他汀类药物抗肿瘤研究进展

他汀类药物的抗肿瘤作用近年来备受关注。研究发现,他汀类药物能抑制肿瘤细胞增殖,诱导其分化或凋亡,而对正常细胞无明显毒副作用。体外实验证明,他汀类药物可抑制Ras、RhoGTPase和核纤层蛋白异戊二烯化,影响细胞周期进程和凋亡相关基因表达,抑制血管形成等。现综述他汀类药物抗肿瘤的国内外研究进展。

携带psm-mec基因的耐甲氧西林表皮葡萄球菌产细菌生物膜的能力研究

目的探讨耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)携带psm-mec基因的情况及产细菌生物膜(biofilm,Bf)的能力,为进一步分析psm-mec与Bf的关系奠定基础。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌84株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定和区分甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)和MRSE,常规PCR检测psm-mec基因确定携带psm-mec菌株,PCR扩增fudoh基因及测序检测psm-mec上游有无基因突变,96孔培养板半定量法评估菌株产Bf的能力。结果 84株表皮葡萄球菌中esp基因均阳性,mecA基因阳性64株,故MRSE为64株(76.2%)。MRSE中psm-mec基因的携带率为39.1%(25/64)。Bf半定量检测发现,25株psm-mec阳性MRSE中产Bf 20株(80%),39株psm-mec阴性MRSE中产Bf13株(33.33%),差异有统计学意义(χ2=13.28,P<0.05)。fudoh基因序列分析发现,20株产Bf且携带psm-mec的MRSE均未发现基因突变,另有3株不产Bf的psm-mec阳性MRSE在psm-mec上游存在点突变(G>A)。结论 psm-mec广泛存在于临床分离的MRSE中,绝大部分携带psm-mec的MRSE具有Bf形成能力。

临床分离携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌的SCCmec型别分析

目的探讨临床分离携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的SCCmec型别。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌165株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定MRSE,扩增psm-mec、fudoh和p221片段鉴定携带psm-mec菌株。采用多重PCR对携带psm-mec基因的MRSE的mec、ccr和SCCmec进行分型。结果 138株MRSE菌株中,29株携带psm-mec基因,携带率为17.58%。多重PCR对mec和ccr分型结果显示,携带psm-mec基因MRSE均为Class A mec,但ccr型别存在明显的多样性。多重PCR对SCCmec分型结果显示,所有菌株均可扩增出Ⅱ型和/或Ⅲ型SCCmec条带,且为混合型别。结论临床分离携带psm-mec基因的MRSE的SCCmec具有同源性,以含Class A mec的携带Ⅱ型和/或Ⅲ型SCCmec为主。

辛伐他汀抑制K562细胞MAPK1、cyclin D1、E2F1、c-myc mRNA的表达

目的探讨辛伐他汀抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的分子机制。方法不同浓度辛伐他汀作用K562细胞后,MTT法检测细胞增殖情况,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,RT-PCR测定MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-myc mRNA表达。结果辛伐他汀能抑制K562细胞增殖,增殖抑制效应随药物浓度增加和作用时间延长而增大(P<0.05)。与对照组比较,5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48h和72h后能明显增加细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P<0.05),表明辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡。10、20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞72h后,MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-mycmRNA表达水平明显降低。结论辛伐他汀可能通过调节Ras-MAPK途径抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡。

SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的分布

目的探讨SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的分布,了解人葡萄球菌的分子特征。方法收集血培养阳性并经过全自动微生物鉴定系统准确鉴定的人葡萄球菌25株,通过PCR扩增mecA和psm-mec基因,采用多重PCR对耐甲氧西林人葡萄球菌SCCmec分型,分析psm-mec在人葡萄球菌中的分布。结果 PCR扩增结果显示,21株为耐甲氧西林人葡萄球菌,4株为甲氧西林敏感人葡萄球菌;耐甲氧西林人葡萄球菌psm-mec基因的检出率为47.6%,甲氧西林敏感人葡萄球菌中未检出psm-mec基因。多重PCR结果显示,21株mecA阳性人葡萄球菌中,3株属SCCmec类I型,1株属SCCmecⅢA型,1株属SCCmecⅢB型,4株属SCCmec类IIIA型,1株属SCCmec类IIIB型,3株属SCCmec类Ⅳ,8株属SCCmec新型别。在psm-mec阳性菌株中,1株分布于SCCmecⅢA,1株分布于SCCmecⅢB,4株分布于SCCmec类IIIA,1株分布于SCCmec类IIIB,3株分布于SCCmec新型别。结论 SCCmec相关的psm-mec广泛存在于血液来源的耐甲氧西林人葡萄球菌中,主要分布于SCCmecⅢ型、类III型和SCCmec新型别。

