谷胱甘肽改善卒中后抑郁和慢性社会挫败应激小鼠行为及其机制研究

目的探究抑郁症的潜在致病机制及谷胱甘肽的改善作用。方法6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠分为3组(n=20):无处理对照(SHAM)组、卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)模型组和慢性社会挫败应激(chronic social defeat depression,CSDS)模型组。通过旷场实验、高架十字实验、悬尾实验、糖水偏好实验等验证模型小鼠是否有抑郁样行为表现,取2种模型小鼠以及对照小鼠内侧前额叶皮层(medial prefrontal cortex,mPFC)进行神经递质靶向代谢组学测序。通过主成分分析(principle component analysis,PCA)、相关性分析等方法探索各组小鼠代谢物表达情况、筛选差异代谢物,利用京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)预测与抑郁模型相关的代谢通路,并对关键差异代谢物谷胱甘肽(glutathione,GSH)的表达以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)等铁死亡指标进行检测,外源性补充GSH观察模型小鼠抑郁样行为是否改善。结果神经递质靶向代谢组学分析结果显示3组小鼠代谢水平存在明显差异,在mPFC检测到的38种代谢物中,有6种在PSD组中特异性降低,有4种在CSDS组中特异性降低,而GSH、L-天冬酰胺和L-赖氨酸在PSD和CSDS组均表现出明显下降(P<0.05)。KEGG分析结果显示差异代谢物涉及到的主要通路有谷胱甘肽代谢,β-氨基酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等通路。还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(glutathione/oxidized glutathione,GSH/GSSG)试剂盒检测发现两种抑郁模型小鼠mPFC还原型GSH明显减少(P<0.05),铁死亡指标检测发现与对照组比较,两种抑郁模型小鼠存在MDA升高并且GPX4阳性细胞比例显著减少的表型(P<0.05),而对抑郁模型小鼠外源补充GSH可增加小鼠高架十字实验开臂时间和旷场实验中央区时间(P<0.05),并且降低悬尾实验静止不动时间(P<0.05),显著改善抑郁样行为表现。结论PSD以及CSDS小鼠脑组织存在13种代谢物失调,其中谷胱甘肽代谢异常引发的铁死亡可能在抑郁症发生中具有重要作用,外源性补充谷胱甘肽可以改善小鼠抑郁样行为。

Toll样受体4介导内毒素对内皮细胞NF-κB的激活

为探讨Toll样受体 4 (Toll likereceptor 4 ,TLR4 )在内毒素 (LPS)对内皮细胞NF κB激活中的作用 ,以LPS刺激培养的ECV 30 4细胞为模型 ,运用RT PCR和蛋白质印迹技术检测了内皮细胞TLR4的表达及LPS对其表达的影响 .同时利用基因转染和抗体阻断方法进一步观察了TLR4在LPS对内皮细胞NF κB激活中的作用 .研究发现 ,LPS能明显上调内皮细胞TLR4的表达 ,呈一定的时间和剂量依赖性 .转染TLR4的功能突变体和运用抗TLR4单抗能明显抑制LPS对内皮细胞NF κB的激活 .提示TLR4介导了LPS对内皮细胞NF κB激活 ,可能在LPS对内皮细胞激活

急性脑梗死患者外周血单核细胞TLR4表达及其与TNF-α、IL-6的相关性

目的观察急性脑梗死患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达及其与TNF-α、IL-6浓度的相关性,初步探讨TLR4在急性脑梗死缺血性炎性损伤中的作用,为临床治疗脑梗死提供新的思路。方法分别运用Tapman实时定量PCR及流式细胞仪法检测39例急性脑梗死患者外周血单核细胞(淋巴细胞、单核细胞)TLR4 mRNA、蛋白的表达,用ELISA法测定血清TNF-α、IL-6的浓度,与35例同期正常对照及32例脑动脉粥样硬化患者比较。结果脑梗死组发病第3天TLR4表达、血清TNF-α、IL-6浓度均显著高于正常对照组和动脉粥样硬化组(P<0.01)。TLR4表达与血清炎性因子TNF-α、IL-6浓度变化呈正相关(P<0.01)。结论研究提示TLR4可能在急性脑梗死缺血性炎症性损伤中具有重要的作用,其机制可能是通过上调TLR4表达促使炎性因子产生分泌来介导脑缺血炎性损伤。

