滇黄精腐皮镰刀菌的分离鉴定

采用组织分离法对滇黄精(Polygonatum kingianum)病害样品进行病原菌分离,进一步通过柯赫氏法则进行验证并通过形态学观察和ITS序列分析方法鉴定该病原菌。结果表明,病原菌菌株的菌丝为白色,背面淡黄色,菌丝体呈絮状、贴基生长、生长茂盛;病原菌菌株的分生孢子有两种形态,大型分生孢子呈镰刀形或柱形,小型分生孢子呈卵形或肾形;从菌株的形态学、致病性测定和ITS序列分析初步鉴定该菌为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)。

滇重楼辣椒轻斑驳病毒分离物的鉴定及全基因组序列分析

滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)是多年生草本植物,其药用部位为地下根茎,是一种重要的中药材。为明确侵染滇重楼的病毒病原,对采自云南省曲靖市的滇重楼进行透射电镜观察、DASELISA和RT-PCR技术检测。在透射电镜下观察到杆状病毒粒子,大小为(200~300)nm×(20~36)nm。对采集到的7份病样进行DAS-ELISA检测,结果表明,其中5份病样呈阳性。通过RT-PCR技术扩增、克隆获得1个全长为6357 bp的曲靖分离物PMMoV-QJ的全基因组序列。将PMMoV-QJ的全基因组序列与国内外已经报道的10个PMMoV分离物进行同源性分析比对,其同源性为99.42%~99.81%。基于全基因序列的系统发育分析表明,PMMoV-QJ与韩国分离物亲缘关系密切。本研究明确了该分离物的亲缘关系,从分子水平鉴定该分离物,为后续滇重楼病毒病的预防提供理论依据。

白及植株上一种真菌病害的分离与鉴定

【目的】为明确引起白及叶片产生黑褐色轮纹状干枯的病原菌。【方法】将采自云南省富宁县的该病害样品进行分离纯化,并通过初步形态学鉴定;进一步通过柯赫氏法则再次验证分离得到的菌株是否能引起白及发病;通过形态学观察和r DNA-ITS序列分析的方法鉴定该菌。【结果】该菌株能引起白及发病,并最终鉴定出该菌为黑轮层炭壳(Daldinia sp),菌株编号BJ-HLCTK。显微结构观察结果:中间黑褐色,边缘灰白色,同心轮纹,贴基生长,气生菌丝生长较慢,菌丝呈绒毛状;菌丝有隔膜,具分枝,宽9~20μm,平均宽13μm。孢子不等边椭圆形或肾脏形,11~16(17.8)μm×6~9(10.2)μm。ITS序列与黑轮层炭壳菌(Daldinia consentrica)同源性最高,相似度达97.1%。【结论】菌株BJ-HLCTK属于炭球菌属(Daldinia sp.),与该属真菌黑轮层炭壳种(D.consentrica)最为接近。该菌主要危害多种阔叶树种,被害木质部形成杂斑腐朽。本研究首次报道该病原菌自然侵染白及。

