有关。腹泻患者带菌率、宿主动物带菌率可作为爆发疫情预警监测指标。

19份手足口病临床标本的病原学分离与鉴定

目的:为探索手足口病的病原并为该病的防治提供科学依据,对本省徐州地区采集的19份手足口病临床标本进行病原学分离与鉴定。方法:采集的患者咽拭子(6份)和肛拭子(13份)标本,接种Hep-2细胞进行病毒分离,经培养3代,对有明显致细胞病变效应并能连续传代的毒株,用肠道病毒通用引物real-time-RT-PCR方法鉴定确认为肠道病毒后,用肠道病毒分子分型引物(E187/E222)对肠道病毒VP1区进行扩增,将扩增产物测序获得的序列与GeneBank中肠道病毒核苷酸序列进行比对,确定毒株血清型别。结果:19份标本中分离到9株病毒,均为肠道病毒。对其VP1区部分核苷酸序列测定和比较分析后,鉴定出其中有6株为CoxB5,1株为CoxB3,2株为Echo6。结论:虽然肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16(CoxA16)是引起手足口病暴发流行的主要病原,但引起手足口病的肠道病毒存在多种血清型,CoxB5、CoxB3和Echo6等均能引起手足口病。因此,对手足口病的病原学检测,除EV71和CoxA16外,不能忽视对其他肠道病毒的病原学检测和鉴定。

徐州地区小肠结肠耶尔森菌的分布特征

目的研究徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌(Y.e)在常见宿主及食品中的分布特征。方法在不同季节,采集不同地区各类样品进行常规分离鉴定。对分离菌株进行血清学、生物学分型,耐药检测,用PCR方法检测毒力基因。结果Y.e在该地区各类宿主、肉制品中均有分布,宿主的带菌率春季明显高于秋季(P<0.005)。猪是带菌率最高的宿主(8.2%),狗次之,二者是致病性Y.e的宿主动物。致病菌株占总菌数的10%,0:3/生物3型为致病菌的优势菌型(9/10)。结论该地区Y.e的分布有季节和地区性差异,猪,狗是重要的宿主动物,致病性菌株和非致病性菌株同时存在。

感染性腹泻流行病学调查分析

目的 :查明感染性腹泻病因、传播途径以及有关影响因素 ,完善有效控制该病流行的策略。方法 :用样本估计总体发病水平推断流行强度。流行因素采用病例对照调查 ,并进行危险因素的单因素分析和多因素 logistic回归分析 ;病原学检测使用普通培养基以及免疫磁株法与珂玛嘉、彩虹、头孢可肟三种特选培养基联合应用。结果 :流行区感染性腹泻罹患率 3.6 9% ,并出现多例伴急性肾功能衰竭。优势菌为志贺氏菌属 ,占检出病原菌总数的 6 5 .6 7% (88/134) ,大肠杆菌为流行过程的次优势菌株 ,检出 34株 ,占 2 5 .37% ,出血性大肠杆菌 (EHEC) O15 7:H7是重症病例重要病原。吃剩饭菜、无防蝇设备和饭前洗手 3项因素对腹泻病发生和流行有意义。结论 :应通过卫生宣教、外环境灭蝇灭蛆及合理治疗腹泻病人控制疫情。

徐州市蟑螂体表带菌状况调查研究

目的了解徐州市不同生境室内蟑螂体表带菌状况,提高对蟑螂危害防范意识,控制疾病传播。方法将诱捕到的蟑螂,根据不同生境进行分组,分别检测蟑螂带菌总数及其携带致病菌情况。结果不同生境蟑螂带菌率为100%,大肠杆菌、霉菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌携带率分别为60%、100%、40%、20%、20%,溶血性链球菌和志贺氏菌均未检出。结论徐州市蟑螂带菌率较高,应加强对蟑螂的防治。

徐州市大肠埃希菌O157∶H7宿主动物带菌情况及毒力研究

目的 了解徐州地区O15 7∶H7大肠杆菌宿主动物带菌情况及其毒力基因阳性率。方法 采集流行区内猪、鸡、羊、牛等家畜家禽粪便标本 ,用免疫磁珠法进行病原菌分离培养 ,并用多重引物PCR进行毒力基因分析。结果 共采集猪、鸡、羊、牛等家畜家禽粪便标本 92 5份 ,检出O15 7∶H7大肠杆菌 12 7株 ,检出率为 13 73%。其中 ,以牛、羊检出率较高 ,分别为18 6 0 %和 16 0 1%。对 4 2株菌株进行了SLT1、SLT2、eaeA和Hly四种毒力基因的检测 ,85 71%的菌株毒力基因阳性 ,且以同时带有SLT2、eaeA和Hly三种毒力基因最为常见 ,占带毒菌株的 80 5 6 %。病家分离的菌株带毒率 (96 4 3% )明显高于外对照 (6 4 2 9% ) (P <0 0 1)。结论 加强宿主动物O15 7∶H7监测 ,对疫情的分析和疫情预测具有重要意义。

3种快速检测生肉中单核增生李斯特菌的方法研究

目的应用荧光定量PCR技术（Real-time PCR）和磁免疫分离技术（Immunomagnetic separation，IMS）及显色培养技术优化组合，建立对生肉中单增李斯特菌的快速检测方法。方法应用3种快速检测方法检测模拟样品和423份肉制品中的目标菌，比较不同方法的敏感度和特异度。结果用PCR—IMS法48h可达检出限为10～20CFU／10g，实际检测效果显著优于其他两种方法。结论PCR-IMS是检测单增李斯特菌可靠、灵敏、快速的确证方法。