急性脑血管病的代谢紊乱特点及相关因素的多元回归分析

目的 探讨急性脑血管病时代谢紊乱的特点和进一步寻找其相关因素 ,为脑血管病的防治提供依据。方法 在对2 0 2名正常人及 6 2 3例急性脑血管病 (381例脑梗死、2 4 2例脑出血 )患者住院的基线资料进行回顾性分析的基础上 ,进行多元回归分析。结果 (1 )急性脑血管病患者的年龄、体重指数 (BMI)、血压、血糖、低密度脂蛋白 (LDL)值均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。 (2 )脑梗死、脑出血患者中 ,伴高血压者分别为 91 .7%、92 .1 % ;伴高血糖者分别为 4 9.3%、36 .8% ;伴高甘油三酯 (TG) /低高密度脂蛋白 (HDL)分别为 2 9.7%、36 .0 %。 (3)脑梗死、脑出血患者中 ,合并代谢综合征者分别占 1 2 .1 %、1 9.4 % ;合并两种代谢紊乱者分别占 4 4 .3%、39.7% ;合并 1种代谢紊乱者分别占 39.9%、38.6 % ;无代谢紊乱者仅分别占 3.7%、2 .3%。同时 ,除合并代谢紊乱者血压均显著高于对照组及无代谢紊乱者外 ,合并两种以上代谢紊乱患者中BMI、血糖、TG、LDL均高于对照组及无代谢紊乱者 (P <0 .0 5 )。 (4 )相关分析显示 ,代谢紊乱因素中 ,年龄、血糖、血压、BMI及LDL与急性脑血管病明显相关。结论 急性脑血管病患者多伴有代谢紊乱 ,提示有效控制代谢紊乱 。

硫芥对大鼠淋巴细胞毒性作用的研究

目的 探讨硫芥中毒对淋巴细胞的作用机制 ,为寻找硫芥中毒早期改变的敏感指标和提高中毒的防护水平奠定基础。方法 建立硫芥中毒淋巴细胞模型 ,分别用单细胞凝胶电泳法检测淋巴细胞DNA损伤 ;用镀铜镉还原法和一氧化氮合成酶试剂盒检测中毒后淋巴细胞培养上清液一氧化氮 (NO)和一氧化氮合酶 (NOS)的变化 ;用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果 硫芥中毒后 4h淋巴细胞DNA明显损伤 ,72h最明显 ,5d开始恢复 ;中毒后NO、NOS的变化相似 ,4h就明显升高 ,1d达到峰值并于 3d开始恢复。NOS的抑制剂 (L NAME)可明显降低NO的含量 ,但对实验组NOS的活性无明显影响。流式细胞仪检测结果显示 4h淋巴细胞凋亡明显 ,而 1、3d几乎无凋亡产生。琼脂糖凝胶电泳结果表明 4h出现典型的细胞凋亡的征象 ,而 1、3d则表现为细胞死亡。结论 (1)SCG法敏感、经济、简便 ,可用于硫芥中毒细胞毒性、中毒程度的评价 ,在早期诊断上有良好的应用前景 ;(2 )中毒后因NOS的活性升高导致NO的升高而产生细胞毒作用可能是硫芥的中毒机制之一 ;(3 )细胞凋亡参与了硫芥的中毒过程 ,亦可能是其中毒机制之一。

脑动脉狭窄支架成形术后即刻头颅CT的表现及临床意义

目的总结脑动脉支架置入术后即刻头颅CT的影像表现特点,并探讨其临床意义。方法回顾性分析行脑动脉支架置入术后即刻头颅CT检查患者102例的影像学特点,并根据不同表现进行分类。与术前CT相比,将术后头颅CT表现分为3型:Ⅰ型为未见明显异常或局部大血管强化;Ⅱ型为梗死灶内异常强化;Ⅲ型为脑出血,包括单独的脑实质出血及脑实质出血合并蛛网膜下腔出血。最后分析了不同的临床处理方法及临床结局。结果102例即刻头颅CT检查患者包括颅内血管支架成形术67例;颅外血管支架成形术35例。其中头颅CTⅠ型82例(80.4%);Ⅱ型13例(12.7%);Ⅲ型7例(6.8%)。2例为脑实质出血,1例为蛛网膜下腔出血合并脑实质出血,4例为蛛网膜下腔出血。Ⅰ型常规抗凝、抗血小板治疗;Ⅱ型继续常规抗凝、抗血小板治疗基础上复查头颅CT;Ⅲ型均停用常规抗凝、抗血小板治疗,24h后复查头颅CT,未见出血量增加后恢复抗凝、抗血小板治疗。Ⅰ、Ⅱ型患者术后无新的介入相关并发症;Ⅲ型患者5例痊愈出院,2例即刻外科手术后,与术前相比均遗留较重的偏瘫出院。结论脑动脉支架成形术后即刻头颅CT非常必要,能及时发现颅内出血。同时,根据不同表现及时进行分类处理,可获得好的临床结局。

