cTnI、AST及CK在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值的比较

目的:探讨心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值。方法:选取32只SD大鼠随机分为四组,心肌损伤组,单次背部皮下注射异丙肾上腺素;骨骼肌损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因;联合损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因及背部皮下异丙肾上腺素。正常对照组,不给予任何药物。予给药后24h,检测血清AST,CK及cTnI,常规HE染色观察骨骼肌和心肌受损情况。结果:心肌损伤组和联合损伤组血清cTnI均显著高于正常对照组和骨骼肌损伤组,差异具有统计学意义(P<0.01),而联合损伤组和心肌损伤组AST与骨骼肌损伤组比较,差异无统计学意义(P>0.05),心肌损伤组CK与骨骼肌损伤组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:cTnI在鉴别大鼠心肌及骨骼肌损伤上较AST、CK有较高的敏感性,并且在一定程度上能够降低误诊及漏诊率。

肝硬化时肝窦毛细血管化形成机制

目的:探讨肠源性内毒素血症在肝窦毛细血管化形成中的作用及其可能机制.方法:♂Wistar大鼠40只,完全随机分为模型组(n=32)与正常对照组(n=8),采用复合因素致肝硬化大鼠模型.模型组分别在饲养第2,4,6,8周末,正常对照组在实验开始时,经肠系膜上静脉末端穿刺测PVP,肝脏HE、VG染色,肝脏免疫组织化学染色观察α-SMA、LN、TGF-β1的动态表达,测定外周血中的内毒素、TNF-α、ALT的动态变化,采用扫描电镜观察肝窦内皮细胞失窗孔情况.结果:模型组ALT在第2周末达到高峰(57.84±7.57IU/L),随后逐渐下降;内毒素在第2、4、6周末,各点呈递增趋势,到第8周末时略有下降;TNF-α在第2、4周末呈递增趋势,到第6周末时略有下降,第8周末时又逐渐升高,但各点组均较对照组明显升高(均P<0.05);模型组PVP在第2、4周末,各点呈递增趋势,到第6周末时略有下降,第8周末时又逐渐升高;肝窦内皮细胞扫描电镜结果示随着肝纤维化及硬化程度的加重,窗孔逐渐变小、变少至消失;LN、TGF-β1免疫组织化学染色结果示随着病变的发展,与对照组和同指标前一时间组相比阳性表达逐渐增强(均P<0.05).α-SMA免疫组织化学染色在第2、4、6周末,阳性表达逐渐增强,到第8周末时略有下降.结论:肝硬化大鼠发生了肠源性内毒素血症,其可使TGF-β1、TNF-α、LN等合成增多,促进肝窦内皮细胞去窗孔化,间接参与肝窦毛细血管化的形成.

环磷酰胺对以KLH为特异性抗原BALB/c小鼠TDAR实验定量分析

目的:利用环磷酰胺诱导BALB/c小鼠免疫功能异常动物模型,考察以血蓝蛋白(KLH)作为特异性抗原,T细胞依赖性抗体反应(TDAR)实验定量分析方法能否预测药物的免疫抑制作用。方法:平行对照组和环磷酰胺组给予注射环磷酰胺进行造模,阴性对照组不予处理;阴性对照组和环磷酰胺组经腹腔注射KLH进行免疫;应用流式技术分析外周血淋巴细胞亚群变化;采用间接ELISA法检测血清KLH IgG抗体含量;HE染色观察脾脏组织学改变。结果:进行免疫抑制的实验动物外周血CD3 +CD4 +、CD3 +CD8 +T淋巴细胞以及B淋巴细胞数量明显减少,与阴性对照相比差异具有统计学意义( P <0.05),同时脾脏内淋巴细胞数量减少;TDAR定量检测结果显示环磷酰胺能够降低外周血清KLH IgG抗体产生量,较阴性对照组相比差异具有统计学意义( P <0.05),而TDAR实验定性分析差异无统计学意义( P >0.05)。结论: TDAR实验定量分析能够很好地反映药物对机体的免疫抑制作用。

