胰岛素对高糖环境中巨噬细胞表型转换的影响

目的·研究胰岛素对高糖培养的人单核细胞株THP-1细胞及糖尿病创面巨噬细胞表型转换的影响。方法·分别用正常糖(5.6 mmol/L)和高糖(25 mmol/L)培养THP-1细胞,PMA刺激贴壁后,LPS诱导分化为M1型巨噬细胞,胰岛素处理细胞6 h。使用RT-PCR、Western blotting检测M1型标记物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)以及M2型标记物精氨酸酶1(Arg1)、IL-10表达的变化。高脂饮食喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ)多次腹腔注射诱导2型糖尿病大鼠模型;血糖稳定5周后,在糖尿病大鼠背部制作2个直径1 cm的全层皮肤缺损创面,应用随机数字表法将创面随机分为胰岛素处理创面和生理盐水处理创面,分别滴加0.2 U胰岛素/20μL生理盐水或20μL生理盐水。于伤后第3、7、25日,观察创面巨噬细胞表型特征;以正常大鼠(n=3)作为正常对照。结果·经高糖培养后,由THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞M1型标记物iNOS、TNF-αmRNA表达上调,而M2型标记物Arg1、IL-10 mRNA表达下调;胰岛素作用6 h后,iNOS、TNF-αmRNA表达下调,iNOS、IL-1β蛋白表达也下调,而Arg1、IL-10 mRNA及蛋白表达均上调。此外,高糖培养的巨噬细胞磷酸化NF-κB-p65水平明显升高,而胰岛素干预后磷酸化NF-κB-p65水平显著降低。与正常对照大鼠皮肤创面相比,糖尿病大鼠创面巨噬细胞iNOS表达明显升高;伤后第3、7日,生理盐水处理创面巨噬细胞iNOS高表达;伤后第25日,Arg1表达较低。伤后第7日起,胰岛素处理创面巨噬细胞iNOS表达开始下调;伤后第25日,Arg1的表达显著高于生理盐水处理创面。结论·胰岛素可诱导高糖环境中的巨噬细胞由M1表型向M2表型转换,其机制可能与NF-κB-p65的磷酸化有关。

局部应用胰岛素调控基质金属蛋白酶对糖尿病创面血管新生的影响

目的研究局部应用胰岛素对血管内皮生长因子(Vegf)及基质金属蛋白酶2/9(Mmp-2/9)的调控,探讨两者在促进糖尿病创面血管新生的作用及相关性。方法 60只Wistar大鼠经高脂饮食喂养和小剂量链脲佐菌素(STZ)多次注射诱导糖尿病。5周后,在大鼠背部制造4个直径为0.9 cm的全厚皮肤缺损创面,每天以对角型在两个创面滴加20μL生理盐水(生理盐水组)和0.1 U胰岛素/20μL生理盐水(胰岛素组),直至创面完全愈合。观察并记录创面愈合速度,于第3、7、13、21日取材。H-E染色观察愈合后创面皮肤组织结构,7、13 d创面血管新生情况;real-time PCR方法检测Vegf、Vegfr-2、Mmp-2/9的mRNA表达水平。结果与生理盐水组相比,胰岛素组创面愈合时间明显缩短,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。21 d创面愈合后胰岛素组与生理盐水组相比表皮钉突数量增多,真皮组织致密,第7、13日新生血管数量明显增多。与生理盐水组相比,胰岛素组Vegf、Vegfr-2、Mmp-2/9 mRNA水平在第3、7、13日呈逐渐递增状态,13 d到达峰值,随后下降。第21日Vegf、Vegfr-2 mRNA表达仍高于对照组,而Mmp-2/9 mRNA相比生理盐水组表达下降。组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论局部应用胰岛素促进Vegf、Vegfr-2 mRNA的表达上调,调控Mmp-2/9 mRNA的表达,从而促进糖尿病创面的血管新生。

