SIRT1在TNF-α介导的肠上皮屏障破坏中的作用及机制研究

目的观察沉默信息调节因子1(SIRT1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导的肠上皮Caco-2细胞屏障功能破坏的影响并探讨其分子机制。方法将Caco-2细胞分3组处理:对照组、TNF-α100ng/mL 24h处理组(TNF-α组)及TNF-α100ng/mL24h处理+白芦藜醇(Resveratrol)40μm预处理12h组(TNF-α+Res组)。分别检测跨上皮电阻(TER)、SIRT1及紧密连接蛋白:ZO-1、occludin的蛋白表达。结果对照组、TNF-α组、TNF-α+Res组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.81±0.02、0.43±0.04、0.60±0.03。3组的TER分别为(154.00±5.00)、(97.00±4.00)、(128.00±6.00)Ohm/cm2。TNF-α组SIRT1的蛋白表达较对照组下降47.00%,TER降低37.00%,经白芦藜醇预处理使TER较TNF-α组升高32.00%。对照组、TNF-α组、TNF-α+Res组的ZO-1和occludin蛋白相对表达量分别为0.62±0.06和0.57±0.03、0.23±0.05和0.33±0.04、0.41±0.03和0.50±0.02。TNF-α处理后紧密连接蛋白ZO-1、occludin表达显著降低(P<0.05),而白芦藜醇预处理可缓解该现象,蛋白表达较TNF-α组分别升高78.00%、51.00%(P<0.05)。结论 TNF-α处理条件下SIRT1水平降低,而升高SIRT1水平可增加肠道紧密连接蛋白ZO-1、occludin蛋白水平的表达,从而减轻TNF-α对Caco-2细胞构成的上皮屏障功能的损伤。

企业思想政治工作必须走创新之路

创新是新形势下加强和改进企业思想政治工作的客观要求,转变观念、创新机制、加强领导是思想政治工作创新的主要保障;深入开创思想政治工作创新实践活动是推动企业思政工作创新的有效途径。

基层公司做好保险消费者权益保护工作浅谈

加强保险公司透明度,保障保险消费者的知情权。建立标准、规范、高效的理赔机制,保障保险消费者的保险理赔索赔权。建立制度,强化问责,严厉查处,保障保险消费者的公平交易权。才能保护保险消费者合法权益,促进保险业平稳持续健康发展。

静脉移植骨髓间充质干细胞促进脊髓损伤后GDNF基因的表达

[目的]探讨经静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响。[方法]MSCs提取自成年Wistar大鼠的股骨干骨髓,经原代培养、鉴定及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)核标记。以改良Allen′s打击装置制作大鼠T10节段脊髓损伤(SCl)模型,于伤后立即缝合切口并经尾静脉注射移植MSCs。实验共分为3组MSCs尾静脉移植组(A组)、生理盐水注射组(B组)、正常对照组(C组)。术后不同时间点应用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)观察MSCs移植后的存活状态以及不同时间点GDNF基因的表达变化。[结果]免疫组化结果MSCs经尾静脉移植后在损伤脊髓平面可以检测到迁移及存活,标记细胞呈棕黄色的核标记,以损伤区域为多并向周围迁移,移植术后第14d,A组Brdu阳性细胞较多,最远于距离损伤区2.5cm处可检测到。B及C组则均未检测到阳性细胞。RT-PCR结果移植术后第1、3、5d,A组表达量呈逐渐升高趋势,B组呈一过性表达升高,C组无变化。各时间点A组GDNFmRNA的表达量明显高于B组,P<0.05。免疫组化结果移植术后第7、14、28dGDNF的表达量明显高于B组,P<0.05。[结论]骨髓间充质干细胞经尾静脉移植后可迁移至脊髓损伤区域,并上调胶质细胞源性神经营养因子基因的表达,是该移植方式修复大鼠脊髓损伤的机制之一。

