母牛超数排卵的研究进展

超数排卵技术作为一项实用的繁殖技术 ,在牛的改良和育种中应用广泛。常用的超排程序是 2 0世纪 80年代初成型并推广使用的。现在超排技术基本稳定 ,近 10年国际胚胎移植协会的统计资料表明 ,每头供体牛平均可获得 6枚可用胚。在超排研究中 ,人们最初以减少个体差异和提高受精率为中心 ,逐步转向从激素、程序和饲养管理方面寻找简化实用的改进方法 ,并且对预测个体的超排效果作了一些探索。文章从对供体母牛超排前的预测、超排方案的细化、影响超排效果的因素以及改进超排的思路 4个方面对超排研究进行了论述。

胚胎移植技术的现状与展望

统计与分析了1991～2000年国际胚胎移植状况,结果表明胚胎移植已成为畜牧产业中最活跃的领域之一。胚移比例最大的依然是牛,其它种类的动物胚胎移植,如:绵羊、山羊、猪、马、鹿、美州驼、羚羊等,也十分活跃。牛的胚胎移植,有几个重要指标分析结果如下:(1)供体牛的品种分布基本相同,肉牛与奶牛所占比例接近,但不同国家之间差别很大;(2)每头供体所得可用胚数在5～6枚之间;(3)鲜胚移植与冻胚移植的比例基本持平,但近年来冻胚移植的比例稍大于鲜胚移植;(4)通过IVF体外方式生产胚胎数目有所增长,目前每年大约在3～4万枚;(5)妊娠率:鲜胚移植妊娠率在60％以上,冻胚移植妊娠率在50％以上,IVF体外方式生产胚胎妊娠率在40％左右;(6)胚胎移植技术的发展状况在全世界分布不均衡,北美和欧洲胚移技术最成熟;(7)胚胎贸易有所增长。最后,对该技术存在的问题与发展前景提出了探讨和展望。

母牛同期发情新技术

上个世纪60年代,同期发情技术开始得到人们的认识和研究,包括牛、羊、马、猪等,其中以牛的同期发情研究较多.最初牛的同期发情技术主要是应用孕激素及其类似物,经口服、皮下注射、埋植、阴道栓等方法,停药后药物抑制卵泡发育的作用消失,新的卵泡发育实现同期发情.

无血清培养山羊内细胞团的研究

对32只关中奶山羊进行超排处理,获得胚胎263枚,其中囊胚122枚。采用机械法、酶消化法和免疫外科法分离囊胚83枚,得到内细胞团(ICM)65个。将ICM培养于小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,研究含血清和无血清条件下ICM的增殖规律,并比较添加不同生长因子对ICM增殖的影响。结果表明,无血清培养时,ICM细胞增殖相对较慢,分化减少;添加LIF、bFGF、两种同时添加或均不添加对原代ESC样集落形成率的影响不显著(P>0.05),但添加10 ng/mL bFGF稍微有助于ICM增殖。山羊ICM适宜于无血清培养。

胚胎干细胞起源与本质的探讨

胚胎干细胞(ESC)建系取材包括桑椹胚的卵裂球、囊胚的内细胞团(ICM)、上胚层细胞和原始生殖细胞(PGCs),甚至从新生鼠睾丸细胞也分离得到ES样细胞。传统观念常常把ESC等同于ICM细胞,也有学者认为ESC更像上胚层细胞,而在已知的基因标记方面,ESC所具有的特征更接近体内早期生殖细胞。不清楚ESC最接近的体内细胞类型与本质,可能是制约许多品系小鼠和大多哺乳类动物建系成功率提高的原因之一。综述了胚胎多能性细胞、早期生殖细胞和ESC的研究进展及相互关系,发现ESC可源于多种细胞类型。目前仍难以确定ESC最接近的体内细胞类型,进一步应通过研究不同体内细胞类型源ESC系间的差异,以弄清ESC本质,为提高ESC建系效率提供理论支持。

