非小细胞肺癌MET表达及基因改变与PD-L1表达及免疫微环境的关系

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)MET表达及基因改变与程序性死亡分子配体1(PD-L1)表达及免疫微环境的关系。方法回顾性分析2019年1月—2020年12月医院收治的112例NSCLC患者,收集病理活检或手术切除组织标本。采用免疫组织化学染色法检测MET、PD-L1表达及CD8^(+)T细胞浸润水平;采用荧光原位杂交法检测MET基因状态;并分析MET表达及基因状态与临床病理特征、PD-L1表达及CD8^(+)T细胞浸润水平关系。结果NSCLC组织MET、PD-L1阳性率显著高于癌旁组织;<65岁、腺癌、临床分期Ⅲ~Ⅳ期、EGFR突变型、淋巴转移者MET阳性率显著升高;NSCLC组织MET基因扩增率为11.61%;腺癌、淋巴转移者MET基因扩增率显著升高;MET表达及MET基因扩增与PD-L1阳性表达有关;校正影响MET表达及基因状态因素后,MET表达及MET基因扩增为影响PD-L1表达的预测因素;NSCLC原发和转移病灶CD8^(+)T细胞浸润率分别为64.29%、39.29%;MET基因扩增与CD8^(+)T细胞浸润水平有关;校正影响MET表达及基因状态因素后,MET基因扩增与CD8^(+)T细胞浸润水平独立相关。结论MET表达尤其是MET基因改变可影响NSCLC中PD-L1表达和免疫微环境,其中MET基因扩增与CD8^(+)T细胞浸润水平独立相关。

miR-577靶向Ku80调控小细胞肺癌细胞中PD-L1表面表达的机制研究

目的探讨DNA损伤引起小细胞肺癌细胞NCI-H1688中PD-L1表面表达的潜在分子机制。方法使用DNA损伤诱导剂ETP、CPT、APH处理小细胞肺癌细胞NCI-H1688后,检测细胞中PD-L1的蛋白水平和mRNA水平。通过高通量测序检测ETP、CPT、APH处理小细胞肺癌细胞NCI-H1688前后miRNA表达差异。过表达差异miRNA,检测细胞中PD-L1的mRNA水平。通过miRDB在线分析和荧光素酶报告实验寻找miRNA的靶标。结果ETP、CPT、APH诱导小细胞肺癌细胞NCI-H1688DNA损伤后,PD-L1的表达在mRNA水平和蛋白水平上均上升(P<0.05)。将ETP、CPT、APH处理小细胞肺癌细胞NCI-H1688后的高通量测序结果取交集后,共有11种基因的表达受到调控。敲低上述基因后发现,敲低Ku80时,PD-L1的表达上升(P<0.05)。过表达Ku80后,PD-L1的表达下降(P<0.05)。ETP、CPT、APH处理小细胞肺癌细胞NCI-H1688后,Ku80的mRNA水平下降(P<0.05),但是Ku80的启动子活性没有显著变化(P<0.05)。miRNA mimics过表达miRDB在线分析Ku80的潜在miRNA后,发现10种miRNA能够显著降低Ku80的表达(P<0.05)。ETP、CPT、APH处理小细胞肺癌细胞NCI-H1688后,miR-577的表达水平显著上升(P<0.05)。过表达miR-577后,Ku80的m RNA和蛋白水平均上升(P<0.05);敲低miR-577后,Ku80的mRNA和蛋白水平均下降(P<0.05)。过表达miR-577后,PD-L1的mRNA和蛋白水平均下降(P<0.05);敲低miR-577后,PD-L1的mRNA和蛋白水平均上升(P<0.05)。结论miR-577通过靶向DNA损伤应答蛋白Ku80 mRNA的3端非编码区以影响其翻译水平,最终提高了PD-L1在小细胞肺癌细胞NCI-H1688中的表达水平。

非小细胞肺癌患者癌组织及血清中circRNA的表达水平及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织及血清中环状RNA(circRNA)的表达水平及临床意义。方法收集10例NSCLC患者的病理组织标本,筛选出癌组织和癌旁组织中差异表达显著的circRNA,绘制火山图并进行聚类分析。采集46例NSCLC患者和46例健康志愿者(对照组)血清进行circRNA检测,采用ROC曲线分析血清circRNA对NSCLC的诊断价值,记录曲线下面积(AUC),分析血清circRNA表达水平与临床特征的关系。结果筛选出癌组织和癌旁组织中差异表达显著的circRNA共181个,其中117个表达上调,64个表达下调,火山图和聚类分析结果显示表达差异的circRNA可明显区分NSCLC癌组织和癌旁组织;NSCLC患者血清circRNA表达水平与性别、年龄、吸烟状态、分化程度、病理类型、临床分期均无显著相关性,差异无统计学意义(P>0.05);ROC曲线分析结果显示,血清circRNA诊断NSCLC的敏感度为80.43%,特异度为58.70%,AUC值为0.752。结论NSCLC癌组织和癌旁组织的circRNA表达存在显著差异,血清circRNA对NSCLC有较好的诊断价值,circRNA可能与疾病进展存在一定关联。

