获能前后水牛精子的差异蛋白质组分析

为了探索获能前后水牛精子的蛋白质动态变化,通过串联质谱标签(TMT)结合液质联用(LCMS/MS)分析技术,对获能前后水牛精子的总蛋白质进行定量分析。结果表明,获能前后水牛精子的差异表达蛋白质共有93个,获能后表达上调蛋白质52个,表达下调蛋白质41个。差异表达蛋白质参与了有性生殖、细胞骨架、转运和精子发生等生物学进程,也参与过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)和可溶性NSF附着蛋白受体(SNARE)等信号通路。经蛋白质互作网络分析,筛选出调节通路的中心蛋白(Hub)有拓扑异构酶2(TOP2A)、烯醇化酶3(ENO3)等。Western blot结果表明,囊泡相关膜蛋白4(VAMP4)和载脂蛋白C 3(APOC3)在水牛精子获能后表达量升高。

槲皮素缓解内质网应激(ERS)介导的水牛颗粒细胞凋亡

内质网应激(ERS)在颗粒细胞的凋亡中起重要作用,颗粒细胞的凋亡又是诱发卵泡闭锁的关键因素。槲皮素(QC)做为一种植物源性黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎等生物活性。研究表明QC可通过内质网应激保护细胞。为了解QC对水牛颗粒细胞的保护作用,初步阐明QC通过内质网应激缓解水牛颗粒细胞的凋亡机制。分析QC对细胞活力的影响,利用CCK-8试剂检测细胞活力,发现低质量浓度(1.0~2.5 mg/L)的QC能够增加细胞活力;使用内质网应激诱导剂衣霉素,在体外构建内质网应激模型,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,q-PCR检测内质网应激相关基因表达量情况,发现2.5 mg/L的衣霉素可促使内质网应激相关基因表达显著上升,细胞凋亡也显著增加;随后,探究QC对内质网应激条件下水牛颗粒细胞的保护作用,通过流式细胞术检测细胞凋亡情况,q-PCR和Western blot检测内质网应激以及细胞凋亡相关基因和蛋白的表达情况,发现QC预处理后,内质网应激相关基因的表达显著降低,细胞凋亡情况也得到缓解。综上,QC能缓解内质网应激诱导的细胞凋亡。

水牛PADI6重组蛋白多克隆抗体的制备及表达模式分析

为了解PADI6母源基因在水牛上的表达模式,初步阐明母源基因对卵母细胞的成熟和胚胎早期发育的作用,首先分析了PADI6基因在水牛上的表达情况,通过基因克隆,制备多克隆抗体,发现PADI6基因在不同物种中进化具有保守性。将所得PADI6多克隆抗体进行特异性表达分析,发现PADI6仅在卵母细胞中表达。为进一步了解PADI6母源基因在早期胚胎的表达情况。对水牛PADI6母源基因转录水平进行了分析,发现转录产物在GV期和MⅡ期卵母细胞中大量积累,在桑椹胚和囊胚阶段显著降低。上述研究结果表明,母源基因PADI6对卵母细胞的成熟和胚胎早期发育至关重要。