psm-mec在临床分离表皮葡萄球菌中的分布和表达

目的探讨psm-mec基因在临床分离表皮葡萄球菌中的分布和表达,为进一步分析psm-mec的功能奠定基础。方法收集临床分离并经过全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌165株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定和区分甲氧西林敏感表皮葡萄球菌（MSSE）和甲氧西林耐药表皮葡萄球菌（MRSE）。扩增psm-mec、fudoh和p221片段确认psm-mec携带菌株,通过DNA序列比对分析psm-mec及其上游序列的变化。构建p221重组质粒制备定量检测psm-mec的标准品,提取携带psm-mec MRSE总RNA,采用荧光定量RT-PCR分析临床分离MRSE psm-mec转录水平。结果 83.64%的临床分离表皮葡萄球菌为MRSE,其中29株携带psmmec基因,携带率为17.58%,且仅分布于MRSE中。所有菌株psm-mec开放读码框序列无突变,仅4.34%菌株在psm-mec基因上游存在G〉A的点突变。临床分离携带psm-mec菌株均表达此基因,其表达水平在103~107拷贝之间,G〉A点突变不影响psm-mec转录表达。结论 psm-mec仅分布和表达于临床分离MRSE中,G〉A点突变不影响psm-mec表达。

临床分离表皮葡萄球菌附属基因调节因子agr基因多态性分析

目的探讨临床分离表皮葡萄球菌附属基因调节因子agr基因多态性,了解表皮葡萄球菌的分子特征。方法收集84株临床分离并经过全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定和区分甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE),采用多重PCR扩增表皮葡萄球菌的agr等位基因,分析agr基因多态性。结果 84株临床分离表皮葡萄球菌中,20株为MSSE,占23.80%,其中agrⅠ型5株,agrⅡ型2株,agrⅢ型2株,agr未分型11株。64株为MRSE,占76.20%,其中agrⅠ型37株,agrⅡ型7株,agrⅢ型11株,agr未分型9株。血液来源的表皮葡萄球菌中,agrⅠ型25株,agrⅡ型5株,agrⅢ型10株,agr未分型16株。非血液来源的表皮葡萄球菌中,agrⅠ型17株,agrⅡ型4株,agrⅢ型3株,agr未分型4株。结论临床分离表皮葡萄球菌agr基因存在明显多态性,MSSE中未分型agr较常见,MRSE中以agrⅠ型和agrⅢ型为主。

建筑工程中现浇钢筋混凝土板裂缝原因分析及其防治

目前，建筑工程中现浇钢筋混凝土板出现裂缝现象相当普遍，原因较多，可以从施工和设计二个方面进行分析。１施工方面导致现浇板出现裂缝的主要原因（１）板中正负受力钢筋之间有效高度不够，使受力钢筋的抗拉强度不能有效发挥，反而加重了板上层混凝土的受压应力。该原因...

SCCmec相关psm-mec在临床分离表皮葡萄球菌中的分布和特征分析

目的分析SCCmec相关的psm-mec在临床分离表皮葡萄球菌中的分布和特征,为深入了解其在表皮葡萄球菌中的功能奠定基础。方法收集临床分离并经过全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌84株,PCR扩增esp和mec A基因区分耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE),PCR扩增psm-mec和fudoh基因确定携带psm-mec菌株,分析其在不同标本来源MRSE的分布,同时扩增mecR1/psm-mec与psm-mec/xylR基因间隔序列,探讨psm-mec与mecR1,xylR基因的连接关系。结果 PCR扩增结果显示,临床分离表皮葡萄球菌中,MRSE为64株,占76.19%。psm-mec和fudoh扩增结果显示,psm-mec基因阳性MRSE为25株,携带率为39.0%(25/64),且主要分布于血液和痰液来源MRSE。20株甲氧西林敏感表皮葡萄球菌均未检出psm-mec基因。基因间隔序列扩增结果显示,25株携带psm-mec菌株的mecR1/psm-mec均阳性,16株psm-mec/xylR阳性。结论 SCCmec相关的psm-mec广泛分布于MRSE中,psm-mec均与SCCmec基因盒上mecR1基因相连,64%菌株与xylR连接。