奶牛不排卵状况的研究综述

卵泡生长可分为三个阶段:卵泡出现;卵泡的选择优势化与闭锁分离;卵泡排卵。不排卵的情况可分为:①生长卵泡不能生长至“分离期”。原因可能是极度的营养缺乏。②卵泡可生长到“分离期”,但没有达到排卵体积。这方面研究得较多,认为这类牛比正常牛有更强的E_2对GnRH/LH的负反馈,在营养不良或吮乳时可引起这类不排卵状况。③卵泡生长的最终体积大于排卵卵泡,这类牛的特征是下丘脑对E_2的正反馈作用不敏感;高产奶牛常见。对于第一种情况,关键在于预防,提高育成期的饲管水平。后两种常见的不排卵状况是由于下丘脑对E_2反应的敏感性改变;常用增加血液循环中P4的浓度改变GnRH/LH释放的脉冲以协助卵泡最后阶段的生长,或重新建立下丘脑对E_2的正反馈来治疗。

免疫外科法分离山羊囊胚内细胞团的研究

分别用关中奶山羊脾脏细胞和胎儿成纤维细胞,免疫新西兰白兔各2只,共4只.通过3次静脉注射,每次注射4×108个细胞,间隔10 d,最后一次注射10 d后心脏采血制备抗血清,结果获得的4份抗血清均具有细胞毒性,由脾脏细胞免疫获得的抗血清溶解细胞的效价稍高.超排关中奶山羊24只和波尔山羊3只,6～9 d采胚共获得胚胎240枚,其中囊胚106枚,结果显示配种后7～9 d胚胎的发育阶段适宜于分离内细胞团（ICM）.细胞毒性试验表明,抗血清对关中奶山羊红细胞、囊胚和波尔山羊囊胚均具有细胞毒性作用.通过比较抗血清50%溶解山羊红细胞效价与溶解囊胚滋养层细胞效价的差异,发现后者的适宜效价是抗血清50%溶解山羊红细胞效价的22～23倍,表明采用易于获得的山羊红细胞作预试验可以为免疫外科分离山羊ICM提供抗血清稀释比例参考.免疫外科法分离ICM采用两步法进行,获得最佳参数如下：抗血清稀释比例为1∶4～1∶15,补体稀释比例为1∶20,先在抗血清中作用30 min,再在补体中作用20～30 min,吹打除去溶解的滋养层细胞后即可获得ICM.分离得到的ICM形态特征与胚胎质量密切相关.山羊ICM接种于丝裂霉素处理过的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层后,2 d内贴壁.4～7 d后,ICM增殖为胚胎干细胞样集落,其周围出现大量空泡样细胞.

胚胎工程技术及其在畜牧业中的应用

胚胎工程技术研究的目的,是对哺乳动物的胚胎在体外进行人为控制操作,让其继续发育,进而获得优良或珍稀动物个体,并应用这类技术进行基础研究和应用开发性研究。文章主要叙述了胚胎移植、胚胎冷冻保存、胚胎分割、体外受精、性别鉴定及控制、转基因动物、细胞核移植、胚胎干细胞和胚胎嵌合等胚胎工程技术及其在畜牧业中的应用前景。

胚胎干细胞与胚胎生殖细胞

胚胎干细胞与胚胎生殖细胞同属于胚胎源的多潜能干细胞。胚胎干细胞是从附置前胚胎内细胞团分离而来的,而胚胎生殖细胞来自胎儿原始生殖细胞。二者在现代生命科学的各个领域都有着广阔的应用前景。对胚胎生殖细胞的特性,胚胎干细胞与胚胎生殖细胞的异同以及二者的应用前景作一综述。

人类原始生殖细胞的体外培养

为了探讨人原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的体外分离培养条件及相关影响因素,以小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层,室温下用1．25 g／L胰蛋白酶+0．2 g／L EDTA消化人胚胎组织5～9 min,或用1 g／L胶原酶(IV型)消化20～40 min,分离得到PGCs,然后用不同培养液培养,从培养液角度较为系统的研究原代培养人原始生殖细胞的条件。结果表明,在KSR培养液(体积分数15％ Knockout serum replacement+高糖DMEM+10 ng／mL人重组白血病抑制因子(LIF)+4 ng／mL人重组碱性成纤维细胞生长因子+10 ng／mL Forskolin)和STO(建系的小鼠胚胎成纤维细胞)条件培养液中培养的原代人原始生殖细胞,有较高的克隆形成率;培养液中添加不同质量浓度的LIF对克隆形成率影响差异不大。