虾青素提高人胶质瘤细胞放射敏感性的效应和机制

目的探讨虾青素(ATX)提高人胶质瘤细胞(U251细胞)的放射敏感性及其作用机制。方法将对数生长期的U251细胞接种在6孔板中(1×10^(5)/每孔)并分组:未照射对照组、未照射加入5μmol/L ATX组、未照射加入20μmol/L ATX组、照射对照组、加入5μmol/L ATX并照射组、加入20μmol/L ATX并照射组。通过CCK8实验检测不同浓度ATX对细胞活力的影响,确定最佳给药浓度;通过克隆形成实验和流式细胞术检测照射后ATX对U251细胞的增殖和凋亡的影响;通过Western印迹检测照射后ATX对U251细胞凋亡通路关键蛋白表达的影响。结果未照射+5μmol/L ATX组和未照射+20μmol/L ATX组细胞存活率均明显低于未照射对照组(均P<0.05)。5μmol/L ATX+照射组和20μmol/L ATX+照射组细胞存活率均明显低于照射对照组(P<0.05);且20μmol/L ATX+照射组细胞存活率显著低于5μmol/L ATX+照射组(P<0.05)。未照射+5μmol/L ATX组与未照射对照组克隆形成能力无明显统计学差异(P>0.05);未照射+20μmol/L ATX组克隆形成能力明显低于未照射对照组(P<0.05)。5μmol/L ATX+照射组和20μmol/L ATX+照射组克隆形成能力明显低于照射对照组(均P<0.05);且20μmol/L ATX+照射组克隆形成能力明显低于5μmol/L ATX+照射组(P<0.05)。未照射对照组、未照射+5μmol/L ATX组和未照射+20μmol/L ATX组细胞凋亡率无统计学差异(均P>0.05)。5μmol/L ATX+照射组与20μmol/L ATX+照射组细胞凋亡率明显高于照射对照组(均P<0.05);且20μmol/L ATX+照射组细胞凋亡率明显高于5μmol/L ATX+照射组(P<0.05)。照射对照组B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达水平明显高于5μmol/L ATX+照射组与20μmol/L ATX+照射组,而含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase3)表达明显低于5μmol/L ATX+照射组与20μmol/L ATX+照射组(均P<0.05);且20μmol/L ATX+照射组Bcl-2、Bax表达水平明显低于5μmol/L ATX+照射组,而Caspase-3表达水平明显高于5μmol/L ATX+照射组(均P<0.05)。结论ATX能通过细胞凋亡途径提高U251细胞的放射敏感性;且随着药物剂量的增加,该放射增敏效果显著增强。

黄芪生脉饮联合阿司匹林对胸部肿瘤放疗后放射性心脏损伤的防治作用研究

目的探讨黄芪生脉饮联合西药对胸部肿瘤放疗后放射性心脏损伤(Radiation-induced heart disease,RIHD)的防治效果。方法选取2017年1月—2019年12月期间四川省德阳市人民医院肿瘤科收治的行放射治疗的胸部肿瘤患者144例,其中脱落或剔除34例,满足研究条件且顺利完成研究共110例,使用随机数字表法分为西药组和中西医组,每组各55例。西药组在放疗期间应用阿司匹林,中西医组在西药组基础上加用黄芪生脉饮。观察两组患者血清细胞因子[血清转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、内皮素(Endothelin,ET)、肌酸激酶同工酶(Creatine kinase MB,CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(Cardiac troponin I,cTnI)],心肌参数[左室后壁心肌背向散射积分(PW-IBS)、室间隔心肌背向散射积分(IVS-IBS)、左室后壁IBS及IBS周期变化幅度(PW-CVIB)、室间隔IBS及IBS周期变化幅度(IVS-CVIB)],心电图情况,比较两组RIHD发生率。结果两组患者放疗后血清TGF-β1、TNF-α、ET、CK-MB、CTnI水平均较放疗前有不同程度的升高,差异有统计学意义(P<0.05);且中西医组放疗后血清TGF-β1、TNF-α、ET、CK-MB、CTnI水平均较西医组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。放疗结束后1年内,中西医组心电图总异常率低于西医组,差异有统计学意义(P<0.05),心电图变化以ST-T改变最为多见,其次为房性期前收缩。中西医组放疗后RIHD发生率为3.64%,西医组RIHD发生率为12.73%,中西医组RIHD发生率明显低于西医组,差异有统计学意义(χ;=4.998,P<0.05)。两组患者放疗后IVS-IBS、PW-IBS、IVS-CVIB、PW-CVIB值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者放疗后血常规指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论胸部肿瘤放疗患者易发生RIHD,联合应用黄芪生脉饮和阿司匹林能够有效减轻放疗引起的早期炎性病理反应,对心肌细胞发挥保护作用,减轻RIHD。

