血液透析糖尿病患者自体动静脉内瘘失功影响因素及预测模型临床研究

目的:探讨血液透析糖尿病患者自体动静脉内瘘(AVF)失功的影响因素,建立预测模型并进行验证。方法:选取接受血液透析的糖尿病患者105例,根据血液在透析过程中的流动情况分为AVF失功组(58例)和AVF通畅组(47例)。采用倾向性评分匹配调整均衡性,调整后两组均38例。采用多因素Logistic回归分析血液透析糖尿病患者AVF失功的影响因素。采用R软件构建列线图并进行验证。结果:与AVF通畅组比较,AVF失功组患者有低血压史、营养不良、血肿、前臂动静脉内径<4 mm以及HbA1c≥7%的比例较高,且PTH、CRP、血清铁、血小板、血钾升高,透析血流量降低(均P<0.05)。有低血压史、营养不良、血肿、前臂动静脉内径<4 mm、HbA1c≥7%、血清铁>90μg/dl是血液透析糖尿病患者AVF失功的独立危险因素(均P<0.05)。构建列线图模型后,验证结果显示模型在预测血液透析糖尿病患者AVF失功方面具有良好的区分度与拟合度,准确度较高。结论:有低血压史、营养不良、血肿、前臂动静脉内径<4 mm、HbA1c≥7%、血清铁>90μg/dl是血液透析糖尿病患者AVF失功的独立危险因素。所构建的列线图模型准确度较高。

黄芪多糖对小鼠慢性肾功能衰竭保护作用的机制研究

目的探讨黄芪多糖(APS)对慢性肾功能衰竭小鼠的保护作用及其潜在分子机制。方法雄性Balb/c小鼠采用5/6肾切除建立慢性肾功能衰竭模型,随机分为模型组和黄芪多糖干预组(APS组),另设假手术组,每组10只。术后正常喂养7周,APS组给予黄芪多糖100 mg/(kg·d)灌胃,余组均给予等体积生理盐水。4周后收集粪便、尿、血液、肾脏与结肠组织样本,测定血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量;组织固定包埋切片后予以HE、天狼星红染色进行病理分析;Western blot、免疫组织化学染色检测紧密连接蛋白-1家族(Claudin-1、Occludin-1、ZO-1)及p-NF-κB表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;实时荧光定量PCR检测长链非编RNA(lnc RNA)Arid2-IR及IL-1β、IL-6、TNF-α的表达变化以及各组小鼠粪便的菌群变化。结果APS组小鼠血Scr、BUN、24 h尿蛋白较模型组下降;HE染色显示APS组肾脏、结肠组织病理损伤均较模型组改善;天狼星红染色可见APS组纤维化程度明显改善;Western blot、免疫组织化学染色结果可见APS组结肠组织紧密连接蛋白-1家族表达量升高及肾组织p-NF-κB蛋白表达量较模型组明显下降;ELISA结果显示APS组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平较模型组明显下降;实时荧光定量PCR结果可见APS组肾组织中lnc RNAArid2-IR、IL-1β、IL-6和TNF-α的相对表达水平较模型组明显下降,同时APS组乳酸杆菌、双歧杆菌的表达量较模型组增高,而大肠杆菌的表达量较其下降。结论黄芪多糖可能通过调控lncRNA Arid2-IR/NF-κB信号轴调节小鼠肠道菌群,从而修复肠道屏障损伤,维持正常肠道生理环境,改善慢性肾功能衰竭。

肾纤维化相关关键候选基因的生物信息学筛选

目的基于生物信息学方法分析肾纤维化小鼠模型的转录组测序数据并加以体内验证,寻找关键候选基因。方法从GEO数据库下载转录组数据,挖掘单侧输尿管梗阻(UUO)2 d和UUO 8 d模型组中差异表达明显的基因,利用R软件包对筛选出的差异表达基因进行基因功能富集分析;采用加权基因共表达网络分析(WGCNA)方法构建共表达模块,并对基因进行Cytoscape可视化分析,制作蛋白相互作用网络图(PPI);对中枢基因结合文献和功能分析,筛选出与肾纤维化进程相关度较大的基因行Real-time PCR mRNA水平检测,采用蛋白质印迹技术、免疫组织化学进行蛋白水平分析。结果筛选出从急性肾损伤(AKI)进展至慢性肾脏病(CKD)病程中差异表达的1 503个基因,基因集富集分析(GSEA)结果显示,这些基因主要富集在上皮细胞转分化与炎症应答信号通路等;通过WGCNA构建的4个基因共表达模块,筛选出与肾纤维化关系密切的20种中枢基因,从中挑选出的6个核心基因验证结果显示,RELB、υCAM1和Pdlim1 3种基因随着肾纤维化程度的加重,表达水平均明显上调(P<0.05)。结论 RELB、υCAM1和Pdlim1可作为肾纤维化相关关键候选基因,为寻找CKD的早期诊断和治疗靶标提供新线索。

