冬瓜WRKY基因家族鉴定及表达分析

【目的】WRKY转录因子家族在植物生长发育、抵御胁迫等过程起着至关重要的作用。挖掘参与冬瓜(BenincasahispidaCogn.)非生物胁迫的WRKY基因家族成员,探究其生物学功能。【方法】基于冬瓜基因组数据库鉴定冬瓜WRKY成员,利用生物信息学的方法系统分析其WRKY基因家族成员的蛋白理化性质、系统发育、保守基序、顺式作用元件,通过qPCR分析冬瓜WRKY的表达情况。【结果】冬瓜WRKY基因家族有57个成员,氨基酸数目在126~650之间,相对分子质量在13.92~71.68 kD之间;蛋白等电点在4.61~9.69之间。根据系统进化树将该家族分为3个类群,第二类群又分为5个亚组。冬瓜WRKY外显子有2~6个。染色体定位分析发现,有56个基因定位在12条染色体上,1个基因未定位在染色体上。保守基序分析显示,Motif1和Motif3存在于56个基因,且同一类群具有类似的保守基序结构。同时,冬瓜WRKY基因的启动子上均含有应激反应相关元件、激素响应元件。WRKY在冬瓜不同组织和果实发育时期特异表达。RT-PCR结果表明非生物胁迫和激素处理冬瓜可诱导部分WRKY基因的表达。【结论】共鉴定出57个冬瓜WRKY基因,同亚组的成员具有类似的保守基序结构。冬瓜WRKY基因在不同组织中的表达存在差异,其中,BhWRKY2、BhWRKY5、BhWRKY39、BhWRKY11、BhWRKY31、BhWRKY53参与不同的胁迫响应。

草莓试管苗移栽基质研究

通过对草莓试管苗进行不同移栽基质试验,研究了不同移栽基质对草莓试管苗生长的影响。结果表明,草莓试管苗的最佳移栽基质是腐殖土∶红土=1∶1,移栽成活率近90%。

接种与非接种菌根菌条件下蓝莓扦插苗生长差异比较

以草炭与珍珠岩(体积比1∶1)及以红土、松针腐殖土与锯末(体积比1∶1∶1)混合作为栽培基质,取侵染率为65.6%的2年生南高丛蓝莓幼嫩根段作为菌剂进行接种,比较接种与非接种处理条件下南高丛蓝莓扦插苗生长差异情况。结果表明,在2种栽培基质下接种处理均促进了南高丛蓝莓扦插苗的生长,其中接种在草炭与珍珠岩基质中的蓝莓,其枝数、枝长、叶片数及根长平均比非接种处理增加了91.67%、114.20%、144.29%及5.79%;在红土、松针腐殖土与锯末基质中的蓝莓,其枝数及根长平均比非接种处理减少7.25%和3.42%,而新枝数、枝长及叶片数平均比非接种处理增加了86.67%、91.22%和177.04%。研究结果表明,南高丛蓝莓扦插苗生根后在栽培介质中添加菌剂是一种理想的扦插育苗方法。

冬瓜首雌花节位遗传分析与基因定位

【目的】对冬瓜首雌花节位基因(FFFN)进行遗传分析和定位,为FFFN基因的克隆奠定基础。【方法】以首雌花节位差异显著的冬瓜高代自交系材料B214(P_(1))和B227(P_(2))及以P_(1)为母本和P2为父本构建的F1(P_(1)×P_(2))、F_(2)、B_(1)(F_(1)×P_(1))和B_(2)(F_(1)×P_(2))遗传群体为材料,采用6世代混合模型分析方法对FFFN进行遗传分析,并利用已构建的高密度SNP遗传图谱进行数量性状位点(QTL)分析。【结果】冬瓜FFFN遗传符合E模型,主要受2对主基因的加性效应及2对主基因的加性互作效应控制,同时受环境影响较大;结合已构建的高密度分子遗传图谱,仅检测到1个与FFFN相关的QTL位点(FFFN2.1),其对数优势比阈值(LOD)为11.7,贡献率为32.1%,位于2号染色体上的Marker 61668-Marker 39179,物理距离为7.64 Mb。通过标记加密将FFFN2.1定位在InDel2和SSR91之间的1.38 Mb范围。候选区间内有28个候选基因(Bhi02M001022~Bhi02M001049),其中11个基因没有功能注释,其他17个注释的功能基因包括生长素反应蛋白(ARF)、逆转录酶、丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶、三角状五肽重复蛋白等。【结论】冬瓜FFFN是多基因控制的数量性状,主效位点FFFN2.1定位在InDel2和SSR91之间,结合功能注释推测Bhi02M001033为候选基因。

南高丛越桔试管苗苗期培养及壮苗修剪试验

结合昆明地区的生态条件,对南高丛越桔‘夏普蓝'和‘戴安娜'两个品种的试管苗进行了出圃前壮苗及培养苗木具有较好分支树冠类型修剪试验研究,得出一套南高丛越桔试管苗快速出圃及出圆前苗木获得较好分支树冠类型的修剪技术。