关于挡土墙设计的探讨

对挡土墙设计中的选材、选型进行探讨，结合本人实践经验对挡土墙设计、施工中常见的问题提出了处理意见，供设计时参考。

辛伐他汀对K562细胞端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的探讨辛伐他汀治疗慢性粒细胞白血病可能的作用机制。方法辛伐他汀10和20μmol.L-1与K562细胞作用48或72 h后,用流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡百分率;提取细胞端粒酶,用PCR-ELISA检测端粒酶活性;实时荧光定量PCR检测人端粒酶逆转录酶(hTERT),c-myc和bcl2-mRNA表达。结果辛伐他汀10和20μmo.lL-1与K562细胞作用48 h后,细胞凋亡率分别为(6.24±0.18)%和(9.41±0.22)%,与对照组(1.88±0.14)%比较明显增加;作用72 h后细胞凋亡率分别为(12.41±0.32)%和(19.08±0.26)%,与对照组(4.20±0.19)%比较明显增加。辛伐他汀10和20μmo.lL-1与K562细胞作用48或72 h后,端粒酶活性,hTERT,c-myc和bcl-2 mRNA表达明显低于对照组。结论辛伐他汀可使K562细胞端粒酶活性降低,其机制可能与下调hTERT mRNA表达有关。

临床分离耐甲氧西林表皮葡萄球菌SCCmec型别多样性分析

目的探讨临床分离耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)SCCmec型别。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌84株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定MRSE,采用多重PCR对MRSE SCCmec进行分型,分析其分布特点。结果 PCR扩增结果显示,84株临床分离表皮葡萄球菌均可扩增出esp基因,mecA检出率为76.19%(64/84),其中血液、痰液、尿液和伤口分泌物MRSE检出率分别为76.8%、68.8%、100.0%和71.4%。多重PCR扩增结果显示,64株MRSE中,SCCmec单一型别为22株,其中SCCmecⅠ型19株、SCCmecⅢ型3株;SCCmec混合型为42株,其中Ⅰ、Ⅱ混合型2株,Ⅰ、Ⅲ混合型14株,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ混合型12株,Ⅱ、Ⅲ混合型5株,Ⅲ、Ⅳ混合型9株。结论临床分离的MRSE SCCmec型别存在明显的多样性,以混合SCCmec型别为主。

建立白色念珠菌蛋白指纹库的研究

目的探讨白色念珠菌蛋白指纹库的建立,为白色念珠菌感染快速诊断奠定基础。方法收集96株临床分离的白色念珠菌,提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增其ITS1-5.8S-ITS2基因片段,利用限制性内切酶对其进行鉴定。应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)仪检测念珠菌蛋白指纹,Ciphergen ProteinChip软件自动采集数据,筛选稳定表达蛋白峰建立白色念珠菌蛋白指纹库,运用经准确鉴定的念珠菌对建立的蛋白指纹库进行验证。结果限制性片段长度多态性分析证实临床分离的所有菌株均为白色念珠菌。SELDI-TOF-MS芯片能捕获15个蛋白峰,其中5个蛋白峰在所有白色念珠菌中均稳定表达,利用相似性分析软件建立白色念珠菌蛋白指纹库,白色念珠菌蛋白指纹与建立数据库的相似性大于95%,而其他种类念珠菌蛋白指纹与数据库的相似性均小于50%。结论白色念珠菌蛋白指纹库的建立为快速诊断白色念珠菌感染提供了理论依据。