IL-18通过下调KLF4阻碍杯状细胞发育加剧小鼠溃疡性结肠炎

目的:观察白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulphate,DSS)溶液诱导的小鼠结肠炎中肠黏膜屏障功能的作用及机制。方法:将成年雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、DSS组(每天给予DSS喂养,连续7 d)、DSS+IL-18组(给予DSS喂养连续7 d,同时给予腹腔注射1μg IL-18),每天测量小鼠体质量变化,7 d后HE染色检测肠黏膜损伤情况、肠道杯状细胞数量、q PCR及Western blot检测IL-18和Kruppel样转录因子-4(Kruppel-like factors-4,KLF4)的变化。结果:与正常对照组相比,DSS组小鼠体质量明显减轻(P=0.000),肠黏膜损伤,绒毛高度降低,结构紊乱,空泡状杯状细胞数量减少(对照组:43.600±7.092,DSS组:16.000±6.205,P=0.000),IL-18蛋白表达增加(对照组:0.444±0.073;DSS组:0.649±0.062,P=0.006),同时参与杯状细胞分化成熟的KLF4表达减少(对照组:0.934±0.053;DSS组:0.777±0.081,P=0.018)。与DSS组相比,DSS+IL-18组小鼠体质量减轻更加明显(P=0.000),肠黏膜损伤及杯状细胞数量减少加剧(DSS+IL-18组:3.200±2.863,P=0.004),IL-18表达明显增加(0.903±0.037,P=0.002),KLF4表达减少(0.469±0.037,P=0.001)。结论:IL-18加剧小鼠肠黏膜屏障损伤的作用,可能是通过下调生长因子KLF4的表达,阻碍杯状细胞的分化成熟发挥作用。

骨与软组织肉瘤患者检测循环肿瘤细胞及HOXB7基因表达的临床意义

目的探讨骨与软组织肉瘤患者外周血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)的数量、类型以及循环肿瘤细胞上同源盒基因B7(homeobox genes B7,HOXB7)表达的临床意义。方法回顾性分析本院2017年5月至2019年7月经病理确诊的骨与软组织肉瘤患者40例,患者确诊后均采用CanPatrolTM富集技术检测循环肿瘤细胞,采用多重mRNA原位分析对循环肿瘤细胞进行分型鉴定,并使用RNA探针检测循环肿瘤细胞上HOXB7基因的表达情况。结合临床资料,分析CTC计数、类型及HOXB7基因表达与骨与软组织肿瘤的分期及转移之间的关系。结果40例患者中有37例在治疗前检测出CTC细胞,检测出的CTC分为上皮型、混合型和间质型。CTC计数与骨与软组织肉瘤的分期密切相关(P=0.002),EnneckingⅢ期患者外周血CTC计数明显多于EnneckingⅡ期(P=0.040);EnneckingⅢ期患者间质型CTC的计数也显著高于EnneckingⅡ期(P=0.001)。HOXB7在EnneckingⅢ期患者CTC中的阳性表达率为56.9%,显著高于其他分期(P=0.003)。对骨肉瘤进行亚组分析,EnneckingⅢ期患者CTC中HOXB7表达的阳性率显著高于EnneckingⅡ期(P=0.025)。结论骨与软组织肉瘤患者外周血循环肿瘤细胞细胞计数、分型及HOXB7基因的表达与肿瘤分期、转移密切相关。

组配型假体置换治疗肢体骨肿瘤

目的评价组配型假体置换治疗肢体骨肿瘤的疗效。方法 对38例肢体骨肿瘤行瘤段切除、组配型假体置换术。术后6个月采用肌肉骨骼肿瘤学会93(MSTS93)评分进行功能评价。结果 患者均获得随访,时间11~37个月。无感染、假体松动、假体脱位、假体周围骨折等并发症发生。术后6个月,患者MSTS93评分为24.57分±3.53分,肢体功能优28例,良7例,可3例,优良率为92.1%。结论 组配型假体置换是治疗肢体骨肿瘤的有效方法,术后关节功能恢复好。

核转录因子-κB与缺氧诱导因子-1的相互调节及其临床意义

缺氧诱导因子（HIF－1）是细胞在低氧条件下产生的具有转录活性的核蛋白，是机体维持氧自稳平衡的核心调控因子，调控一系列缺氧反应基因的表达。

沉默信息调节因子1对缺氧条件下肠上皮屏障功能的保护作用及机制

目的观察沉默信息调节因子1（SIRT1）对肠缺氧上皮Caco-2细胞屏障功能的影响并探讨其分子机制。方法对Caco-2细胞分别进行1％O2浓度缺氧6h（缺氧组）和常规处理（常规组）及加浓度为40μmol／L Resveratrol（SIRT1激动剂）预处理6h后再缺氧6h（观察组），分别检测3组肠上皮细胞跨上皮电阻（TER），PCR及Western blot分别检测3组SIRT1及紧密连接蛋白ZO—1、Occludin和Claudin-1的mRNA与蛋白表达。结果缺氧组SIRT1mRNA及其蛋白的相对表达量均明显低于常规组（分别为0．40±0．02比0．70＋0．07，P=0．001；0．37±0．03比0．76±0．03，P=0．001），也明显低于观察组（0．50±0．02，P=0．026；0．54±0．02，P=0．011）。缺氧组3种紧密连接蛋白mRNA表达均低于常规组（P〈0．05），也低于观察组（P〈0．05），观察组的ZO-1及Claudin-1表达与常规组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。3种紧密连接蛋白的表达水平常规组最高，观察组次之，缺氧组最低，两两比较，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。常规组、缺氧组和观察组的TER分别为（142±7）Ohm／cm^2、（94±3）Ohm／cm^2和（119±7）Ohm／cm^2；两两比较，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。结论缺氧条件下SIRT1水平降低，而SIRT1的激活可通过增加肠道紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1mRNA与蛋白的表达，从而减轻缺氧对肠上皮屏障功能的损伤。