四家医院烧伤科临床分离金黄色葡萄球菌的毒力因子分析

目的对4家医院烧伤科临床分离的金黄色葡萄球菌进行菌株分子流行病学特征及毒力因子分析。方法2009年1—12月，收集上海交通大学医学院附属瑞金医院、广西医科大学第一附属医院、中南大学湘雅医院、江苏大学附属医院烧伤科住院患者创面分离的85株金黄色葡萄球菌，分别采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增筛选和确认甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA），在前期研究的基础上挑选出不同克隆的菌株，采用PCR进行多位点序列分型（sT），采用eBURST软件进行克隆复合群（CC）分析，根据生物化学反应检测菌株的脲酶与酯酶，PCR检测菌株是否携带具有重要临床意义的17种毒力基因。对数据行∥检验或Fisher’S确切概率法。结果85株金黄色葡萄球菌中有44株MRSA和41株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）。脲酶阳性菌株中，MRSA43株（97．7％）、MSSA29株（70．7％）；酯酶阳性菌株中，MRSA2株（4．5％）、MSSA33株（80．5％），差异均有统计学意义（，值分别为11．94、47．45，P值均小于0．01）。分子特征分析表明ST239一CC239是烧伤科MRSA的流行克隆，一般携带毒力基因sea、hla、hlg；ST464一CC97是MSSA中主要的序列型别，一般携带溶血素基因hla。MRSA和MSSA间毒力基因的携带率比较，只有肠毒素sea基因差异有统计学意义（X。=7．34，P〈0．01）。此外，还检测到1株毒力较强的社区相关MRSA（ST338．CC59）以及1株无毒力的家畜相关感染金黄色葡萄球菌（ST804·CC398）。结论ST239为本研究中4家医院烧伤科流行MRSA克隆，一般携带sea、hla、hlg毒力基因。

局部应用胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面愈合的影响

目的研究局部应用胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面愈合的作用,初步探索相关机制。方法 60只Wistar大鼠经高脂饮食喂养和小剂量脲佐菌素(STZ)多次注射诱导糖尿病,5周后,造成背部皮肤20%TBSA深Ⅱ度烫伤。随机分为胰岛素治疗组和对照组(每组30只大鼠),分别于创面下浸润注射0.2 U中性胰岛素和等体积0.9%氯化钠溶液。观察创面愈合速度及伤后第1、4和12天两组创面表皮角质形成细胞迁移、炎症细胞浸润以及胶原沉积情况。酶联免疫吸附测定法检测创面活化素A(Activin A)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和血小板衍生因子A(PDGF-A)水平。结果胰岛素治疗组创面愈合时间明显缩短,血糖无明显变化。和对照组相比,胰岛素治疗组伤后第4天创面表皮迁移舌长度明显延长;伤后第12天创面胶原沉积增加;创面巨噬细胞浸润和消退的时间提前,巨噬细胞在创面表达特征与创面MCP-1表达趋势一致。伤后第1、4天胰岛素治疗组创面Activin A的表达分别(142.52±15.26)pg/mL和(271.46±49.73)pg/mL,较对照组创面的(52.36±33.18)pg/mL和(46.08±8.92)pg/mL明显增加(P=0.0057,0.0001),PDGF-A于伤后第1、4天的表达分别为(52.12±9.00)pg/mL和(74.75±7.00)pg/mL较对照组的(47.35±8.21)pg/mL和(34.07±5.05)pg/mL也有明显增加(P=0.4080,0.0001)。结论局部应用胰岛素促进创面巨噬细胞的浸润和提早消退、促进表皮细胞的迁移和血管生成相关细胞因子表达和胶原组织沉积,从而促进糖尿病大鼠烫伤创面的愈合。

