小檗碱抑制缺氧诱导的人乳腺癌HCC1937细胞自噬

目的研究小檗碱(berberine,BBR)对缺氧条件下人乳腺癌HCC1937细胞自噬的影响。方法培养人乳腺癌HCC1937细胞,以CCK-8法分别测定常氧及缺氧条件下不同浓度BBR(0,5,10,20,40,80,160μmol·L^(−1))对细胞活力的影响,选择用于进一步实验的药物浓度;将培养的HCC1937细胞随机分为4组:对照组,20μmol·L^(−1) BBR组,缺氧组,缺氧+20μmol·L^(−1) BBR组。LIVE/DEAD细胞活力/细胞毒性试剂盒测定细胞死亡率。Western blotting测定自噬相关蛋白Beclin1、LC3及P62的表达。以mCherry-GFP-LC3腺病毒感染细胞,激光共聚焦显微镜成像并计数各组单个细胞内自噬体及自噬溶酶体的数目,判定BBR对HCC1937细胞自噬流的影响。结果BBR呈浓度依赖性地降低人乳腺癌HCC1937细胞的细胞活力;缺氧处理后HCC1937细胞的死亡率无显著改变,细胞内Beclin1、LC3-II及LC3-II/LC3-I的比值显著增加,P62无显著改变,自噬流增强;常氧及缺氧条件下BBR都能显著增加细胞的死亡率,降低Beclin1及LC3II/LC3-I的比值,增加细胞内P62,显著减少自噬体及自噬溶酶体的数量,抑制自噬体的形成及清除。结论BBR增加缺氧条件下人乳腺癌HCC1937细胞的死亡率,其作用与BBR抑制缺氧条件下细胞自噬的作用相关。