胃癌细胞NF-κB和survivin的表达对TRAIL抗瘤作用的影响

目的 探讨胃癌细胞NF κB和survivin的表达对TRAIL抗瘤作用的影响。方法 应用细胞培养和流式细胞仪检测的方法 ,观察胃癌细胞SGC 790 1、MKN2 8、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞凋亡率 ,Westernblot方法分析四种胃癌细胞中NF κB和survivin的表达。结果 TRAIL3 0 0ng ml作用于胃癌细胞 2 4h后 ,胃癌细胞MKN2 8、MKN45、AGS和SGC 790 1的凋亡率分别为 3 6 0 5 %、2 0 2 7%、16 5 0 %和 11 80 %。Westernblot结果显示SGC 790 1细胞NF κB、survivin的表达均高于MKN2 8细胞的表达。结论 TRAIL具有选择性诱导肿瘤细胞凋亡的特性 ,肿瘤细胞对TRAIL的耐药现象 ,可能与凋亡抑制因子survivin和NF κB的表达有关。

胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响

目的 探讨胃癌细胞bcl 2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响。方法 应用细胞培养、PI染色、流式细胞仪检测的方法 ,观察胃癌细胞SGC 790 1、MKN2 8、AGS、MKN4 5经TRAIL作用后细胞周期及细胞凋亡率 ,westernblot方法分析 4种胃癌细胞中bcl 2和Caspase3的表达。 结果 TRAIL30 0ng/ml作用于胃癌细胞 2 4h后 ,胃癌细胞MKN2 8、MKN4 5、AGS和SGC 790 1的凋亡率分别为 36 .0 5 %、2 0 .2 7%、16 .5 0 %和 11.80 %。Westernblot结果显示MKN2 8细胞Caspase3的表达高于其它细胞 ,而bcl 2的表达在各细胞间并无明显差别。结论 胃癌细胞对TRAIL的敏感性与Caspase3的高表达有关 ,而与bcl 2的表达无关。

α-生育酚对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响及机制

目的研究α生育酚对TRAIL凋亡诱导作用的影响及机制。方法采用碘化丙啶(PI)染色和流式细胞仪检测胃癌细胞SGC7901和MKN28的细胞周期及凋亡率;Westernblot检测凋亡相关基因NFκB、bcl2和survivin的表达。结果单用TRAIL300ng/ml作用24h,胃癌细胞SGC7901和MKN28的凋亡率分别为11.80%和36.05%;单用α生育酚60μmol/L作用24h,SGC7901和MKN28细胞的凋亡率分别为8.5%和9.0%。α生育酚60μmol/L与TRAIL300ng/ml联用24h后,SGC7901和MKN28细胞的凋亡率分别升高至48.1%和63.7%。Westernblot显示TRAIL可使SGC7901和MKN28细胞survivin及NFκB表达下调,但对bcl2的表达无影响;α生育酚对bcl2和survivin的表达无明显影响;TRAIL与α生育酚联用可使细胞中NFκB、survivin和bcl2的表达均明显下调。结论α生育酚可增强TRAIL对胃癌细胞的凋亡诱导能力,其机制可能与survivin、NFκB和bcl2的表达下调有关。

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达

背景:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能诱导30余种人类肿瘤细胞凋亡,在抗肿瘤治疗中具有广阔应用前景。目的:构建携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,鉴定其在肝癌细胞株中的表达。方法:以重叠延伸聚合酶链反应(PCR)扩增白细胞介素(IL)-2信号肽和TRAIL膜外区融合片段,克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,转化含复制缺陷型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌pAdBJ5183,经细菌内同源重组产生重组腺病毒Ad-IL-2-TRAIL,以脂质体法转染HEK293细胞包装病毒,感染肝癌细胞株HepG2,荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达。结果:成功构建了携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。病毒感染HepG2细胞48h后,超过95%的细胞中出现绿色荧光。结论:所构建的复制缺陷型重组腺病毒Ad-IL-2-TRAIL可在肝癌细胞中高效表达可溶性TRAIL,为进一步行肿瘤TRAIL基因治疗提供了实验依据。

抗KDRscFv复制缺陷型腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建抗KDRscFv复制缺陷型腺病毒载体,为抗KDRscFv抗肿瘤血管生成的体内应用打下实验基础。方法采用重叠延伸PCR方法构建IL-2信号肽及抗KDRscFv融合基因,克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,转染含pAdEasy-1的BJ5183细菌,经细菌内同源重组产生携带抗KDRscFv基因(含信号肽)的重组腺病毒载体pAd-抗KDRscFv,经脂质体法转染293细胞,包装产生携带抗KDRscFv基因的重组腺病毒Ad-抗KDRscFv。结果构建了表达抗KDRscFv基因的复制缺陷型腺病毒,且该重组腺病毒能在肝癌细胞株HepG2中高效表达。结论成功构建表达抗KDRscFv基因的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究抗KDR-scFv在肿瘤治疗中的作用研究提供实验基础。