芥子气对淋巴细胞DNA损伤的研究

分离大鼠脾淋巴细胞培养２４小时后，经１０～１０００μｍ芥子气染毒３０ｍｉｎ继续培养３ｄ，以单细胞凝胶电泳法检测ＤＮＡ损伤。结果显示中毒后淋巴细胞ＤＮＡ迁移率和受损细胞百分率呈时间和剂量依赖关系；中毒４ｈ，高、中剂量与对照组相比呈显著性差异（Ｐ＜０．０１）。提示单细胞凝胶电泳法检测ＤＮＡ损伤用作评价芥子气细胞毒性指标的可能性。

国产盐酸洛美利嗪治疗偏头痛的随机、对照及双盲法研究

目的:盐酸洛美利嗪作为治疗偏头痛的药物,已在国外上市,但未在中国上市销售,为指导临床医师合理用药,评价国产盐酸洛美利嗪治疗偏头痛的疗效及安全性。方法:以在大坪医院神经内科门诊就诊的偏头痛患者为研究对象,按公认统一的纳入标准及排除标准,采用随机、双盲、以盐酸氟桂利嗪为阳性对照药进行试验,共入选病例65例,完成病例59例,分试验组(盐酸洛美利嗪)和对照组(盐酸氟桂利嗪),其中试验组31例,对照组28例。清洗期每日早晚给予安慰剂两粒,分早餐后、睡前服用。治疗期,试验组患者早餐后服用盐酸洛美利嗪胶囊和安慰剂各1粒,睡前服盐酸洛美利嗪胶囊和安慰剂各1粒;对照组早餐后服安慰剂2粒,睡前服盐酸氟桂利嗪胶囊2粒,疗程共56d。根据头痛评分变化判断疗效,计算有效率,并记录不良反应。结果:试验组的总有效率为78.13%;阳性对照组总有效率为75.86%。两组差异无显著性意义。不良反应发生率分别为9.67%和6.90%,差别差异无显著性意义,未发现严重的不良反应。结论:国产盐酸洛美利嗪治疗偏头痛安全有效。

Toll样受体4胞外区在毕赤酵母系统的初步表达及鉴定

目的 利用毕赤酵母系统对Toll样受体 4(Toll likereceptor 4,TLR4)胞外区进行初步表达及鉴定 ,为相关研究奠定基础。方法 用PCR获得扩增TLR4胞外区DNA ,经序列分析后 ,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体中 ,构建pPIC9K/TLR4胞外区的重组质粒 ;转化酵母宿主菌GS115后 ,G418筛选多拷贝转化子 ;菌落PCR鉴定后 ,摇菌培养 ,1%甲醇诱导表达。SDS PAGE分析表达产物 ,并利用Westernblot法鉴定。结果 PCR扩增的TLR4胞外区基因序列与GenBank数据库中的序列一致 ,构建的重组质粒经酶切及测序证实 ,成功构建了pPIC9K/TLR4胞外区的重组质粒。经过G418筛选后 ,共获得 2 0 0个高拷贝转化子 ,菌落PCR鉴定其中 5个克隆 ,能扩增出特异的TLR4胞外区基因片段 ,表明TLR4胞外区基因完全整合到毕赤酵母中 ;SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中 ,薄层凝胶扫描分析显示诱导表达 4d的表达量达上清的 5 0 3 5 % ,Westernblot分析表明表达蛋白能与TLR4单抗结合。结论 利用毕赤酵母系统成功地对TLR4胞外区进行了表达及鉴定 ,为进一步筛选高表达菌株、蛋白纯化、功能研究奠定基础。

SELEX筛选LPS寡核苷酸适配子方法的建立

目的建立SELEX筛选LPS的适配子方法,为后续大规模筛选奠定基础。方法在成功构建含40个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库的基础上,优化了扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件;同时对液相筛选与固液相筛选两种方法进行比较,确定最优的筛选方法并进行4轮筛选。结果确定了扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应的最佳条件,采用液相筛选方法经过4轮筛选,随机单链DNA(ssDNA)文库与内毒素(LPS)的结合率明显上升,CPM值与初始库相比差异有统计学意义。结论建立了SELEX筛选LPS寡核苷酸适配子的筛选方法。

临床进修医师康复医学意识调查及思考

目的:鉴于目前基层医院临床康复工作薄弱的现状,通过对临床进修医师康复医学知识调查,以了解临床进修医师对康复医学的认识和探讨继续教育的必要性及可能的方法。方法:对2002-03/2004-03在大坪医院进修的186名医师进行问卷调查。共采用13个项目,提供多项选择+开放式问答形式,答卷者可单选、复选、开放式问答。收集问卷并进行分析。结果:在进修前对康复医学知识多数仅粗略了解,占71.5%,多数人仅认为康复医学知识与自己从事的专业有一定联系,占76.3%,同时对康复医学知识的认识存在一些误区。通过学习后,多数人对康复医学知识认识上有明显改变,认为重要的占86.6%。而且大多数愿意在今后工作中开展康复医学工作。绝大多数愿意今后参加康复医学的继续教育,占93.0%.认为目前中国基层开展工作不好的原因主要与经费、医疗水平及认识不够有关,而且在心理、语言康复方面是薄弱环节。多数人认为在中国开展康复服务的方式应以社区为主。结论:针对国情,利用多种手段开展康复医学继续教育非常必要。

