栝楼的组培快繁技术研究

目的：探讨栝楼组织培养及种苗快速繁殖技术。方法：通过茎尖、带芽茎段、茎段和叶片诱导丛生芽及愈伤组织。结果：栝楼2年生块茎幼苗的茎尖和带芽茎段在MS＋2mg／LBA＋0．5～0．05mg／LNAA培养基上可诱导丛生芽，并在生根培养基MS＋0．1mg／LNAA＋0．2mg／LIBA中生根，经驯化移栽可实现快速繁殖。无芽茎段和叶片用含4mg／LBA和0．5mg／LNAA的MS培养基可诱导愈伤组织，由茎段来的愈伤组织经6周后分化为无根苗。结论：栝楼茎尖和带芽茎段的组织培养，可在短期内大量繁殖栝楼雌雄种苗，具有成本低，效益高的特点。

秋水仙素诱导文旦柚2n配子获得自交三倍体

以‘土佐文旦’柚成树为材料,探讨了秋水仙素诱导2n配子的方法,研究了秋水仙素浓度和处理时期对获得三倍体的影响。结果表明:开花前1周用0·25%的秋水仙素处理花蕾,可诱导2n配子自交亲和。经对发芽存活的自交后代植株的叶片细胞核DNA量检测和细胞学鉴定,确定25%的自交后代植株为自交三倍体。通过秋水仙素诱导文旦2n配子是获得自交三倍体的有效途径。

柑橘类植物染色体制片新技术

为获得清晰的染色体图像,对柑橘的体细胞染色体和花粉母细胞染色体制片方法进行了研究.开发了染色体制 片新技术:①体细胞染色体制片选取3～5mm长的幼叶,用体积分数为0.3%的纤维素酶和体积分数为0.2%的果胶 酶于37℃下进行2h酶解;②花粉母细胞的染色体制片则选取约开花3周前花蕾中的花药,酶解的适宜条件为3%纤 维素酶和2%果胶酶混合酶液于37℃下进行3h酶解.可得到背景干净、伸展分散良好、清晰可靠的染色体图像.

用荧光素显带技术识别柑橘杂种染色体的多样性

应用色霉素A3(Chromomycin A3,CMA)荧光素显带技术,得到了清晰的文旦柚(Citrus grandis[L.]Osb)染色体构成类型:土佐文旦(Tosa-Buntan Pummelo)为1A+1B+5C+2D+9E;水晶文旦(Suisho-Buntan Pummelo)为3A+3C+3D+9E.对杂交F1代38株文旦柚的染色体组进行了观察,发现了共13种染色体构成类型.荧光素显带技术对染色体构成多样性的高度识别,可成为植物配子体形成过程中的减数分裂、基因重组等机理分析的有效方法.

‘土佐文旦’胚囊发育及其子代体细胞染色体的观察研究

选取母本‘土佐文旦’不同时期的花蕾及文旦杂交F１子代3～5mm长的幼叶，采用石蜡制片法及柑橘染色体制片技术，观察不同时期母本子房结构及杂交F１子代体细胞染色体数目。结果显示：（1）追踪到母本大孢子的发生及不同时期胚囊的发育特征，获得了杂交F１子代清晰可靠、分散良好的体细胞染色体图像，母本石蜡切片观察结果为进一步确定2n雌配子的最佳诱导期提供依据；（2）杂交F１子代体细胞染色体观察结果表明，杂交F１子代中既有正常的二倍体也有三倍体，为进一步原位杂交技术及确认2n配子类型和可能的遗传效应奠定了基础。

遗传育种学实验教学体系改革与建设

随着高等院校课程建设和改革的深入,《遗传育种学》已成为生命科学相关专业的主要课程之一。本实验教改通过进一步优化完善实验教学内容、改进实验教学方法和规范教学管理等手段,开展《遗传育种学》实验教学体系的改革与建设,并与《普通生物学》、《植物生物学》等基础课程与《园艺学》、《生态学》等专业课程有机结合,通过实验教学进一步提升理论教学效果,全面提高学生的能力素质,为培养具有应用生物技术基本技能和创新能力的人才奠定基础。