5-Aza-CdR增强TRAIL对胃癌细胞的抗瘤活性与caspase-8表达的关系

目的 探讨 5 Aza CdR对凋亡诱导分子TRAIL抗胃癌细胞活性的影响。方法 采用MTT方法检测TRAIL蛋白的抗癌活性 ;采用RT PCR方法检测caspase 8mRNA的表达。结果 TRAIL 2 0 0ng/ml作用 72h对SGc 790 1、Kato 3和AGS胃癌细胞的生长抑制率分别为 9 83 %、11 94%和 4 0 4% ;经 5 Aza CdR处理后 ,对 3株胃癌细胞的抑制率分别提高到3 8 98%、5 2 42 %和 3 0 72 % ;用 5 Aza CdR处理后 3株胃癌细胞caspase 8mRNA表达明显增加。结论 5 Aza CdR能增强胃癌细胞对TRAIL的敏感性 ,其机制可能与caspase 8的表达上调有关。

TRAIL与5-Fu合用对结肠癌细胞系SW480杀伤作用的研究

目的 观察TRAIL与 5 Fu联合应用对结肠癌SW 480细胞的作用。方法 采用MTT法检测TRAIL与 5 Fu联合应用对结肠癌SW 480细胞存活分数的影响 ;TUNEL法检测TRAIL与 5 Fu联合应用对结肠癌SW 480细胞凋亡率的影响。结果 MTT法证实 3 0～ 3 0 0ng ml的TRAIL与 3 0mmol L 5 Fu联合应用对结肠癌SW 480细胞存活分数的影响有协同作用 ,TUNEL法表明 3 0mmol L 5 Fu可显著增强TRAIL诱导结肠癌SW 480细胞凋亡的作用。结论 5 Fu可提高结肠癌SW 480细胞对TRAIL的敏感性。

TRAIL对结肠癌细胞株SW480的细胞毒作用

目的:观察TRAIL对结肠癌细胞株SW480的细胞毒作用.方法:采用MTT法检测TRAIL对结肠癌SW480细胞存活分数的影响;TUNEL法检测TRAIL对结肠癌SW480细胞凋亡率的影响.结果:TRAIL能有效地杀伤结肠癌SW480细胞,MTT法显示1000μg/L的TRAIL作用24hSW480细胞存活分数仅为18.7%.TUNEL法均显示0,50,150,500,1500,5000μg/LTRAIL蛋白诱导结肠癌SW480细胞的凋亡率分别为6.7%,29.4%,42.8%,50.8%,84.6%和87.4%;500μg/LTRAIL蛋白于0,6,12,18,24和30h诱导结肠癌SW480细胞的凋亡率分别为7.8%,21.4%,41.8%,60.6%,73.8%和77.3%.TRAIL对结肠癌SW480细胞的作用存在较好的量效关系和时效关系.结论:TRAIL能通过诱导细胞凋亡的方式杀伤SW480细胞,有可能成为有效的抗结肠癌新药.

胃癌亚甲基四氢叶酸还原酶基因1298AC多态性与H.pylori感染的关系

目的 探讨重庆地区胃癌人群亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因 12 98AC多态性及与H .pylori感染的关系。方法 采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术 ,检测 12 2例胃癌和 10 1例正常对照的MTHFR基因 12 98AC多态性 :采用PCR和Warthin Starry银染色法检测幽门螺杆菌 (H .pylori)。结果 胃癌组 12 98AA、12 98AC和12 98CC 3种基因型频率分别为 5 9.8%、3 6.1%和 4.1% ,与对照组中 3种基因型频率 5 7.4%、3 7.6%和 5 .0 %相比无显著差异 (P >0 0 5 )。以 12 98AA基因型的OR为 1.0 0 ,胃窦癌AC基因型的OR为 0 .87( 95 %CI,0 .42～ 1.82 ) ,CC基因型的OR为0 .41( 95 %CI ,0 .0 5～ 3 .72 )。胃癌MTHFR 12 98AC 3种基因型中H .pylori的检出率无明显差别 (P >0 0 5 )。结论 重庆地区人群中MTHFR 12 98AC多态性可能是胃窦癌的保护因素 ,MTHFR 12 98AC多态性与H .pylori感染无关。

TRAIL诱导肝癌细胞系SMMC-7721的凋亡作用

目的:观察TRAIL诱导肝癌SMMC—7721细胞凋亡的作用.方法:采用MTT法检测细胞存活分数;TUNEL法检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;电镜观察凋亡细胞超微结构.结果:TRAIL对SMMC-7721细胞的存活分数和凋亡率的影响呈典型的量效关系,经TRAIL作用后的细胞,流式细胞仪检测呈标准的亚二倍峰,电镜观察发现经TRAIL作用的部分细胞具有凋亡细胞的典型形态特征.结论:TRAIL可诱导SMMC—7721细胞凋亡.