侵染滇黄精的菜豆普通花叶病毒的检测与鉴定

滇黄精作为一种重要的中药材,应用领域广泛。随着其市场需求量的增加,野生滇黄精已较为稀少,因而人工种植产业得到发展,但大面积的单一种植导致滇黄精病害发生较为严重。目前对于滇黄精真菌病(如叶斑病、炭疽病、黑斑病等)的研究较多,但尚未有其病毒病的报道。为了明确侵染滇黄精并引起其花叶、叶片皱缩症状的病毒病原,对采集于云南文山的滇黄精病样采用透射电子显微镜观察以及双抗体夹心酶联免疫吸附法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)、反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术检测。对侵染症状明显的滇黄精病叶进行病毒粒子提纯,在电子显微镜下可观察到线状病毒粒子,大小为(670～760) nm×(9～12) nm。通过DAS-ELISA检测出3份滇黄精病样(DHJ1、DHJ2、DHJ3)汁液与菜豆普通花叶病毒(Bean common mosaic virus,BCMV)抗体呈强阳性反应。随后提取DAS-ELISA检测呈阳性的DHJ1病样的总RNA,利用马铃薯Y病毒科特异性简并引物(Sprimer/M4T)进行RT-PCR扩增,并对扩增产物进行测序分析。结果表明,所得序列长为1 609 bp,其中包含588 bp的部分核内含体蛋白b基因(NIb)、864 bp的完整外壳蛋白(coat protein,CP)基因和157 bp的3′端非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)。而同源性分析显示该序列与马铃薯Y病毒科(Potyviridae)马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的BCMV大豆分离物(KJ807813)的核苷酸序列和CP氨基酸序列的同源性分别高达99%和100%,与BCMV花生分离物(HM776124)的同源性分别为97%和99%。基于CP氨基酸序列的系统发育分析表明,该病毒与已报道的BCMV中国大豆分离物(KJ807813)、花生分离物(HM776124)亲缘关系最近,聚类为一簇。这是首次报道病毒侵染黄精属植物,将其命名为菜豆普通花叶病毒滇黄精分离物(BCMV-DHJ1),表明菜豆普通花叶病毒能自然侵染滇黄精。

雪胆内生真菌的分离与鉴定研究

目的:对雪胆的内生真菌进行分离鉴定,为进一步研究雪胆内生真菌功能提供依据。方法:采用组织分离法从雪胆茎段、叶片和块茎中分离纯化内生真菌,利用形态学方法和分子鉴定对分离得到的内生真菌进行鉴定。结果:从雪胆茎、叶和块茎中共分离纯化了10株内生真菌,经初步鉴定,分别为2株Trichocladium brosimi,2株尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum,1株九州镰刀菌Fusarium kyushuense,1株太瑞斯梭壳孢霉Thielavia terrestris,1株桔青霉Penicillium citrinum,1株Cladosporium parahalotolerans;1株团网菌属真菌,1株炭角菌属真菌。结论:本研究初步探究了雪胆的内生真菌,为进一步研究药用植物真菌资源提供了实验依据。

金毛狗脊内生细菌分离鉴定及其拮抗作用分析

为分离药用珍稀植物金毛狗脊内生细菌,筛选出对滇黄精上分离到的胶孢炭疽菌和腐皮镰刀菌病菌抑制效果明显的菌株。采用平板对峙法筛选拮抗菌株,通过生理生化反应及16S rDNA序列分析,结合伯杰氏细菌鉴定手册,鉴定具有明显抑菌效果的菌株。结果表明:从金毛狗脊中分离获得31株内生细菌,菌株JMGJ01对胶孢炭疽菌和腐皮镰刀菌病菌有明显的拮抗作用,鉴定出JMGJ01菌株属于类芽孢杆菌属。

紫荆属种间杂交胚拯救研究

为克服紫荆属(Cercis Linn.)种间杂交种子后期发育障碍,提高杂交后代成活率,缩短育种周期,本实验以紫荆属的湖北紫荆和紫荆杂交的未成熟胚为外植体材料,研究不同消毒方式、不同胚龄对杂交胚萌发的影响以及筛选最适诱导、增殖及生根培养基。结果表明:消毒方式用体积分数为0.1%的HgCl2溶液处理5 min的效果最佳;存活率为76.67%。在授粉后120 d时采样,胚的萌发率(66.3%)最高。胚拯救最适宜的诱导培养基:MS+3.0 mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA+0.05 mg·L^(-1)GA+150 mg·L^(-1)AC,诱导率为95%;最佳增殖培养基:MS+1.5 mg·L^(-1)KT+1.5 mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA+150 mg·L^(-1)AC,增殖系数为4.79;最佳生根培养基:1/2MS+0.5 mg·L^(-1)NAA+0.1 mg·L^(-1)VH+150 mg·L^(-1)AC,生根率为81.67%。下地炼苗后的移栽成活率为87.53%。本实验旨在建立有效的胚拯救体系,为提高紫荆属种间远缘杂交成功率提供有效技术,同时为紫荆属种间杂交育种提供新的种质资源。