青海省冬虫夏草的遗传变异及亲缘关系的形态性状和ISSR分析

目的探讨青海省不同地区冬虫夏草的鉴定方法,并评价其遗传变异、亲缘关系及地域分布。方法利用形态性状和ISSR标记分析青海省11个县的冬虫夏草样品。结果青海省不同地区的冬虫夏草无论是形态性状还是ISSR多态性都存在很大的遗传变异。根据形态性状数据,青海省的冬虫夏草大致分成3个组,即分别产于环青海湖地区、青海中东部和南部,但仅基于形态性状来鉴定特定的冬虫夏草十分费力且不可靠。根据ISSR指纹图谱能够鉴定不同产地的冬虫夏草,而且ISSR分析表明青海省的冬虫夏草可分成产于环青海湖地区和其他地区两大类,其他地区一大类又可分成青海省南部、中部和东部产区3个平行分支。结论青海省的冬虫夏草在分布上表现出明显的地域性。ISSR分子标记对于冬虫夏草的鉴定和亲缘关系检测是非常有效的手段,与形态性状分布相结合效果更佳。

铅、锌胁迫对栝楼幼苗生长及抗逆生理因子的影响

通过室内盆栽实验,研究了Pb、Zn胁迫对药用植物栝楼(Trichosanthes kirilowii)幼苗生长及抗逆生理因子的影响。结果显示,Pb、Zn胁迫可使栝楼生物量降低、植株矮化、黄斑叶片数量增多,Pb对栝楼幼苗生长的影响大于Zn。随着Pb浓度的升高,光合色素含量呈先上升后下降的趋势,Zn浓度对光合色素含量的影响不大;紫外吸收物含量及超氧化物歧化酶、过氧化物酶等保护酶系活性随Pb、Zn浓度的提高而增大;可溶性蛋白、可溶性糖含量随Pb、Zn浓度的提高而下降。研究表明,栝楼幼苗对Pb、Zn胁迫具有一定的耐受力,但高浓度Pb、Zn对幼苗生长及抗逆生理因子具有较显著的抑制作用。在种植栝楼时应充分考虑土壤条件,确保植株健康、正常生长。

HPLC定量分析冬虫夏草的主要核苷类有效成分

目的:探讨冬虫夏草主要核苷类成分的定量分析方法。方法:采用微量提取及HPLC-UV分析法。结果:建立了冬虫夏草核苷类物质的微量提取方法,在优化的HPLC-UV色谱条件下,鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺嘌呤、腺苷和虫草素等5种冬虫夏草主要核苷类物质的标准品分离完全。精密度、稳定性和回收率实验表明,用HPLC-UV方法即可定量分析冬虫夏草的核苷类有效成分。用该方法检测到这5种核苷类物质含量在冬虫夏草子座部分与其虫体部分之间以及冬虫夏草居群间存在显著差异。结论:冬虫夏草主要核苷类成分的有效定量分析方法的建立对冬虫夏草的品质评价及质量控制具有重要的现实意义,也为进一步研究影响冬虫夏草品质的因素并建立品质评价体系奠定了基础。

人参农家类型遗传多样性的ISSR分析

目的探讨人参农家类型的遗传多样性和亲缘关系,为人参的栽培和选育种提供遗传学依据。方法采用ISSR分子标记分析5种人参农家类型7个居群120个样本的遗传多样性。结果人参农家类型有较丰富的遗传多样性,平均多态位点百分率为48.85%;不同农家类型的遗传多样性水平有差异,和其他农家类型相比,长脖和竹节芦的遗传变异较小,且两者之间的相似性系数高达97%;不同产地的同一人参农家类型间也存在很大的遗传差异。结论研究表明人参农家类型的遗传差异主要存在于各类型内部,而且可能更多地存在于同一类型的不同居群内部。为促进人参新品种的选育,有必要在现有的栽培群体中补充不同产地的同一类型的种质资源。