金莲花总黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的基于多聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP-1)/p53信号通路探讨金莲花总黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法将人乳腺癌MCF-7细胞分为低、中、高剂量实验组、对照组,分别予以100,200,300μg·mL-1金莲花总黄酮和等量生理盐水。用CCK-8法测定人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制率;用平板细胞克隆形成实验观察人乳腺癌MCF-7细胞克隆形成情况;用蛋白免疫印迹法检测人乳腺癌MCF-7细胞PARP-1、p53蛋白的表达水平。结果干预48 h时,低、中、高剂量实验组人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率分别为(30.65±3.39)%,(44.28±3.76)%和(59.22±4.03)%;对照组、低、中、高剂量实验组克隆形成率分别为(84.52±3.11)%,(49.74±2.86)%,(37.21±3.59)%和(10.32±2.64)%;PARP-1蛋白相对表达量分别为0.92±0.08,0.85±0.05,0.28±0.12和0.09±0.06;p53蛋白相对表达量分别为0.93±0.07,0.73±0.11,0.49±0.10和0.26±0.08。上述指标,对照组分别与低、中、高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论金莲花总黄酮可显著抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与抑制PARP-1/p53通路的信号转导相关。

长链非编码RNA TP73-AS1调控miR-181b及其靶基因HMGB1的表达以及对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA TP73-AS1通过调控微RNA(microRNA,miRNA,miR)-181b及其靶基因高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法检测42例癌组织及其对应的癌旁组织,以及人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人NSCLC细胞(A549和NCI-H1299)中TP73-AS1的表达水平,并分析TP73-AS1表达与患者总生存期的相关性。采用脂质体法将shRNA-TP73-AS1(shTP73-AS1)和shRNA-NC(shNC)转入A549和NCI-H1299细胞,分别采用CCK-8法、Transwell小室实验、划痕愈合实验及FCM法检测敲减TP73-AS1表达对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。采用双荧光素酶报告基因验证TP73-AS1、miR-181b和HMGB1间的靶向关系。A549和NCI-H1299细胞中分别转入shTP73-AS1、shTP73-AS1+miR-181b-抑制子(inhibitor)和shTP73-AS1+pcDNA-HMGB1,再用CCK-8法、Transwell小室实验、划痕愈合实验及FCM法检测敲低TP73-AS表达后再沉默miR-181b表达或使HMGB1过表达对A549和NCI-H1299细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果:TP73-AS1 mRNA在癌组织中的相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.05),癌组织中TP73-AS1的表达水平与miR-181b的表达水平呈负相关(r=-0.623,P<0.05)。A549和NCI-H1299细胞中TP73-AS1的表达水平均明显高于BEAS-2B细胞(P值均<0.05)。敲低TP73-AS1表达可以明显抑制A549和NCI-H1299细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并促进细胞凋亡(P值均<0.05)。双荧光素酶报告基因检测证实,TP73-AS1靶向作用于miR-181b并下调其表达,miR-181b可负调控HMGB1的表达。敲低TP73-AS1表达可以明显抑制A549和NCI-H1299细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平(P值均<0.05)。同时,转染shTP73-AS1+miR-181b-inhibitor或者shTP73-AS1+HMGB1过表达载体后,HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平较仅转染shTP73-AS1明显上调(P值均<0.05),细胞增殖、侵袭和迁移能力也明显升高,而凋亡水平明显下降(P值均<0.05)。结论:TP73-AS1在NSCLC组织和细胞中高表达,可通过调控miR-181b/HMGB1轴促进癌细胞增殖、侵袭、迁移,并促进凋亡。