肾舒胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏mTOR、beclin-1自噬通路的表达及意义

目的:研究肾舒胶囊对STZ诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的改善作用及机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、肾舒胶囊低剂量组、肾舒胶囊高剂量组、厄贝沙坦组,每组10只。除空白对照组外,余组予高脂高糖饲料喂养2个月后,连续5天腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)诱导建立DN模型。空白对照组、模型组大鼠予以生理盐水灌胃,肾舒胶囊低、高剂量组大鼠予以肾舒胶囊溶液灌胃,厄贝沙坦组大鼠予以厄贝沙坦溶液灌胃。1周后,检测各组小鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)指标,采用HE和PAS染色检测肾脏病理组织改变,以Western Blot检测p-mTOR、beclin-1蛋白含量,以Realtime-PCR检测beclin-1 mRNA表达水平。结果:(1)肾功能指标:与空白对照组比较,模型组大鼠Scr、BUN明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,肾舒胶囊低、高剂量组和厄贝沙坦组大鼠Scr、BUN水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与厄贝沙坦组比较,肾舒胶囊低剂量组与高剂量组Scr、BUN有所下降,但差异无统计学意义;与肾舒胶囊低剂量组比较,肾舒胶囊高剂量组大鼠Scr、BUN降低,差异无统计学意义。(2)肾脏形态学:HE和PAS染色结果显示,空白对照组大鼠肾小球、肾小管和肾间质形态结构无异常改变;模型组大鼠肾组织可见炎性细胞浸润,肾小球系膜细胞增生,基底膜增厚,肾小管上皮细胞空泡变性,管腔扩张。肾舒胶囊低、高剂量组及厄贝沙坦组大鼠可见肾小球、肾小管、肾间质病理损伤程度减轻,其中肾舒胶囊高剂量组大鼠肾脏损害明显改善。(3)自噬通路因子:与空白对照组比较,模型组p-mTOR、beclin-1蛋白表达水平和beclin-1 mRNA表达水平均显著增高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,肾舒胶囊低、高剂量组及厄贝沙坦组大鼠肾组织p-mTOR、beclin-1蛋白表达水平和beclin-1 mRNA表达水平均有不同程度下降(P<0.05或P<0.01)。结论:肾舒胶囊能明显改善糖尿病大鼠早期肾脏损害,其机制可能与抑制肾组织mTOR、beclin-1的表达水平有关。

肾舒胶囊通过AKT/NF-κB信号通路改善大鼠糖尿病肾病纤维化作用研究

目的探讨肾舒胶囊对2型糖尿病肾病大鼠的治疗作用以及对AKT/NF-κB信号通路的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为4组(n=10),即正常组、模型组、肾舒胶囊低剂量组、肾舒胶囊高剂量组,对照组予以正常饲料喂养,造模组予以高糖高脂饲料(在普通饲料的基础上加入10%的白砂糖和20%的猪油)喂养2个月后,予以腹腔注射链脲佐菌素(streptozoticin,STZ)35 mg/kg并诱导糖尿病肾病模型,造模成功后,治疗组分别予以肾舒胶囊[0.018 g/(kg·d),0.3 g/(kg·d)]灌胃。连续给药1周后检测大鼠体质量、血清肌酐、血清尿素氮、24 h尿蛋白等指标;HE染色观察肾脏病理变化,PAS染色观察肾脏组织中的糖原和黏液变化;采用Western Blot检测各组大鼠肾脏组织AKT、p-AKT、NF-κB(p65)、p-NF-κB(p-p65)、α-SMA的表达水平。结果与模型组相比,肾舒胶囊可显著改善糖尿病肾病大鼠肾功能、24 h尿蛋白定量和肾脏病理,下调肾脏组织中p-AKT、p-NF-κB p 65、α-SMA的表达。结论肾舒胶囊可改善糖尿病大鼠肾脏损害,其机制可能与抑制AKT/NF-κB信号通路改善纤维化水平有关。

db/db小鼠基因型鉴定方法的比较研究

目的比较不同方法鉴定db/db小鼠基因型的特点。方法采用酶切法、测序法和高分辨率溶解曲线(HRM)对db/db小鼠基因型进行鉴定,并对不同方法的特点进行比较研究。结果3种方法都能稳定、可靠地鉴定db/db小鼠基因型,其中测序法准确性高,操作简单,但费用相对偏高。酶切法操作烦琐,耗时长,存在一定假阳性。HRM节约成本,更简便、快速,尤其适用于大批量鉴定。结论酶切法、测序法和HRM各有特点,可结合现有条件选择适当方法进行鉴定。