雌雄栝楼植株内含物比较研究

目的分析雌雄栝楼植株内含物组成及量的差异,为早期性别鉴定提供依据。方法测定雌雄植株叶片生理生化指标并进行差异显著性分析,采用HPLC法分析雌雄植株叶片化学成分差异。结果雄株的光合色素,可溶性蛋白质的量,SOD、POD活性,DNA浓度高于雌株,其中光合色素的量、POD活性差异达显著性水平。雌株的MDA、可溶性糖、紫外吸收物的量高于雄株,其中紫外吸收物的量差异达显著性水平。HPLC分析结果显示雌雄植株叶片的出峰数目、时间、峰高等参数明显不同。结论栝楼雌雄植株中内含物的组成及量存在一定差异,紫外吸收物及HPLC特征峰可望作为性别鉴定的指标。

紫外分光光度法测定微量人参木质素的含量

目的:建立微量人参木质素含量测定的紫外分光光度法。方法:采用经典的K lason法和紫外分光光度法。结果:紫外分光光度法测得的木质素含量较K lason法高,且重复性和精密度更高。人参木质素特征性吸收峰出现在260 nm波长处。紫外分光光度法的溴乙酰处理条件为70℃保温30 m in。不同类型人参在木质素含量上有较大差异。结论:紫外分光光度法简便易行、快速准确,测定所需材料微量,适用于人参等名贵中药材的木质素含量测定。

镉与锌复合污染对栝楼幼苗生理特性的影响

通过室内盆栽实验,研究镉(Cd)、锌(Zn)复合污染对栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim.)幼苗生理特性的影响.结果显示,随着Cd、Zn浓度的升高,叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、可溶性糖及紫外吸收物含量下降;超氧化物歧化酶(SOD)活性先升高再下降,过氧化物酶(POD)活性及类胡萝卜素含量呈升—降—升趋势;丙二醛(MDA)和可溶性蛋白含量分别呈S"型及倒N"型曲线变化.与对照相比,在不同浓度复合污染条件下,光合色素、可溶性糖、可溶性蛋白、紫外吸收物含量及SOD活性均有所下降,POD活性和MDA含量上升.研究表明,栝楼幼苗对Cd、Zn胁迫具有一定的耐受力,但高浓度Cd、Zn对幼苗正常生长有较为显著的抑制作用.

根癌农杆菌介导大花蕙兰遗传转化的研究

以大花蕙兰原球茎(PLBs)为外植体,采用EHA105和LBA4404 2种根癌农杆菌菌株与pCAMBIA1301质粒构建工程菌介导,以建立大花蕙兰遗传转化体系,并比较不同受体处理方式、菌液浓度和侵染方式等对大花蕙兰转化的影响.结果表明:(1)以切成3 mm左右的PLBs小块作为受体材料,用OD600值为0.6的LBA4404根癌农杆菌菌株,并用MS+1.0 mg/L BA+200μmol/L AS(乙酰丁香酮)的液体培养基将菌液等体积稀释侵染,转化率可达62.5%.(2)大花蕙兰对潮霉素(Hyg)十分敏感,5 mg/L Hyg对转化后的PLBs有较好的筛选效果,筛选后最高成活率为13.0%.(3)PCR检测初步证明,通过根癌农杆菌介导的方法获得了2株转基因大花蕙兰植株.