PCR-RFLP鉴定常见致病性念珠菌

目的运用PCR—RFLP快速准确鉴定临床常见致病性念珠菌。方法收集四川省人民医院2008年11月～12月临床分离的念珠菌169例，提取念殊菌DNA，采用PCR扩增核糖体DNA内部转录间隔区（ITs1-5．8S-ITS2），扩增产物运用styI和MspI酶切分析，确定临床常见致病性念珠菌种类。结果白色念珠菌、都柏林念殊菌、热带念珠菌和克柔念殊菌均扩增出长度约500bp的DNA片段，光滑念珠菌扩增出长度约881bp的DNA片段。扩增产物经MspI酶切后产生四种不同的带型，其中白色念珠菌和都柏林念珠菌带型一致。将白色念珠菌和都柏林念珠菌用StyI酶切进行鉴定。PCR—RFLP分析显示，169株临床分离念珠菌中，111株为白色念珠菌，32株为热带念珠菌，19株为光滑念珠菌，7株为克桑念珠菌。结论PCR-RFLP方法能准确快速检测和鉴定出临床常见的致病性念珠菌，为念珠菌病分子诊断奠定了基础。

携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌的耐药谱研究

目的比较携带与未携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的耐药谱,为治疗MRSE引起的感染提供理论依据。方法收集临床分离并经过全自动微生物奠定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,S.epidermidis)165株,通过PCR扩增esp和mec A基因,准确鉴定和区分甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)和MRSE。扩增psm-mec,fudoh和p221片段确认携带psm-mec基因的MRSE菌株,比较分析携带与未携带psm-mec基因MRSE的耐药谱。结果83.64%的临床分离S.epidermidis为MRSE,其中29株携带psm-mec基因,携带率为17.58%,且仅分布于MRSE中。临床分离MRSE易对苯唑西林、青霉素、红霉素、复方新诺明和克林霉素耐药,未发现对利奈唑胺、呋喃妥因、普丁/达福、万古霉素和替加环素耐药菌株。携带psm-mec基因MRSE对环丙沙星、庆大霉素、利福平和复方新诺明的耐药率明显高于未携带psm-mec基因MRSE。结论携带psm-mec基因MRSE易对苯唑西林、青霉素、红霉素、克林霉素、环丙沙星、庆大霉素、利福平和复方新诺明耐药。

凝固酶阴性葡萄球菌生物被膜形成及耐药性分析

目的分析临床血培养报阳的凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)生物被膜形成能力及耐药性特征。方法收集某院临床血培养报阳的CNS 126株,采用96孔聚苯乙烯培养板分析生物被膜形成能力,聚合酶链反应(PCR)法检测细菌耐药基因mecA,并分析菌株的耐药情况。结果 126株CNS中,87株(占69.04%)生物被膜阳性,105株(83.33%)携带mecA基因。CNS对青霉素、苯唑西林及红霉素的耐药率均>80%,未发现对利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀、万古霉素和替加环素耐药的菌株;耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)对环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星、青霉素、利福平和复方磺胺甲口恶唑的耐药率均高于甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球(MSCNS)(均P<0.05)。对苯唑西林敏感的CNS中,有2株mecA检测阳性。结论临床血液来源的CNS具有较高的生物被膜形成能力,绝大部分为MRCNS,且表现为多重耐药;存在耐药表型与基因型不一致的菌株。

2015—2018年四川地区无菌体液细菌的分布及耐药性分析

目的对四川省细菌耐药监测网成员单位2015—2018年度无菌体液(未包括血液)的细菌分布及耐药情况进行统计分析,为本省临床合理应用抗菌药物提供依据。方法按照监测方案,采用标准纸片扩散法、E-test法或自动化仪器检测法,依据美国临床实验室标准化研究协会(CLSI)2018年标准,用WHONET5.6软件进行数据分析。结果2015—2018年间四川地区无菌体液共分离出29754株非重复的细菌,其中革兰阳性菌11351株,占38.1%,革兰阴性菌18403株,占61.9%。无菌体液中最常见的细菌依次为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌和表皮葡萄球菌。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别为28.3%和63.9%。MRSA和MRCNS对绝大多数测试药物的耐药率均显著高于甲氧西林敏感株(MSSA和MSCNS)。屎肠球菌中分别检出0.5%(9株)对利奈唑胺耐药和2.2%(40株)对万古霉素耐药的菌株,粪肠球菌中发现1.7%(22株)对利奈唑胺耐药和0.3%(4株)对万古霉素耐药的菌株。耐万古霉素屎肠球菌(VRE)由4%降至1.8%,而耐利奈唑胺屎肠球菌由1.3%降至0。无菌体液标本中产ESBL大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为45.8%和25.6%,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对碳氢霉烯类仍然保持较高的活性。非发酵菌对碳青霉烯类抗生素耐药率较高,其中鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率已大于65%。结论四川地区无菌体液分离细菌对常见抗菌药物的耐药率部分仍呈增长趋势,尤其是耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌。对万古霉素耐药的屎肠球菌分离率较高。非发酵菌特别是鲍曼不动杆菌的耐药形势严峻。应充分利用本地细菌耐药监测结果进行感控管理,促进抗菌药物合理应用。