PF化疗同步联合时辰放疗与常规放疗治疗局部晚期鼻咽癌的随机对照研究

目的:比较局部晚期鼻咽癌分别接受顺铂联合氟尿嘧啶方案(PF)化疗联合时辰放疗以及PF化疗联合常规放疗时的疗效和毒副反应。方法:将我科45例初治局部晚期鼻咽癌患者随机分为时辰放疗组和常规放疗组,分别为22例和23例。两组均采用相同放射治疗方法和治疗剂量,同步给予PF方案化疗。时辰放疗组放疗时间在20:00-22:00,而常规放疗组在8:00-10:00。结果:两组患者在放疗结束3个月和6个月进行时比较发现,时辰放疗组患者的鼻咽部及颈部的肿瘤完全消退率(CR率)均比常规放疗组高(P<0.05)。而时辰放疗组的各种急性副作用发生率较常规放疗组低,但无统计学差异。治疗后时辰组CD4/CD8升高,常规组CD4/CD8降低(P<0.05)。结论:时辰放疗联合PF同步化疗针对局部晚期鼻咽癌患者疗效好,毒副作用轻,同时可能有利于改善患者的免疫功能。

西妥昔单抗联合适形调强放疗和化疗治疗鼻咽癌的临床分析

目的:分析西妥昔单抗联合适形调强放疗和化疗治疗鼻咽癌的临床疗效,毒性反应和预后因素。方法:纳入2006年3月至2011年3月在我院初治,无远处转移的Ⅱ~Ⅳ期鼻咽癌共72例。西妥昔单抗初始剂量为400 mg/m^2,之后为每周250 mg/m^2。所有患者接受适形调强放疗,接受诱导和/或同步化疗。结果:中位随访60.5月(5~110月)。全组患者3年、5年无局部区域复发生存率(local regional recurrence-free survival,LRRFS)、无远处转移生存率(distant metastasis free-survival,DMFS)、无进展生存率(progression-free survival,PFS);总生存率(overall survival,OS)分别为86.1%,75.4%;79.2%,67.9%;77.8%,66.7%和88.9%,76.7%。Ⅱ~Ⅲ期和Ⅳ期患者的5年PFS及OS分别为83.3%,97.1%和51.7%,58.3%。4例患者出现局部区域复发,共有17例患者出现远处转移。死亡14例患者中8例死于单纯远处转移。单因素分析显示肿瘤分期为PFS和OS的预后因素(P=0.0146,P=0.0021)。分别有62.5%和4.2%患者发生3和4级口腔粘膜炎。14例患者出现颞叶损伤。结论:西妥昔单抗联合IMRT加化疗治疗鼻咽癌的临床疗效较好,毒性反应可耐受。值得扩大样本量以及开展前瞻性随机对照试验进一步研究。

T4期鼻咽癌适形调强放疗联合化疗的疗效及预后分析

目的：分析T4期鼻咽癌适形调强放疗联合化疗的疗效及预后因素。方法：纳入2005年3月至2010年3月在我院初治的,无远处转移的110例T4期鼻咽癌患者。所有患者接受适形调强放疗,接受诱导和/或同步化疗。47例（42.7%）患者接受再程调强放疗。结果：中位随访58个月（12-120个月）。5年无局部复发生存率（local recurrence-free survival,LRFS）,无区域复发生存率（regional recurrence-free survival,RRFS）,无远处转移生存率（distant metastasis free-survival,DMFS）,无进展生存率（progression-free survival,PFS）和总生存率（overall survival,OS）分别为90.1%,97.0%,67.5%,63.9%和64.5%。11例患者出现局部区域复发,共有34例患者出现远处转移。死亡45例患者中26例死于单纯远处转移。与未接受再程调强放疗相比,接受再程调强放疗的患者能获得更好的局部控制率（97.7%VS.83.8%,P=0.023）。咽后淋巴结转移具有较低的总生存率（61.0%VS.91.7%,P=0.034）。GTVln volume是DMFS和PFS的独立预后因素（P=0.006;P=0.018）。结论：适形调强放疗联合化疗提高T4期鼻咽癌的局部区域控制可行。再程调强放疗的获益与局控率提高相关。但远处转移是治疗失败的主要原因,降低远处转移率和增加生存率的治疗模式应该进一步探索。

胃癌的临床诊断、形成机理以及临床治疗

胃癌(Gastric cancer)是发生在胃部黏膜的癌症,其公认的致病原因是由于感染幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)引起慢性萎缩性胃炎及一些免疫发炎反应。大约有10%的胃癌病例与家族遗传有关,胃癌发生主要与生活环境、饮食习惯、遗传与免疫因素以及慢性胃病等有关。胃癌临床治疗方式通常包括:外科手术、化学治疗、放射线治疗以及标靶治疗。多数早期胃癌经治疗能够痊愈,而到了末期则治疗成效不佳。一般而言,胃癌病人平均五年存活率大约为22%左右,而晚期胃癌患者五年存活率则小于5%。