硅对水稻籼粳杂种雌雄配子育性和结实率的影响

以2个籼稻品种和2个粳稻品种及其籼粳杂种一代为材料,通过水培试验研究了硅对籼粳亚种间杂种雌雄配子育性和结实率的影响。结果表明:4个水稻亲本的育性正常,而亚种间杂种‘台中65’/‘广陆矮4号’和‘穞稻’/‘秋光’F1花粉育性分别为40.1%和50.3%,小穗育性分别为25.8%和40.3%;其F1胚囊具有正常的卵细胞、助细胞、极核及反足细胞,胚囊败育率分别为5.33%和3.33%。加硅处理F1每个柱头上花粉粒多于25粒的小花数分别占90%和90.5%,而不加硅处理高于20粒的小花数仅占8%和10%;加硅处理F1花粉离体萌发率分别为75.15%和76.23%,小穗的结实率分别达到65.5%和68.7%,而不加硅处理的分别为46.7%和48.13%,小穗结实率分别只有25.8%和40.3%,且加硅处理极显著高于不加硅处理。研究表明,水稻籼粳杂种存在半不育现象,并主要由花粉半不育和花药开裂性差造成;硅肥能促进杂种F1植株的花药开裂,明显增加柱头上花粉粒数目,并促进花粉萌发,显著提高小穗的结实率。

E3泛素连接酶TRIM65通过调控NLRP3炎症小体的活化改善DSS诱导的结肠炎

目的 TRIM65对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎的作用及机制探讨。方法 Trim65^(-/-)和Trim65-/-小鼠连续5d给予含3%(w/v)DSS的饮用水,然后给予无菌水2d。每天监测小鼠结肠炎的临床症状(体重、粪便稠度和直肠出血评分),第7d处死小鼠。测量结肠长度,收集结肠远端组织,HE染色和免疫组化判定组织损伤和炎症程度;匀浆结肠组织,评估MPO活性,免疫印迹法(western blotting)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测成熟caspase-1和IL-1β的变化。Trim65^(-/-)小鼠腹腔注射NLRP3炎症小体抑制剂MCC950,同时给予上述处理,以判断TRIM65对小鼠结肠炎的影响是否通过NLRP3炎症小体来实现。结果 在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠的结肠炎模型中,Trim65基因的缺失可显著增强DSS诱导的小鼠的体重减轻和结肠缩短,促进疾病活动指数和组织病理学评分增加,促进结肠MPO活性和F4/80+免疫细胞浸润增加、caspase-1激活和成熟IL-1β分泌增加。NLRP3炎症小体抑制剂MCC950在Trim65基因缺陷小鼠中缓解DSS诱导小鼠的结肠炎症状和炎症水平。综上,TRIM65可通过抑制NLRP3炎症小体激活减轻DSS诱导的结肠炎。结论TRIM65通过抑制NLRP3炎症小体的激活,在DSS诱导的结肠炎小鼠中发挥抗炎作用。

冷暴露和CL316243刺激小鼠脂肪组织内参基因的筛选

[目的]筛选冷暴露和CL316243刺激时脂肪组织中稳定表达的内参基因。[方法]8~9周龄C57BL/6J雄性小鼠分成4组:冷暴露组、常温对照组、CL316243组和生理盐水对照组。将冷暴露组和常温对照组分别置于4℃和常温饲养6 h;给予CL316243组7 d皮下注射CL316243(1 mg/kg/d),生理盐水对照组注射相同体积的生理盐水。荧光定量PCR检测棕色和白色脂肪中10个内参基因的mRNA水平,采用geNorm、Normfinder、Best Keeper和Delta-Ct四种方法来评估内参基因表达的稳定性。[结果]稳定性综合排名前4的内参基因是:冷暴露时棕色脂肪中为YWHAZ、36B4、PPIA和HPRT;白色脂肪中为HPRT、YWHAZ、B2M和TBP。CL316243刺激时棕色脂肪中为PPIA、HPRT、YWHAZ和β-actin;白色脂肪中为PPIA、HPRT、TBP和18S。冷暴露和CL316243刺激时脂肪组织中配对变异值V2/3均小于0.15。[结论]冷暴露和CL316243刺激时脂肪组织中最佳内参基因的数量均为2个。冷暴露时脂肪组织最佳内参基因组合为YWHAZ和HPRT,CL316243刺激时脂肪组织最佳内参基因组合为PPIA和HPRT。

参与唇腭部发育的重要蛋白复合体ESCRTⅢ的单分子检测体系的构建

目的构建参与唇腭部发育的重要蛋白ESCRTⅢ的单分子检测体系。方法分析ESCRTⅢ蛋白的结构,选取不影响结构稳定和纤丝形成的氨基酸进行突变,体外提取突变蛋白检测蛋白的稳定性,吸收光谱检测突变蛋白荧光标记的效率,负染电镜观察突变蛋白形成纤丝的能力,负染电镜观察和离心沉淀分析突变体蛋白形成的纤丝被Vps4解聚的能力。结果选取了ESCRTⅢ蛋白Snf7上的5个位点,K57,G58,N59,G120和D122,分别突变为半胱氨酸,其中K57C突变体蛋白不稳定聚沉,G58C突变体蛋白荧光标记效率低,N59C和G120C突变体蛋白影响纤丝形成,只有D122C突变体蛋白稳定,标记效率高,且标记后的蛋白能正常形成纤丝并被Vps4蛋白解聚。结论筛选出了Snf7 D122C突变体适用于利用单分子技术检测ESCRTⅢ纤丝的解聚动态过程,从而为进一步在细胞水平和体内研究ESCRT系统对腭部发育的作用提供支持。