胃癌细胞对TRAIL的敏感性与caspase-8基因甲基化状态的关系

目的 探讨caspase 8基因启动子区 5′CpG岛甲基化状态与TRAIL抗癌作用的关系。方法 采用甲基化特异PCR方法检测 5种胃癌细胞株caspase 8基因启动子区的甲基化状态 ;采用MTT方法检测TRAIL蛋白的抗癌活性。结果 5种胃癌细胞株对TRAIL的敏感性不尽相同 ,caspase 8基因启动子区均为非甲基化状态 ;5 Aza CdR处理可提高耐药细胞对TRAIL的敏感性 ,但不影响胃癌细胞的甲基化状态。结论 5 Aza CdR可提高多数胃癌细胞对TRAIL的敏感性 ,胃癌细胞对TRAIL的敏感性与caspase

5-Aza-CdR可提高TRAIL对胃癌细胞Kato3的抗瘤活性

目的 探讨 5 Aza CdR对TRAIL抗胃癌细胞活性的影响。方法 采用MTT方法检测TRAIL的抗癌活性 ;采用RT PCR方法检测Caspase 8基因mRNA的表达。结果 未经 5 Aza CdR处理者只有 2 0 %胃癌Kato 3细胞对TRAIL敏感 ,经 5 Aza CdR处理可诱发Caspase 8mRNA的表达 ,提高Kato 3细胞对TRAIL的抗瘤敏感性。 结论 5 Aza CdR可提高TRAIL对胃癌细胞的抗瘤作用 ,其机制可能与诱发Caspase

hPOT1 RNA干扰对人胃癌细胞株BGC-823端粒长度和hTERT表达的影响

背景:人端粒保护蛋白1(hPOT1)的主要作用为保护端粒和调节端粒长度。目的:探讨hPOT1在人胃癌细胞中对端粒长度的调节作用及其可能机制。方法:以RNA干扰(RNAi)技术抑制人胃癌细胞株BGC-823中hPOT1的表达,以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞端粒长度,以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达。结果:以RNAi技术抑制hPOT1表达后,BGC-823细胞端粒长度明显缩短,反映端粒相对长度的T/S值显著小于亲本BGC-823细胞组和阴性对照组(1.383±0.091对2.758±0.647和3.043±0.548,P<0.05),亲本细胞组与阴性对照组之间则无明显差异。hPOT1 RNAi组细胞hTERT mRNA表达亦明显下调。结论:在人胃癌细胞中,hPOT1能正性调节端粒长度;在hPOT1下调引起端粒缩短的环节中,hTERT表达下降可能起一定作用。

Effects of methylation status of caspase-8 promoter on antitumor activity of TRAIL to human gastric cancer cells

Objective: To study the effects of the methylation status of caspase-8 promoter on the antitumor activity of TRAIL to the human gastric cancer cells. Methods: The methylation of caspase-8 was measured with methylation specific PCR (MSP) and the antitomor capability of TRAIL to human gastric cancer cells was determined with MTT. Results: No methylation of caspase-8 in the human gastric cancer cells was found. The sensitivity of 5 lines of gastric cancer cells to the antitumor activity of TRAIL was different. The administration of the demethylation agent 5-Aza-2′-deoxycytidine (5-Aza-CdR) increased the sensitivity of gastric cancer cells to TRAIL but did not change the methylation status of caspase-8 promoter in gastric cancer cells. Conclusion: 5-Aza-CdR increases the sensitivity of most of gastric cancer cells to TRAIL but caspase-8 is not involved in the antitumor activity of TRAIL.