用线粒体nad1基因b/c内含子鉴别人参属4种药材

目的:探讨人参属4种药材人参、西洋参、三七、竹节参的鉴别方法及其系统发育关系。方法:扩增线粒体nad1基因,测序比对,分析该基因序列的差异。结果:获得人参(移山参、高丽参)和竹节参该基因的1290 bp片段序列,西洋参和三七的该基因片段长度则分别为1269 bp和1522 bp,主要差异为该基因的b/c内含子。在NJ系统发育树上,人参和竹节参关系最近,其次是西洋参,而与三七的关系最远。结论:基于该片段的碱基差异可从这4种药材中将西洋参、三七鉴别出来。人参属植物线粒体nad1基因b/c内含子存在一定的进化信息,可以进一步用于人参属药材的鉴别及系统发育关系分析。

用线粒体Cytb基因序列探讨冬虫夏草寄主蝠蛾的系统进化关系

为探讨冬虫夏草寄主蝠蛾种属间的系统进化关系,采用CTAB法分别从18个冬虫夏草居群的虫草虫体头部和2种寄主蝠蛾中提取基因组DNA,PCR扩增获得冬虫夏草寄主线粒体Cytb基因片段序列.结合GenBank中的蝙蝠蛾科24种冬虫夏草寄主的同源序列,构建NJ系统树.结果表明,双栉蝠蛾属(Bipectilus)先于蝠蛾属(Hepialus)和类蝠蛾属(Hepialiscus)分化;蝠蛾属的冬虫夏草寄主种类众多形态各异,且均有特定的地理分布,蝠蛾属的种间遗传分化也较明显,蝠蛾属可能是多系起源;Cytb基因序列在冬虫夏草寄主蝠蛾种属间存在较丰富的变异,在蝠蛾属中除草地蝠蛾和金沙蝠蛾的该段序列完全一致外,其他种类蝠蛾种间变异率为0.23%—9.24%,Cytb基因序列可用于冬虫夏草寄主昆虫种的鉴定,但有必要获取更多种类的寄主昆虫来进一步验证.通过对冬虫夏草虫体头部提取的DNA进行PCR扩增获得其寄主蝠蛾Cytb基因序列的方法准确有效,有助于进一步获取更多的基因序列对更多的冬虫夏草居群和寄主种类进行系统发育、居群遗传结构及菌虫相互关系等研究.

人参木质素量与生长年份关系的研究

目的研究不同生长年份人参中木质素量的变化规律,探讨木质素的量用于判断人参生长年份的可行性。方法采用紫外分光光度法测定人参木质素的量。结果人参不同部位和组织的木质素的量存在明显差异;人参根须部的木质素量与生长年份呈极显著负相关(r=0.986**),可作为判断人参生长年份的指标;根据人参根须部木质素的量估算的人参生长年份与实际生长年份的误差范围小于2.5年。结论紫外分光光度法可快速、准确地测定人参根须的木质素的量,无需破坏人参的外形即可初步估算人参的生长年份,不仅可以作为人参生长年份的鉴定方法,同时也可供中药材年份鉴定借鉴。

红麻种质资源遗传多样性和分子鉴定技术研究 Ⅱ.红麻种质资源的遗传多样性和亲缘关系的AFLP分析

用扩增性酶切片段长度多态性(AFLP)分析了来源于世界不同国家地域的23份红麻种质资源和2份红麻近缘种玫瑰茄资源。用选取的6对引物组合获得了505条AFLP分子标记。结果认为AFLP分析是红麻品种鉴定和遗传关系检测的非常有效的手段,同时根据AFLP分子标记检测到的红麻与玫瑰茄之间的遗传差异支持了它们在分类学上的独立性。红麻种质资源的AFLP分析结果支持了红麻起源于非洲的假设,并证实了栽培红麻首先被引到亚洲,并进一步被传播到中北美洲。

马来西亚的红麻研究及开发进展

红麻作为多用途可持续利用的再生资源引人关注。本文详细介绍了马来西亚将红麻的用途定位于饲料、纤维强化合成材料、制浆造纸原料而开展的红麻品种筛选、种植、病害虫防治、贮存、加工利用及其生产经济学方面的研究进展和下一步工作计划,以期为我国的红麻研究及开发利用提供一些参考。