人类胚胎干细胞研究述评

对人类胚胎干细胞(hESCs)的来源、培养方法、建系条件、生物学特性和鉴定方法、遗传操作及其需解决的问题进行了讨论。提出目前研究的重点在于揭示维持ES细胞多能性和自我更新的机理,进一步优化人类和其他哺乳动物类ES细胞的分离、培养、建系方法,探讨其定向分化机理,建立胚胎干细胞(ESCs)和胚胎生殖细胞(EGCs)的大规模快速扩增技术;完善hESCs向重要功能细胞(生殖细胞)分化的体系;单细胞比对分析ESCs、畸胎瘤细胞(ECSs)、EGCs、类胚体(EBs)、各级生殖细胞和成体细胞的基因及蛋白表达图谱,以探求生殖细胞、成体细胞、ESCs、ECSs、EGCs的本质区别,积极开展将ES细胞用于治疗人类疾病模型的研究。

胚胎干细胞与生殖细胞

目的:探讨生殖细胞的发生和细胞标记及胚胎干细胞向生殖细胞分化的进展及其关系。资料来源:检索Medline1950-01/2005-12相关胚胎干细胞和生殖细胞的文献,检索词“embryonicstemcells,germcells”,并限定文献语言种类为English。同时检索CNKI1990-01/2005-12相关胚胎干细胞与生殖细胞方面的文献,检索词为“胚胎干细胞,生殖细胞”,并限定语言种类为中文。资料选择:对资料初审,选取包括胚胎干细胞和生殖细胞方面的文献,开始查找文献。纳入标准:①胚胎干细胞。②生殖细胞。排除标准:综述、重复研究类文章。资料提炼:共收集到714篇关于胚胎干细胞和生殖细胞的文献,纳入23篇符合标准的文献。资料综合:胚胎干细胞是来源于着床前胚胎的一类未分化的全能性(多能性)干细胞。胚胎干细胞在一定条件下可以分化为包括生殖细胞在内的所有功能细胞。胚胎干细胞与各级生殖细胞及原始生殖细胞来源的胚胎生殖细胞具有一定的相似形。人类、小鼠和其它哺乳动物类胚胎干细胞的分离、建系和定向分化已经取得重要进展。而且胚胎干细胞可以诱导分化为包括生殖细胞在内的三个胚层的所有细胞类型。原始生殖细胞、胚胎干细胞和胚胎生殖细胞具有一些共同特性,可能共同来源于早期生殖细胞。结论:胚胎干细胞在一定条件下可以分化为包括生殖细胞在内的所有类型细胞。胚胎干细胞与各级生殖细胞有一定的相似形。

不同放栓处理对FSH超排奶山羊发生未成熟黄体退化的影响

对24只关中奶山羊采用“促卵泡素+前列腺素+孕酮”激素组合进行超排。依据不同的放栓处理,将其分为2组,每组12只。组Ⅰ在放栓后第15天早去栓,组Ⅱ在首次放栓后的第8天早换新栓,并于第15天晚去栓。结果表明:两组间平均黄体数和平均采胚数差异均不显著(P>0.05);两组间平均大卵泡数差异显著(P<0.05)。组Ⅰ有3只山羊发生未成熟黄体退化现象,2只伴有大卵泡;组Ⅱ有2只山羊发生未成熟黄体退化现象,且伴有大卵泡。对正常黄体和未成熟退化黄体的结构分析发现,未成熟退化黄体的特点是各种类型细胞萎缩,细胞间存在大量胶原纤维;大黄体细胞占优势,而小黄体细胞、成纤维细胞和上皮细胞很少见。