凋亡相关蛋白在胃癌细胞凋亡中的作用研究

目的 研究核转录因子 (NF) κB、生存素 (survivin)、Bcl 2和Caspase3在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)诱导的胃癌细胞凋亡中的作用。方法 应用细胞培养和流式细胞仪检测的方法 ,观察胃癌细胞SGC 790 1、MKN2 8、AGS、MKN45经TRAIL作用后的细胞凋亡率 ,Westernblot方法分析 4种胃癌细胞中NF κB、生存素、Bcl 2和Caspase3的表达。结果 TRAIL 50ng/ml作用于胃癌细胞 2 4h后 ,MKN2 8、MKN 45、AGS和SGC 790 1细胞的凋亡率分别为 2 4.0 5% ,7.83 % ,8.0 5%和3 .17%。TRAIL 3 0 0ng/ml作用于胃癌细胞 2 4h后 ,MKN2 8、MKN 45、AGS和SGC 790 1细胞的凋亡率分别为 3 6.0 5% ,2 0 .2 7% ,16.50 %和 11.80 %。Westernblot结果显示 ,SGC 790 1细胞NF κB、生存素的表达高于MKN2 8细胞 (P <0 .0 5) ,与Bcl 2的表达无明显差异。MKN2 8细胞Caspase3的表达高于SGC 790 1细胞 (P <0 .0 5)。结论 TRAIL具有选择性诱导肿瘤细胞凋亡的特性 ,肿瘤细胞对TRAIL的耐药现象可能与凋亡抑制因子生存素和NF κB的表达增强以及Caspase3

肿瘤坏死因子相关配体与阿司匹林合用对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响

目的 观察肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)与阿司匹林合用对肝癌SMMC-7721细胞的作用。 方法 氨甲喋呤法检测SMMC-7721细胞存活分数;流式细胞仪检测SMMC-7721细胞的凋亡率和细胞周期;Western Blot法检测凋亡相关基因的表达。 结果 单用300 ng/ml TRAIL、3、10 mmol/L阿司匹林SMMC-7721细胞存活分数分别为82.76％、81.34％和71.29％,合用的存活分数分别为43.5％、37.8％。3、10 mmol/L阿司匹林与300 ng/ml TRAIL合用诱导的细胞凋亡率明显大于单用两药诱导的细胞凋亡率之和(单用300 ng/ml TRAIL、3 mmol/L和10 mmol/L阿司匹林凋亡率分别为21.25％、1.89％和6.08％,合用的凋亡率分别34.76％、38.56％)并使G0/G1期细胞增加;3、10 mmol/L的阿司匹林使SMMC-7721细胞Bcl-2的表达明显减弱,但对Bax的表达无影响。 结论TRAIL与阿司匹林合用对肝癌SMMC-7721细胞有明显的协同杀伤作用,其机制可能与阿司匹林抑制Bcl-2的表达有关。

胃癌亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性及其与微卫星不稳的关系

目的探讨胃癌亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与微卫星不稳的关系。方法采用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性技术检测122例胃癌和101名正常对照的MTHFR 基因C677T和A1298C多态性;采用PCR为基础的方法检测微卫星不稳定性(MSI)。结果MTHFR C677T多态性可分为677CC、677CT和677TT三种类型。胃癌组3种基因型频率分别为47.5%、39.3%和13.1%;对照组分别为48.5%、42.6%和8.9%,两组相比差异无统计学意义(P> 0.05)。以677CC基因型做为参考,胃贲门癌677CT基因型OR值为0.38,95%CI:0.15-0.98;TT 基因型OR值为0.26,95%CI:0.03-2.18;677CT+TT基因型OR值为0.36,95%CI:0.07-0.98。胃体癌677TT基因型OR值为3.03,95%CI:1.07-8.65。MTHFR A1298C多态性可分为1298AA、1298AC和1298CC 3种类型。胃癌组3种基因型频率分别为59.8%、36.1%和4.1%;对照组分别为57.4%,37.6%和5.0%,两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。以1298AA基因型的OR值为1.00,胃窦癌AC基因型的OR值为0.87,95%CI:0.42-1.82,CC基因型的OR值为0.41,95%CI: 0.05-3.72。MTHFR 677TT基因型胃癌与微卫星不稳显著相关(P<0.05),而MTHFR A1298C多态性与微卫星不稳无关(P>0.05)。结论重庆地区人群中MTHFR C677T多态性是胃贲门癌的保护因素,是胃体癌的危险因素;MTHFR A1298C多态性可能是胃窦癌的保护因素;677TT基因型胃癌的发生可能涉及到MSI途径。

反义DNA甲基转移酶1改变肝癌SMMC-7721细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性及其机理的研究

目的 观察转入反义DNA甲基转移酶 1(DNMT1)基因片段后的肝癌SMMC 772 1细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的敏感性改变 ,初步阐明其机理。方法 台盼蓝排斥实验检测活细胞率 ;TUNEL法检测细胞凋亡率 ;流式细胞仪检测bcl 2、bax和bad蛋白的表达。结果 转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞与转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞相比 ,活细胞率显著降低 (P <0 .0 5,P <0 .0 1) ,凋亡率显著增高 (P <0 .0 5,P <0 .0 1)。流式细胞仪结果显示 ,转入反义DNMT1基因片段的SMMC 772 1细胞 ,其bax和bad表达 ,尤其是bax的表达 ,明显高于转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞 ,但对bcl 2的表达无影响。结论 转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞对TRAIL的敏感性明显增强 。