一株对3种碳青霉烯类抗菌药物均耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的研究临床分离的一株肺炎克雷伯菌(K30)对碳青霉烯类抗菌药物耐药的机制。方法采用琼脂稀释法测定肺炎克雷伯菌K30对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;聚合酶链反应(PCR)检测A类碳青霉烯酶(KPC)、B类碳青霉烯酶(NDM、IMP、VIM、SIM)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs,CTX、TEM、SHV)、头孢菌素酶(AmpC,FOX、EBC、ACC、DHA、CIT、MOX)基因和Ⅰ类整合子;实时荧光定量PCR分析肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因ompK35、ompK36的mRNA表达;利用质粒接合试验研究肺炎克雷伯菌K30耐药基因的水平传播能力。结果药物敏感性试验显示,肺炎克雷伯菌K30对包括碳青霉烯类抗菌药物在内的11种抗菌药物均耐药,仅对头孢西丁钠中介,对阿米卡星敏感。肺炎克雷伯菌K30的改良Hodge试验为阳性。PCR扩增A类碳青霉烯酶基因KPC和2种ESBLs基因CTX、SHV为阳性,其PCR产物经测序后同GenBank数据库比对证实分别为KPC-2、CTX-M3和SHV-38。其余耐药基因和Ⅰ类整合子扩增均为阴性。与肺炎克雷伯菌(ATCC 700603)相比,膜孔蛋白基因ompK35、ompK36的表达没有降低。质粒接合试验未成功获取结合子。结论临床分离的一株对碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌主要耐药机制与产A类碳青霉烯酶KPC-2合并产ESBLs有关,且KPC-2可能不由质粒介导。

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中Caspase-3、Caspase-9活性变化

目的观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中Caspase-3、Caspase-9活性的变化。方法不同浓度辛伐他汀处理K562细胞,用细胞形态学、流式细胞技术检测细胞凋亡,比色法测定Caspase-3、Caspase-9活性。结果5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48h后出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变,其凋亡率分别为(4.00±0.13)%、(6.24±0.18)%、(9.41±0.22)%,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。作用72h后细胞凋亡率分别为(7.62±0.21)%、(12.41±0.32)%、(19.08±0.26)%,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。同时Caspase-3、Caspase-9活性明显升高,10μmol/L与20μmol/L组Caspase-3、Caspase-9活性与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论辛伐他汀可能通过活化Caspase-9,并进而活化Caspase-3诱导K562细胞凋亡。

多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因和同源性分析

目的分析多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因型和医院感染鲍曼不动杆菌同源性。方法收集四川省人民医院重症监护病房(ICU)分离的鲍曼不动杆菌复合群76株,用OXA-51基因扩增法鉴定。用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统进行药敏试验,同时用PCR技术分析其产碳青霉烯酶相关耐药基因类型,对其中确定为医院感染的19株鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌用重复序列聚合酶链反应(Rep-PCR)的DiversiLab系统进行同源性分析。结果 76株菌株均显示多重耐药,全部检出携带OXA-51、OXA-23基因,未检出OXA-24、OXA-58、VIM、IMP-1、IMP-4、SIM、NDM-1耐药基因。DiversiLab系统将19株医院感染鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌分为4个亲缘性不同的克隆组及9个亚克隆组。结论该院鲍曼不动杆菌多重耐药现象严重,OXA-23基因可能是其耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。克隆组1为该院鲍曼不动杆菌医院感染的主要流行株。