急性臭氧暴露对大鼠肺泡灌洗液中外泌体miRNA表达谱的影响

目的明确急性臭氧暴露后大鼠肺泡灌洗液来源的外泌体中微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的变化,并分析其与肺损伤的潜在关系。方法将成年雄性Wistar大鼠放入气体染毒舱内分别暴露于0、0.5和2 ppm臭氧6 h。实验结束后24 h麻醉大鼠,收集肺泡灌洗液并提取外泌体。采用miRNA-seq技术检测外泌体中差异表达的miRNA,使用miRDB数据库对组间差异表达Top 10 miRNA进行靶基因预测,并对靶基因进行Gene Ontology功能富集和KEGG Pathway分析。利用qRT-PCR方法对表达丰度较高且组内均一性较好的差异表达miRNA进行验证。结果与0 ppm组相比,0.5 ppm组大鼠肺泡灌洗液中外泌体miRNA有8个上调、55个下调,而2 ppm组中有32个上调、61个下调。与0.5 ppm组相比,2 ppm组大鼠肺泡灌洗液中外泌体miRNA有90个上调、74个下调。差异表达Top 10 miRNA的靶基因主要参与调控DNA结合、杂环化合物结合和影响转录等方面,并与癌症、MAPK、PIK3-AKT、TNF、ErbB、线粒体自噬和FoxO等信号通路密切相关。qRT-PCR结果表明测序结果基本可靠。结论急性臭氧暴露可导致大鼠肺泡灌洗液中外泌体miRNA表达谱发生变化,差异miRNA可能参与了臭氧暴露所致的肺组织炎症、肺损伤等病理进程。