血液代谢组学研究的样本分析前阶段规范化流程分析

血液因其微创采集和简单的预处理方法被认为是代谢组学首选的研究样本,但血液中代谢物种类繁多、理化性质各异、对环境变化敏感,离体后易发生氧化、聚合或降解。许多分析前变量影响实验室检测结果的有效性,包括采集对象的筛选、样本类型(血清/血浆)、收集管(抗凝剂/促凝剂)、溶血、离心前延迟、离心速度、离心后延迟、运输、长期储存和冻融循环,因此识别和控制这些变量,最大限度地减少由技术问题引起的样本间变异性,对于获得有效的分析数据至关重要。本研究综述了各分析前阶段对临床血液代谢组学研究的影响,以及如何评估已收集的血液样本质量,并进行总结与提出建议,为多中心临床研究和大规模人群队列研究获得稳定可重复的代谢组学研究结果提供参考。

生脉散配方颗粒及加味方剂对急性缺氧大鼠相关生化指标的影响

目的研究生脉散配方颗粒及加味方剂对急性缺氧大鼠相关生化指标的影响。方法取SD大鼠60只,雌雄各半,随机分成6组,每组10只,即空白组、模型组、红景天(HJT)组、生脉散(SMS)组、益气生脉散(YQSMS)组、活血生脉散(HXSMS)组。空白组、模型组均灌胃给予生理盐水,其余各组分别灌胃给予红景天、生脉散配方颗粒、益气生脉散配方颗粒、活血生脉散配方颗粒,1次/d。连续给药7 d后,除空白组外,其余各组均置于模拟海拔5000 m的低压氧舱内。放置24 h后,采用ELISA法检测各组血清促红细胞生成素(EPO)、心钠素(ANP)、N-脑钠钛(NT-proBNP)、肾素(Renin)、血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)、醛固酮(ALD)的含量。结果暴露模拟海拔5000 m高原环境后,各组血清EPO、ANP、NT-proBNP、Renin、ANG-Ⅱ、ALD含量均明显升高,而生脉散配方颗粒、益气生脉散配方颗粒、活血生脉散配方颗粒能明显降低急性缺氧大鼠血清中以上物质的含量,其中活血生脉散配方颗粒在降低EPO含量方面,较生脉散配方颗粒药理作用更强;在降低NT-proBNP含量方面,较生脉散配方颗粒、红景天药理作用更强。结论生脉散配方颗粒及加味方剂可改善急性缺氧大鼠相关生化指标,其中生脉散配方颗粒与丹参配伍后,部分药理作用更强。

栀子黄色素抗脂质过氧化能力与主成分含量的相关性研究

目的揭示栀子黄色素的抗脂质过氧化能力与多酚、栀子苷和西红花苷-Ⅰ含量的关系,明确栀子黄色素中主要的抗脂质过氧化成分。方法采用大孔树脂HPD100和乙酸乙酯纯化栀子黄色素,用福林-酚法测定多酚含量,HPLC法测定栀子苷含量,UV法测定西红花苷-Ⅰ含量,并采用硫氰酸铁法评价抗脂质过氧化能力。结果抗脂质过氧化能力随绿原酸(0.001~0.006 7mg·mL^(-1))、栀子苷(0.002 5~0.013mg·mL^(-1))和西红花苷-Ⅰ(0.001 5~0.004mg·mL^(-1))质量浓度的增大而增强,质量浓度为0.002mg·mL^(-1)时,抗脂质过氧化能力绿原酸>西红花苷-Ⅰ>栀子苷。结论栀子黄色素中多酚、栀子苷和西红花苷-Ⅰ都具有抗脂质过氧化的能力。