肾上腺髓质素对小鼠肠缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨肾上腺髓质素（AM）在肠缺血再灌注损伤（I／R）中对肠黏膜屏障功能的影响及机制。方法将21只C57小鼠随机分为3组：（1）Sham组；（2）I／R组；（3）I／R＋AM组。采用夹闭肠系膜L动脉30min、再灌注6h作为制备肠缺血再灌注损伤模型的方法。用苏木素-伊红（HE）染色的方法观察肠黏膜的损伤；测定小肠肠黏膜的跨上皮电阻（TER）；检测紧密连接蛋nZO-1和Claudin-1蛋白水平的变化以及信号分子727位丝氨酸磷酸化的信号转导与转录激活子1[p-STAT1（S727）]在各组中的激活。结果HE染色结果显示肠I／R引起部分小肠绒毛上皮脱落，经AM预处理使得小肠绒毛重新排列整齐，显著缓解肠I／R所致的形态结构破坏。肠I／R引起ZO-1和Claudin-1的蛋白表达水平较Sham组分别下降38．54％及42．98％，并引起TER降低44．57％；经AM预处理使得ZO-1和Claudin—1的蛋白的表达较I／R组显著升高（分别为31．33％、33．92％），同时TER值较肠I／R组升高25．97％，并且使得肠I／R所致的p-STAT1（S727）激活被显著抑制（较I／R组降低56．52％）。结论AM对小鼠肠I／R损伤后肠黏膜屏障具有较好的保护作用，并且可以调控肠道紧密连接蛋白的表达，进而影响肠道通透性的改变，其机制可能与抑制p-STAT1（S727）的激活有关。

白细胞介素-22对缺氧条件下肠上皮屏障的保护作用及其机制

目的观察白细胞介素-22（IL-22）对缺氧肠上皮T84细胞屏障功能的影响，探讨其分子机制。方法对T84细胞进行2％02缺氧6h（Hx组）及100μg／L重组IL-22（Hx＋rlL-22）处理，分别检测跨上皮电阻（TER），IL-22受体A1（IL-22RAl）及紧密连接蛋白：ZO-1、Occludin、Claudin-1及Claudin-4的mRNA与蛋白表达。结果缺氧引起IL-22RAl的mRNA及蛋白表达较常氧分别下降30．0％及63．0％，并引起TER降低54．7％，经rlL-22预处理使得TER较Hx升高43．8％。缺氧处理使ZO．1、Occludin、Claudin．1及Claudin-4表达明显降低，而rlL-22预处理则可缓解该现象（mRNA及蛋白表达较Hx组分别升高：44．3％、36．4％、77．6％、61．2％及109．3％、77，6％、153．3％、79．6％，P〈0．01）。结论IL-22与其受体作用后可以维持肠屏障功能，稳定渗透性，调控紧密连接蛋白的表达。

去乙酰化酶Sirt3沉默对缺氧条件下肠上皮Caco-2细胞缺氧诱导因子-1α表达的影响及其对肠上皮屏障功能的作用

目的 采用RNA干扰（RNAi）技术,使去乙酰化酶Sirt3基因表达下调或缺失,观察其下调或缺失后对缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响及其对肠屏障功能的作用.方法 体外培养Caco-2细胞,分别检测跨上皮电阻（TER）,常氧和低氧（1％O2）条件下Sirt3-小干扰RNA（siRNA）转染前后HIF-1α和紧密连接蛋白：ZO-1、Occludin、Claudin-1的mRNA与蛋白表达.结果 常氧与低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Sirt3的蛋白表达分别下降52％、35％;HIF-1α的蛋白表达（0.72±0.01、0.93 ±0.01）比转染前（0.38 ±0.01、0.81±0.03）明显升高（P＜0.01）;低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Occludin、Claudin-1、ZO-1的蛋白（0.71 ±0.03、0.69±0.01、0.72±0.02）和mRNA （0.80±0.01、0.84±0.01、0.88 0.03）表达比转染前明显降低（P＜0.01）;低氧条件下,经Sirt3-siRNA转染后TER下降30.8％.结论 缺氧条件下,Sirt3可以调控HIF-1α的表达.沉默Sirt3后紧密连接蛋白表达降低,从而影响肠屏障功能.