cTnI、AST及CK在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值的比较

目的探讨心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnI)在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值。方法 32只SD大鼠随机分为4组:心肌损伤组,单次背部皮下注射异丙肾上腺素;骨骼肌损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因;联合损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因及背部皮下异丙肾上腺素;正常对照组,不给予任何药物。予给药后24h,检测血清AST,CK及cTnI,常规HE染色观察骨骼肌和心肌受损情况。结果心肌损伤组和联合损伤组血清cTnI均显著高于正常对照组和骨骼肌损伤组(P<0.01),而联合损伤组和心肌损伤组AST与骨骼肌损伤组无明显差异(P>0.05),心肌损伤组CK与骨骼肌损伤组无明显差异(P>0.05)。结论cTnI在鉴别大鼠心肌及骨骼肌损伤上较AST、CK有较高的敏感性,并且在一定程度上能够降低误诊及漏诊率。

肠道高动力循环动物模型的建立

目的:建立肠道高动力循环动物模型,为研究门静脉高压(PHT)形成机制提供有利工具。方法:采用复合因素致肝纤维化方法,建立肠道高动力循环模型。选用雄性Wistar大鼠,分别在饲养第0、2、4、6、8周末取材,经肠系膜上静脉末端穿刺测压,动态观察门静脉压力(PVP)变化;肝脏HE、V.G染色及外周血丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)测定来确定肝纤维化及硬化分期;测定外周血中的内皮素-1(ET-1)及肠管组织匀浆中一氧化氮(NO)的动态变化水平观察肠道高动力循环形成情况。并与正常对照组比较。结果:肠管组织匀浆中NO和外周血ET-1出现先降低后升高,到第8周末明显高于正常对照组;PVP的动态变化与NO、ET-1动态变化呈正性相关(r分别为0.900 7、0.851 4,P<0.05);NO/ET-1比值总体呈升高趋势。结论:通过复合因素致肝纤维化方法,可以建立大鼠肠道高动力循环模型。

大鼠门静脉高压形成过程中血浆内毒素水平与肠道iNOS的表达

在肝硬化形成过程中常伴随着门静脉高压（portalhy—pertension，PHT）的形成，其血流动力变化过程中肠道高动力循环的形成是PHT维持和发展的重要条件。各种因素如内毒素，内皮素-1（endothelin-1，ET-1）等通过刺激血管舒张剂如NO等可引起肠道血管扩张而使门脉血流增加。

大鼠肝窦内皮细胞扫描电镜制样方法的改良

目的:改良大鼠肝窦内皮细胞扫描电镜制样方法,以期得到优质图像。方法:采用红细胞裂解液去除红细胞,然后样本划痕制作断裂面的方法制备电镜样本。结果:改良法可清晰观察肝窦内皮细胞的窗孔。结论:通过裂解红细胞和样本划痕的方法制备样本,可以获得优质肝窦内皮细胞扫描电镜图像。

葛根素对中波紫外线损伤HaCaT细胞的抗氧化作用

目的研究葛根素不同处理方式对其抗氧化能力的影响。方法以30mJ/cm2中波紫外线(UVB)和1.0mg/mL葛根素处理HaCaT细胞。实验分为阴性对照组、模型组、UVB照射前给药组、UVB照射后给药组和UVB照射前后给药组。UVB照射后24h收集细胞,检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)。结果 UVB照射前给药处理和UVB照射前后给药处理,使细胞内T-AOC、CAT、GSH-Px升高,而ROS和MDA降低(P<0.05);UVB照射后给药处理可以升高SOD(P<0.05),但对其他指标无影响(P>0.05)。结论葛根素不同处理方式影响其抗氧化能力,其中预防性结合治疗性处理效果最佳,单纯预防性处理其次,单纯治疗性处理最差。