小鼠ES细胞在不同饲养层上培养nanog基因的表达水平与生长行为的研究

观察小鼠ES-D3细胞在MEF、新生牛睾丸支持细胞(nBTSCs)和新生兔睾丸支持细胞(nRTSCs)饲养层上生长4dnanog基因的表达水平和生长行为。RT-PCR分析显示,MEF饲养层上培养4d的ES-D3nanog基因含量高;nBTSC饲养层上培养nanog基因表达较低;而RTSC饲养层上培养nanog基因表达最低。结果显示:不同饲养层上的ES-D3细胞集落形态和培养4d分化程度有差异。在MEF饲养层上的ES-D3细胞培养4d,集落形态仍然很规则,细胞间紧密,集落表面少见大细胞,AKP染色强阳性。在nBTSC饲养层上的ES-D3细胞,集落界限清晰,AKP染色显示,集落大部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为弱阳性,可见集落表面分散有较多的大细胞。在nRTSC饲养层上的饲养层上的ES-D3,集落隆起不明显,集落界限不清晰,大部分集落形态不太规则,AKP染色显示集落中部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为全阴性,集落表面有较少的大细胞,集落周围有伸出的成纤维细胞。

利用优选的微卫星标记建立常用大小鼠品系的遗传监测体系

目的利用微卫星位点在不同近交系小鼠、大鼠中可能具有的多态性,分别筛选出可以一次性区别5种常用近交系小鼠和3种常用近交系大鼠的微卫星引物组合,为近交系小鼠和大鼠的遗传监测分析提供高效的微卫星位点与简易可靠的鉴定条件。方法通过查询相关数据库以及文献报道,按照已有明确的微卫星实验数据记录为原则,进行比对和筛选,组成了小鼠37个和大鼠24个微卫星位点库。通过PCR扩增和5%琼脂糖电泳鉴定,优化筛选出可以区分单一品系和所有品系的微卫星位点组合。结果小鼠优选出11个位点可用于5种常用近交系的鉴定,并建立了1个包含6个微卫星位点的库可用于5种小鼠品系的遗传监测;大鼠优选出6个微卫星位点,可用于3种常用近交系的监测。结论成功建立了一套可以区分常用5种小鼠和3种大鼠品系的微卫星监测方法。

HBV感染的动物模型研究进展

理想的HBV临床前动物模型,其肝细胞应包括允许HBV进入、cccDNA形成和与之相互作用的先天性及获得性免疫系统。由于HBV严格的种属特异性,自然只感染人类和黑猩猩,至今还没有建立一个有效的模型,能够真实地再现HBV感染的免疫和发病机制。综述了目前常用的五种小鼠模型:HBV转基因模型、高压水动力注射模型、AAV-HBV转染模型、cccDNA替代模型和人鼠嵌合肝脏模型。展望了未来可能出现的模型,比如hNTCP转基因的食蟹猴、恒河猴和猪等模型等。以期为研究人员选择这些模型提供参照,加快药筛进程、验证新疗法和更好解决HBV生物学发病机制等方面的问题。

大小鼠微卫星和SNP遗传检测的研究进展

随着分子生物学技术的迅速发展,微卫星与单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)技术已成为实验动物遗传检测的重要手段。微卫星与SNP作为一类新型的分子标记,相对于生化与免疫标记,具有快速和准确等优点。本文就微卫星与SNP在大鼠、小鼠遗传检测方面应用的进展做一综述。

最浪漫的事

10年前的一个黄昏，我兴冲冲地穿过学校门口的一条街，给女朋友买了一束漂亮的玫瑰花。这一束玫瑰好像是我大学4年中最奢侈的一笔消费。不是!因为我还必须请她吃一顿浪漫的生日大餐，这两笔开支是我半个月的生活费了。

拆迁如何做到让群众满意

开栏语为了交流思想,启迪思路,我刊2010年新开设了"总编会客室"栏目,就党政方针实施过程中的热点难点亮点问题进行对话式解读。欢迎广大读者提供话题。

HPLC法测定利胆石颗粒中橙皮苷含量

目的建立HPLC法测定利胆石颗粒中橙皮苷含量的方法。方法色谱柱:DiscoveryC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(17:83);检测波长:283nm。结果橙皮苷在0.13632～3.408μg范围内呈良好的线性关系,r>0.999;平均回收率99.6%,RSD为0.5%。结论所建立的方法简便、灵敏、准确,可用于测定利胆石颗粒中橙皮苷含量。