抗人Toll样受体4合成肽单克隆抗体的制备与鉴定

在对Toll样受体 4(TLR4)B细胞优势表位预测的基础上 ,合成该B细胞表位多肽 ,并以此为抗原免疫BABL/C小鼠 ,经鼠 鼠杂交 ,ELISA筛选 ,有限稀释克隆化 ,得到一株分泌抗TLR4合成肽的杂交瘤细胞株B4,腹水效价为 1∶10 0 0 0 0。其免疫球蛋白为IgG2 ,k型。ELISA鉴定表明该抗体能识别TLR4+ 性细胞 ,Westernblot分析显示在分子量约 90kD处呈现单一免疫色带。

普罗布考对氧化修饰低密度脂蛋白诱导的人内皮细胞TOLL样受体4表达及单核内皮细胞黏附功能的影响

目的:探讨普罗布考对氧化修饰低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞TLR4表达及其黏附功能的影响,为进一步研究普罗布考抗动脉粥样硬化的机制,发现抗动脉粥样硬化形成的新靶点提供理论依据。方法:应用RT-PCR,WesternBlot技术检测了普罗布考对ox-LDL诱导的细胞TOLL样受体4(toll-likereceptor4,TLR4)表达的影响,同时用孟加拉玫瑰红活细胞染色法观察不同浓度普罗布考对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)对单核细胞黏附的影响,并利用相关性检验分析两者间的相关性。结果:ox-LDL能明显上调HUVECsTLR4的表达,并呈一定的剂量依赖性(t=3.04～12.52,P<0.01)。普罗布考呈浓度依赖方式抑制ox-LDL诱导HUVECsTLR4表达,同时也能明显抑制ox-LDL诱导的HUVECs对单核细胞黏附(t=5.30,19.23,P<0.01)。相关性分析显示两者间有明显的正相关性(r=0.996,P<0.01)。结论:普罗布考除具有调脂作用外,尚可通过抑制ox-LDL诱导的内皮细胞TLR4受体的表达和抑制单核细胞与内皮细胞黏附聚集,发挥抗炎作用;TLR4可能成为防治动脉粥样硬化的新靶点。

颅内支架置入术后蛛网膜下腔出血并发症的诊治

目的探讨颅内支架置入术后蛛网膜下腔出血(SAH)的发生及处理方法。方法回顾性分析2007年1月至2008年5月本院开展颅内支架置入术后发生3例SAH的临床资料、发生特点、处理方法及临床转归。结果颅内支架置入术后SAH的发生率为4.5%(3/66),3例患者早期复查头颅CT未见出血增加,于24h后恢复抗凝、抗血小板治疗,3例患者出血分别于24h、3d和5d吸收,随访至今无明显异常。初步分析显示,SAH发生与血管狭窄率、支架释放前是否球囊扩张等明显相关。结论颅内支架置入术后发生SAH机制复杂,及时有效的处理可获得满意的临床疗效。停用和恢复抗凝、抗血小板的最佳时间需要大样本、随机多中心的临床研究。

神经病学双语教学现况调查及影响因素探讨

为了解神经病学双语教学的现状并探索可能的影响因素,对我院医学本科学员进行问卷调查,为进一步改进神经病学双语教学方法和深化教学改革提供科学依据。

PBL 3阶段教学法在神经内科见习教学中的应用

在经典的PBL教学法基础上,改进创立了PBL 3阶段教学法,并将之运用于神经内科见习教学中,对学习效果进行了评价。PBL 3阶段教学法能调动学生学习的积极性、主动性和创造性,锻炼学生的表达能力、结合医学知识的学习能力,同时也能提高学生分析问题和解决问题的能力,明显提高了神经内科见习教学的效果。

Toll-like receptors研究进展

TLR是近年来新发现的一种同源于果蝇Toll的蛋白分子 ,在宿主的天然免疫中具有重要作用。研究发现 ,它既可作为CD14作用的信号分子 ,又能直接作为LPS的受体介导细胞的活化 ,在LPS的跨膜信号转导中具有重要作用 ,成为LPS信号转导研究的热点之一。TLR相关研究的深入 ,可为临床内毒素休克、SIRS和MODS的防治提供新途径。