川木香不同煨制品的质量差异研究

目的:研究不同煨制法川木香的质量差异。方法:经水蒸气蒸馏法提取川木香挥发油,利用GC-MS分析得到不同炮制方法川木香化学成分质谱图信息,采用主成分分析法(Principal Component Analysis,PCA)和聚类分析(Hierarchical Cluster Analysis,HCA)的模式识别技术比较川木香生品和煨制品的质量差异。结果:不同炮制方法之间的差异较小,其中去氢木香内酯、木香烃内酯两种成分对不同煨制方法川木香质量差异贡献较大。结论:利用模式识别技术能将川木香生品和煨品很好地区分;去氢木香内酯(Dehydrocostus lactone)、木香烃内酯(Costunolide)二者的含量差异可作为区分川木香生品和煨制品的重要参考。

甲磺酸普依司他油水分配系数的测定

目的:建立甲磺酸普依司他油水分配系数(log P)的测定方法。方法:采用摇瓶法,以正辛醇-磷酸盐缓冲液为分散系统,使用紫外分光光度法和高效液相色谱法进行测定,通过平衡后在油相和水相的浓度比,计算油水分配系数。结果:用紫外分光光度法测定,当水相分别为水、0.1 mol·L-1盐酸、pH=6.8的磷酸盐缓冲液时,其log P分别为1.65、-1.18、1.78。用高效液相色谱法测定,当水相分别为水、0.1 mol·L-1盐酸、pH=6.8的磷酸盐缓冲液时,其log P分别为1.82、-0.84、1.86。结论:甲磺酸普依司他的油水分配系数适中,肠道的弱碱性环境更有利于药物的吸收。

顶空气相色谱法测定甲磺酸普依司他中三乙胺的残留量

目的:建立甲磺酸普依司他原料药中三乙胺残留量的测定方法。方法:采用顶空气相色谱法,FID检测器,以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的Agilent DB-624毛细管柱(30 m×0.53 mm,3μm),载气为氮气,流速为4.0 ml/min,进样口温度为200℃,检测器温度为250℃,柱温采用程序升温,初始温度为40℃,保持5 min,然后以10℃/min升至120℃,保持10 min,顶空条件为80℃平衡30 min,以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂配制对照品溶液及样品溶液,采用外标法定量。结果:三乙胺浓度在0.64~12.8μg/ml内有良好的线性关系(n=5),平均回收率为101.4%(n=9),RSD为1.9%(n=9)。结论:本方法准确、可靠、灵敏度,适用于甲磺酸普依司他中三乙胺的残留量检测。

UPLC-MS/MS研究抗肿瘤化合物HK-7在不同种属肝微粒体中的代谢稳定性和代谢酶表型

目的:应用体外肝微粒体孵育体系,研究抗肿瘤化合物HK-7在人、SD大鼠、昆明种小鼠、恒河猴和比格犬的肝微粒体中的代谢稳定性,确定HK-7在人肝微粒体中的代谢表型。方法:通过UPLC-MS/MS检测方法,测定在各个种属中孵育后的HK-7剩余浓度,考察它们的代谢稳定性及体外代谢动力学参数。采用化学抑制剂法预测HK-7在人肝微粒体中的代谢表型。结果:在人、SD大鼠、昆明种小鼠、恒河猴和比格犬的肝微粒体中,HK-7的体外代谢半衰期t1/2分别为44.91,83.42,72.70,48.93和66.21 min;体外固有清除率CLint分别为0.031,0.016,0.019,0.028和0.021 m L·min^(-1)·mg^(-1);在人肝微粒体中HK-7主要被细胞色素CYP2C9,CYP2E1和CYP3A4催化代谢。结论:HK-7在肝微粒体中的代谢存在种属差异,人肝微粒体中参与HK-7代谢的酶可能有CYP2C9,CYP2E1和CYP3A4,其中CYP2E1贡献最大。

五味子薄层色谱用对照提取物的研制与应用

目的:研究制备五味子薄层色谱用对照提取物。方法:通过制备工艺摸索、不同展开系统考察和稳定性影响因素的考察等,研制五味子薄层用对照提取物,并应用于五味子药材、安神胶囊、生脉饮等《中华人民共和国药典》2015年版一部药品标准中的薄层色谱鉴别项。结果:五味子粗粉加10倍量的95%乙醇,加热回流2次,每次1h,滤过,合并滤液,浓缩,加1/3倍量微粉硅胶,混匀,干燥,即得。结论:研制了定性用的五味子薄层色谱用对照提取物,并用于五味子类制剂的质量控制分析,为中药对照提取物的进一步发展提供研究基础。