染色质重塑因子在植物发育过程的功能

染色质重塑复合体(chromatin remodeling complexes)通过具有ATPase活性的亚基水解ATP释放能量,通过改变核小体“构象”(包括核小体重定位、核小体滑动和核小体替换等)而改变DNA的“可及性"(accessibility),进而影响特定的生理、生化过程。染色质重塑复合体最早在酵母中发现,生化分析表明其至少含有13个亚基。目前植物染色质重塑复合体的组成还未完全解析,但通过对其酵母同源亚基(染色质重塑因子)的研究可从侧面探究植物染色质重塑复合体的功能。同时,还着重讨论了近年来在植物染色质重塑因子研究上取得的结果,以期为植物染色质重塑的作用机制提供启示。

走信息化兴企之路 塑跨越式发展之魂

针对运用信息化改造传统产业,以信息化带动工业化,对佳木斯合成实业有限责任公司运用信息化技术和理念改造、提升企业的管理、生产、技术、经营水平采取的措施及成果进行了综合介绍,提出了研究和讨论传统制造企业实施信息化的重要意义和实施理念。

广东蒲瓜育种研究60年

蒲瓜属于葫芦科葫芦属栽培种,适应性较强,生长期较长。其肉质软滑味甜,深受广大消费者喜爱。回顾广东蒲瓜60年育种研究的历程,这是广东蒲瓜品种从农家种向一代杂种发展的重要时期。广东蒲瓜育种起步晚,前期进展慢。20世纪60年代,广东省农业科学院率先在全省开展蒲瓜资源调查及地方品种整理研究工作,至90年代中期共向国家种质资源库上交蒲瓜种质资源16份,占全国蒲瓜收集资源总数的6.6%,处于蒲瓜育种研究的起步阶段。2000年后广东各地先后育成了美丰一号、美绿一号和粤丰一号等蒲瓜常规品种,以及早蒲2号、永乐、青秀、短瓠蒲瓜、利农杂交系列蒲瓜等一代杂交品种,广东蒲瓜育种由此步入快速发展阶段。未来广东蒲瓜育种将在现阶段基础上开展种质资源的收集与评价、多抗优质新品种选育、耐寒(耐热)品种选育与保护地育种,并结合现代生物技术开展育种研究,提高广东生态区域蒲瓜新品种的选育效率,以促进广东地区蒲瓜育种再上新台阶。

水稻cDNA酵母表达文库的构建及重金属镉胁迫相关基因的初步筛选

提取经重金属胁迫处理的水稻幼苗总RNA并纯化mRNA,采用SMART技术反转录成cDNA,利用Gateway技术将cDNA构建到入门载体pDONR222后,再经LR反应重组到酵母表达载体pYES2-DEST52上,获得水稻cDNA表达文库。检测表明,所构建的cDNA文库能达到后续试验要求。使用重金属镉敏感酵母突变株ycf1Δ进行水稻中重金属镉耐受相关基因筛选,获得多个可以恢复表型的酵母单克隆。提取质粒并测序分析后可知涉及到水通道蛋白、蛋白酶抑制剂以及金属硫蛋白等不同基因,筛选所得基因即为水稻应答重金属镉胁迫的候选基因。

冬瓜抗氧化基因的克隆及其在非生物胁迫下的表达分析

【目的】鉴定、克隆冬瓜BhiOXR基因,明确其在非生物胁迫下的表达特征,为深入研究冬瓜BhiOXR基因的功能奠定基础。【方法】从冬瓜基因组鉴定BhiOXR基因家族成员,设计扩增BhiOXR基因CDS的全长引物,通过RT-PCR克隆BhiOXR基因。以低温(4℃)、高温(40℃)、盐胁迫(150 mmol/L NaCl溶液)和干旱胁迫(10%PEG6000溶液)处理冬瓜高代自交系B227幼苗,利用qRT-PCR技术分析冬瓜BhiOXR基因分别在上述4种非生物胁迫处理下(处理0、4、8、12、24 h)的表达特征。【结果】鉴定到6个冬瓜BhiOXR成员,并进行全长基因克隆和生物信息学分析。qRT-PCR分析结果表明,BhiOXR1响应低温、高温和干旱胁迫,不响应盐胁迫;BhiOXR2a、BhiOXR2b和BhiOXR4响应低温、盐和干旱胁迫,不响应高温胁迫;BhiOXR3和BhiOXR5响应低温、高温和盐胁迫,不响应干旱胁迫。【结论】明确了冬瓜BhiOXR基因受低温、高温、盐和干旱等非生物胁迫诱导表达,并且不同BhiOXR基因响应的非生物胁迫有差异,由此推测6个BhiOXR成员可能在抵御不同非生物胁迫过程中所表现的抗氧化作用不尽相同,为进一步探究冬瓜BhiOXR基因的生物学功能奠定基础。