高效液相色谱法检测猪脱细胞真皮基质中残留甲醛和戊二醛的实验研究

目的采用高效液相色谱法检测猪脱细胞真皮基质(ADM)中残留戊二醛和甲醛的含量,并探索降低醛类物质残留的可行方法。方法采用高效液相色谱法检测异体皮(对照组)及猪ADM(单纯实验组)中戊二醛和甲醛含量。采用0.9%氯化钠溶液联合碘伏冲洗和0.9%氯化钠溶液浸泡(浸泡时间为1、12、24 h)两种方法处理猪ADM,分别为冲洗实验组、浸泡1 h组、浸泡12 h组及浸泡24 h组,采用高效液相色谱法检测各组基质中残留戊二醛和甲醛含量,并进行比较、分析。两组间比较采用t检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis秩和检验。结果高效液相色谱法未检出对照组及单纯实验组中戊二醛成分,单纯实验组甲醛含量为(643.62±16.85)μg/g,较对照组的(35.04±14.39)μg/g明显增高,两组间差异具有统计学意义(t=47.564,P<0.01)。与单纯实验组相比,冲洗实验组甲醛含量降至为(240.02±6.64)μg/g,浸泡1 h组、浸泡12 h组及浸泡24 h组残留甲醛含量分别降至(84.68±0.96)μg/g、(69.47±11.34)μg/g和(85.00±4.10)μg/g,差异均具有统计学意义(t=38.589、57.347、48.950、55.776,P均<0.01);浸泡1 h组,浸泡12 h组及浸泡24 h组甲醛含量均低于冲洗实验组,差异均具有统计学意义(t=40.107、22.476、34.396,P均<0.01);浸泡1 h组,浸泡12 h组及浸泡24 h组组间甲醛含量比较差异无统计学意义(χ~2=4.356,P=0.113)。结论猪ADM中甲醛含量显著高于异体皮,0.9%氯化钠溶液浸泡1 h以上可大幅降低猪ADM中甲醛含量,可作为降低猪ADM细胞毒性的有效和经济的手段。

右美托咪定对严重烧伤大鼠早期心肌的影响

摘要目的观察右美托咪定对严重烧伤大鼠早期心肌的作用。方法将20只无特殊病原体级雄性SD大鼠浸入90 ℃热水中20 s造成背部30%TBSAⅢ度烫伤（以下称烧伤），按照随机数字表法分为烧伤复苏组10只、烧伤复苏＋右美托咪定组10只。2组大鼠伤后一次性腹腔注射乳酸钠林格液2 mL·kg－1·%TBSA－1，其中烧伤复苏＋右美托咪定组大鼠同时腹腔注射右美托咪定1 μg/kg。另取5只大鼠设为假伤组，于37 ℃水浴造成假伤，补液条件同烧伤复苏组。2个烧伤组大鼠于伤后6、24 h各取5只大鼠，使用小动物超声成像系统测定左心室收缩末期内径（LVIDs）、左心室舒张末期内径（LVIDd）、射血分数（EF）及心排血量（CO）；应用ELISA法检测血浆心肌肌钙蛋白（cTn）I及cTnT水平；分别于光学显微镜、透射电镜（透射电镜仅观察伤后24 h）下观察心肌组织形态变化。假伤组大鼠于伤后24 h进行心肌组织形态学观察，其余检测同前。对数据行单因素方差分析及SNK检验。结果伤后6 h，烧伤复苏组大鼠EF值为（98.0±2.8）%，明显高于假伤组[（91.0±0.4）% ，P〈0.05]；其余3项心脏超声指标与假伤组相近（P值均大于0.05）。伤后6 h，烧伤复苏＋右美托咪定组大鼠各项心脏超声指标与假伤组相近（P值均大于0.05）。伤后24 h，烧伤复苏组及烧伤复苏＋右美托咪定组大鼠LVIDs水平分别为（0.66±0.59）、（0.69±0.27）mm，明显低于假伤组[（1.65±0.33）mm，P值均小于0.05]；各组大鼠LVIDd、EF及CO水平相近（P值均大于0.05）。伤后6 h，烧伤复苏组大鼠血浆cTnI、cTnT水平分别为（17.40±1.59）ng/mL、（1 488±229）pg/mL，明显高于假伤组的（1.84±0.92）ng/mL和（169±12）pg/mL （P值均小于0.01）；烧伤复苏＋右美托咪定组大鼠血浆cTnI水平[（2.58±0.60）ng/mL]与假伤组接近（P〉0.05），血浆cTnT水平[（649±190）pg/mL]明显高于假伤组（P〈0.01）。伤后24 h，2个烧伤组大鼠血浆cTnI及cTnT水平与假伤组接近（P值均大于0.05）；烧伤复苏＋右美托咪定组大鼠血浆cTnI水平明显低于烧伤复苏组（P〈0.01）。伤后6 h，2个烧伤组大鼠心肌结构均较正常，与假伤组伤后24 h相似。伤后24 h，烧伤复苏组大鼠心肌组织明显破坏，肌丝排列较紊乱、线粒体损伤严重，烧伤复苏＋右美托咪定组大鼠上述情况较烧伤复苏组显著改善。结论右美托咪定对严重烧伤大鼠伤后早期心肌具有一定的保护作用。