HPLC法测定注射用甲磺酸普依司他的含量

目的：建立高效液相色谱法测定注射用甲磺酸普依司他的含量。方法：采用HPLC方法，色谱柱为Waters XBridge C18（150mm×4．6mm，5μm）；流动相为醋酸盐缓冲液（10mmol·L^-1醋酸铵，内含0．5％醋酸）-乙腈（72：28）；流速1mL·min^-1；柱温25℃；检测波长280nm。结果：在选定的色谱条件下，辅料对主成分的含量测定无干扰，注射用甲磺酸普依司他在48．9～146．7μg·mL^-1范围内线性关系良好，相关系数r^2为1。平均回收率为100．72％（RSD=1．32％，n=9）。3批样品主成分含量分别为105．12％，106．71％。105．44％。结论：本法经方法学验证，方法灵敏、准确、重现性好、操作简便，可用于注射用甲磺酸普依司他的含量测定。

HK-5的体外代谢研究

目的考察HK-5在人、SD大鼠、比格犬、小鼠和猴肝微粒体中的代谢稳定性;测定人肝微粒中HK-5代谢表型。方法采用LC-MS测定HK-5在五个种属肝微粒体中孵育不同时间点后的剩余浓度;在人肝微粒体中使用化学抑制剂对各CYP亚酶特异性抑制,比较化学抑制剂对HK-5的抑制率。结果 HK-5在5个种属的肝微粒体中体外代谢半衰期(T1/2)分别为42.5,38.3,70.7,70.0,60.9 min,肝微粒体固有清除率(CLint)分别为0.033,0.036,0.020,0.020,0.023ml·(min·mg蛋白)-1,体内固有清除率(CL'int)分别为32.7,64.8,29.7,78.8,34.2ml·(min·mg)-1。HK-5在SD大鼠肝微粒体和人肝微粒体代谢速率相近,相对较快;在猴、比格犬和小鼠肝微粒体中代谢速率相近,均比较慢;代谢速率存在一定的种属差异。代谢表型实验中发现HK-5在人肝微粒体中主要经CYP3A4,CYP2D6和CYP2A6三种亚酶催化代谢。结论 HK-5在人和SD大鼠肝微粒体中有相近的T1/2和CLint,后期体内代谢实验可选用SD大鼠进行研究;HK-5由多种CYP亚酶代谢,代谢性药物相互作用发生概率降低。

LC-MS/MS研究异羟肟酸类化合物F1在大鼠体内的药动学

目的建立测定大鼠血浆中F1含量的LC-MS/MS方法,研究F1在大鼠体内的药动学和生物利用度。方法大鼠分别经灌胃(10 mg·kg^(-1))、静脉注射(5 mg·kg^(-1))给药后,运用所建立的LC-MS/MS测定其血药浓度,选用DAS2.0软件求算药动学参数,根据灌胃、静脉注射给药药-时曲线下面积和给药剂量,计算F1的绝对生物利用度。结果灌胃和静脉注射后ACU_(0-t)分别为(27.052±10.068)和(153.878±88.777)ng·h·mL^(-1);AUC_(0-∞)分别为(31.425±9.261)和(179.054±116.794)ng·h·mL^(-1);MRT_(0-t)分别为(10.722±4.335)和(2.398±1.344)h;MRT_(0-∞)分别为(15.651±5.917)和(6.925±7.013)h;t_(1/2)分别为(4.294±1.534)和(6.052±3.633)h;ρ_(max)分别为(18.394±17.856)和(219.079±142.207)ng·mL^(-1)。F1在大鼠体内的绝对生物利用度为8.79%。结论建立了可用于测定大鼠血浆中F1的含量的方法,实验结果能指导F1进行结构优化,改善F1在体内的药动学特性,为提高F1的生物利用度提供实验依据。