拟南芥染色质重塑因子AtBRM和AtSWI3C基因的克隆及生物信息学分析

非生物逆境如盐渍、干旱等严重影响植物的生长发育,越来越多的证据表明染色质重塑参与植物响应逆境胁迫,并在该过程中起到重要作用。研究逆境胁迫下植物体内的染色质重塑因子基因表达及信号传导网络调控机制对于阐明植物的逆境响应反应及培育耐逆性作物具有重要的理论和现实意义。对拟南芥SWI/SNF染色质重塑复合体亚基AtBRAHMA(AtBRM)和AtSWI3C进行初步研究发现,AtBRM和AtSWI3C均含有核定位信号,AtBRM蛋白具有SNF2_N结构域,为ATPase亚基;同时,AtBRM还含有维持蛋白与组蛋白相互作用的BROMO结构域和维持蛋白蛋白间作用的QLQ结构域,而AtSWI3C则含有与DNAbinding的相关结构域;二者的启动子区域均包含与ABA调控和非生物逆境胁迫相关的顺式作用元件。

番茄组蛋白去乙酰化酶HD2家族生物信息学及表达模式分析

在生物信息学分析和克隆番茄组蛋白去乙酰化酶HD2亚家族的基础上,探究了HD2家族在番茄果实发育阶段的表达模式。结果显示,番茄HD2家族有3个成员,其氨基酸序N端具有典型的MEFWG五肽基序,中部为疏水结构域分隔开的两段富含酸性氨基酸的结构域,C端的序列呈多样性,并且具有C2H2型锌指结构;亚细胞定位预测发现该家族成员均定位于细胞核,这与其参与组蛋白修饰功能相一致。表达模式结果显示,HD2基因家族在果实发育阶段中具有阶段特异性,推测其在调控番茄的果实发育方面有重要作用。

拟南芥AtMSI1蛋白与组蛋白去乙酰化酶AtHDA6的相互作用分析

表观遗传修饰是真核生物基因转录调控的重要方式,在拟南芥生长发育过程中起着重要的作用。其中,PRC2(Poly-comb Repressive Complex 2)蛋白复合体和组蛋白脱乙酰化酶HDAC均为重要的表观遗传调控蛋白。本研究利用酵母双杂交系统证明了拟南芥PRC2蛋白复合体成员中的AtMSI1(Multi-Copy Suppressor of IRA1)蛋白和组蛋白脱乙酰化酶AtHDA6(Histone Deacetylase 6)蛋白间的相互作用,且确定其作用位点为AtMSI1蛋白的N端(1~114 aa)和C端(404~424 aa)的非特异性位点与AtHDA6蛋白的HD保守结构域(27~332 aa)和N端非保守的结构域(1~26 aa)。本研究构建AtMSI1-YC和AtHDA6-YN融合蛋白表达载体,共同转化拟南芥原生质体,用双分子荧光互补(BiFC)技术验证了AtMSI1-YC和AtHDA6-YN蛋白间的相互作用,并明确该相互作用的位点为细胞核。另外,pull-down试验再次证明了该相互作用的存在,原核表达并纯化的AtMSI1-GST融合蛋白可以与AtHDA6-His重组蛋白发生体外结合。综上所述,拟南芥AtMSI1与AtHDA6蛋白间存在相互作用,且每个蛋白中均有2个特异性结合位点参与该相互作用。

节瓜CqCHP1的低温响应分析及互作蛋白的筛选与验证

以‘粤广节瓜’为材料,克隆得到基因CqCHP1(编码富含半胱氨酸和组氨酸C1结构域)。CqCHP1的开放阅读框为816 bp,编码271个氨基酸残基,蛋白二级结构主要由无规则卷曲构成,含23个丝氨酸磷酸化位点。进化树与氨基酸序列比对分析发现CqCHP1和黄瓜Csa_4G297435同源性最高。qRT-PCR分析表明,CqCHP1在节瓜不同组织中均有表达,并受低温显著诱导;苗期和结果期时,CqCHP1在耐冷材料AW66中的表达量显著高于冷敏材料AW9,但在营养生长期和开花期冷敏材料AW9的表达显著高于耐冷材料AW66。亚细胞定位结果显示该蛋白定位于细胞核中。利用酵母文库进行互作蛋白筛选发现CqCHP1可以与bHLH92在细胞核中互作,且双分子荧光互补实验和荧光素酶互补实验验证了其互作的准确性。

节瓜新品种‘粤广’

‘粤广’为杂交一代早熟高产短圆筒类型节瓜新品种。生长势强,早熟,坐果能力较强。瓜长约15.0 cm,横径约6.0 cm,肉厚约1.4 cm。肉质嫩滑致密,单瓜质量400 g左右。适应性广,抗逆性强,适宜华南地区春、秋栽培。平均产量可达76 t·hm^(-2)。

勇立潮头舞劲风——记华宇货运公司董事长、总经理、党委书记王振华

一个人，自砸“饭碗”，带着一群下岗职工走出家门外出创业，仅用5年的时间就成为同行业的佼佼者，不能不说是个奇迹；一个人，从零起步，5年里能使资产以年近2000万元的速度增值，产值以年均5000万元的速度增长，不能不说是个奇迹——这个奇迹的创造者，就是佳木斯市华宇货运有限，厶＼司董事长、总经理、党委书记王振华。