徐州地区急性呼吸道感染患者中人偏肺病毒的检测

目的在本实验室建立一种敏感有效的人偏肺病毒(hMPV)的检测方法、了解徐州地区急性呼吸道患者中人偏肺病毒hMPV的感染情况,分析徐州地区hMPV感染人群的流行病学特点及hMPV感染的临床特征,为hMPV的研究提供一些依据。方法在医院呼吸科门诊就诊的急性呼吸道疾病患者(RTI)中采集咽拭标本,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hMPV的核蛋白N基因,并对扩增产物进行基因序列的测定后将之与GemBank的hMPV的全序列进行比对。结果2005年1月至2005年3月的75份标本用RT-PCR的方法检测后,确定有12份标本为N基因阳性,检出率为16.0%,扩增产物均经基因序列分析比对。结论徐州地区的急性呼吸系统疾病中存在hMPV感染,且在徐州地区急性呼吸系统疾病中约有16.0%的患者是由hMPV感染引起,其中6岁以下儿童占50%,这些hMPV感染患者的临床症状主要表现为:高烧、咳嗽。

徐州市2004年小肠结肠炎耶尔森菌人及动物带菌情况调查报告

目的:调查本地区小肠结肠炎耶尔森菌人群及动物感染情况,毒力基因携带情况,血清型分布情况及生物型别。方法:10月中旬采集牛、羊、猪、狗粪便共358份,4℃冷增菌后用选择性培养基进行病原菌分离培养并做生化实验,可疑菌株做血清学鉴定和生物分型及毒力检测。结果:检出阳性菌株15株(其中2株携带毒力基因),检出率为4.2%(其中猪的检出率5.1%;羊的检出率5.7%;狗的检出率4.3%;牛的检出率0%)。结论:本次调查在羊、猪、狗粪便标本中检出小肠结肠炎耶尔森菌,带毒菌株的血清型为O:3,生物型为1B。检出的其余血清型别菌株均不带毒力质粒。人和牛粪便标本中未检出小肠结肠炎耶尔森菌。

大肠埃希菌O157:H7志贺毒素Ⅱ变种的分布

目的 了解徐州地区E .coliO15 7:H7分离菌株Stx2毒素变种Stx2vha在人及畜禽中的携带分布情况。方法 用特异性探针Southern杂交检测菌株中是否携带Stx2vha毒素变种。结果 6 6株分离株中 35株为Stx2vha毒素变种阳性 ,占 5 3% ,13株为Stx2原毒素阳性 ,占 19 7% ,17株为Stx2毒素阴性 ,占 2 5 8% ,另有 1株不同于其它菌株是否为新的毒素变种需进一步确证。 35株Stx2vha阳性菌株在羊、病人、牛、猪、鸡的分离率分别为 37 1% ,2 5 7% ,17 1% ,11 4 % ,4 5 %。结论 含有Stx2vha毒力基因菌株是徐州地区O15 7:H7菌株的优势菌型 。

腹泻患者粪便标本分离的克吕沃菌的病原学鉴定

目的鉴定分离自腹泻患者粪便标本的4株革兰阴性杆菌,并对其耐药性和致病性进行研究。方法用生化和16S rRNA序列分析方法对该菌进行属的鉴定,并用抗坏血酸盐试验和葡萄糖5℃发酵试验进行种间区分,利用bioMerieux公司的ATBG(-)5试条进行该菌的药物敏感性试验,用常规的动物试验进行该菌的致病性研究。结果分离的4株菌均为抗坏血酸克吕沃菌,除1株菌外,其余3株菌对所检测的抗生素都有一定的耐药性,而进行的各种动物试验结果均为阴性。结论该菌对目前常用的抗生素有一定的耐药性,但不表达致泻性大肠埃希菌的一些常见毒素因子。

一起感染性腹泻暴发的流行病学调查分析

目的查明感染性腹泻病因、传播途径以及有关影响因素,完善有效控制该病流行的策略。方法用样本估计总体发病水平推断流行强度;流行因素采用病例对照调查,并进行危险因素的单因素分析和多因素Logistic回归分析;病原学检测使用免疫磁株法。结果流行区内罹患人数达294636例,93例伴急性肾功能衰竭。优势菌为志贺氏菌属,占检出病原菌总数的65.67%(88/134),大肠杆菌为流行过程的次优势菌株,检出34株,占25.37%,出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7是重症病例重要病原。吃剩饭菜、无防蝇设备和饭前洗手3项因素对腹泻病发生和流行有意义。结论通过卫生宣教、外环境灭蝇、灭蛆及合理治疗腹泻病人控制疫情。

抗坏血酸克吕沃菌脉冲场凝胶电泳分型方法的建立

目的建立适于抗坏血酸克吕沃菌的PFGE分型方法。方法参考PulseNet中大肠杆菌O157∶H7的PFGE分型方法,选择不同的限制性内切酶和不同的电泳参数,进行反复试验,来确定用于抗坏血酸克吕沃菌PFGE分型的具有高分辩能力的限制性核酸内切酶和电泳参数。结果5株抗坏血酸克吕沃菌经限制性内切酶XbaI、SpeI、BlnI酶切后,再经我们选定的参数电泳,可呈现理想的PFGE带型,具有良好的分型能力。而NotI、SmaI酶切后产生的片段绝大部分集中在200kb以下,且图谱上条带过于密集而难以明确区分。结论利用限制性内切酶XbaI、BlnI和SpeI的PFGE分型方法对抗坏血酸克吕沃菌都具有较好的分辨能力,都可以用于该菌的分子分型,但应优选限制性内切酶BlnI、XbaI。