荷人卵巢上皮癌裸鼠冻融卵巢组织移植的效果评价

目的:获取人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁正常卵巢组织,经安全筛查并冻融后移植至去势裸鼠体内,探讨移植后效果,为临床应用提供依据。方法:将人卵巢上皮癌OVCAR3细胞种植于裸鼠皮下以获取瘤源,并进行卵巢原位移植,建立卵巢癌原位移植瘤模型,解剖裸鼠获取癌旁正常卵巢组织。癌旁组:取筛选后的癌旁卵巢组织进行玻璃化冷冻,复苏后分别进行皮下及原位移植,各20例;对照组:同龄正常裸鼠卵巢组织,皮下移植及原位移植各20例;去势裸鼠组:20只同龄去势裸鼠;正常卵巢组:20只同龄正常裸鼠。移植12周后,分析各组裸鼠卵巢组织内卵泡形态及激素分泌功能。结果:40只人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤模型中共获取35份活检正常的癌旁卵巢组织,获取率87.5%(35/40)。玻璃化冷冻前后卵巢组织中卵泡形态及各级卵泡比例均无显著差异(P>0.05),癌旁冷冻组织和癌旁新鲜组织的异常卵泡比例差异无统计学意义(P>0.05),冷冻组织以初级卵泡及次级卵泡等窦前卵泡为主。癌旁组皮下移植组织存活率80%(16/20),对照组皮下移植组织存活率90%(18/20),癌旁组原位移植组织存活率90%(18/20),对照组原位移植组织存活率95%(19/20)。移植后组织内卵泡以次级卵泡及窦状卵泡为主,各级卵泡的形态及构成比和未移植的同龄正常裸鼠卵巢相似(P>0.05);癌旁组卵泡数明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植组织内的各级卵泡数差异无统计学意义(P>0.05)。癌旁组卵泡刺激素水平明显低于去势裸鼠组,而雌二醇水平明显高于去势裸鼠组(P<0.01);癌旁组卵泡刺激素水平明显高于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01),而雌二醇水平明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植的卵泡刺激素水平和雌二醇水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:癌旁卵巢组织冻融移植后有正常卵泡发育及激素分泌功能;皮下移植和原位移植均可取得较好的效果;癌旁卵巢组织冻融移植有望作为卵巢上皮癌患者治疗后恢复卵巢内分泌功能的有效手段。

秋茄枝乙醇提取物在减轻2型糖尿病大鼠胰腺损伤中的作用

目的:探讨秋茄枝乙醇提取物(ethanol extract from kandelia candel trunk,EEKCT)在减轻2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠胰腺损伤中的作用。方法 :使用喂养高脂饲料联合注射小剂量链脲佐菌素的方法制作T2DM大鼠。对T2DM大鼠用EEKCT连续进行4周的灌胃后,处死大鼠,取出其胰腺进行称重,并计算其胰腺系数。对T2DM大鼠的胰腺进行组织匀浆,测定其匀浆液的总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性和丙二醛的水平。结果 :EEKCT可增加2型糖尿病大鼠的胰腺系数和胰腺的T-AOC,提高其胰腺中SOD、过氧化氢酶及GSH-Px的活性,同时降低其胰腺中丙二醛的水平。结论 :EEKCT具有抗氧化的活性,对T2DM大鼠的胰腺具有保护作用。

金银花与山银花质量评价及安全性对比研究

目的:探讨金银花和山银花的质量和安全性的实验结果。方法:采用液相色谱测量方法,对金银花和山银花内所含有的有效成分进行测量,同时利用细胞培养、过敏介质释放实验、β-氨基己糖苷酶释放率测定方法等研究金银花和山银花使用的安全性。结果:本次研究显示,金银花当中所包含的主要成分包括绿原酸、断氧化马钱子苷、异绿原酸A;而山银花当中则含有新绿原酸、绿原酸、断氧化马钱子苷、异绿原酸A、灰毡毛忍冬皂苷甲、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙等。同时,以相同的生产工艺为前提,所制得的药物当中,利用山银花药物的β-氨基己糖苷酶释放率明显高于金银花,说明山银花更容易刺激人体嗜碱性肥大细胞发生脱颗粒情况,进而释放大量的生物活性物质,容易引发人体过敏反应。结论:山银花当中所含有的有效药用成分种类比金银花要多,但是利用山银花所制成的药物具有较高的致敏性,容易引发过敏反应,因此存在较大的安全隐患。

浅论含有不同稀释液的布洛芬注射液对局部血管的刺激性

目的 :研究含有不同稀释液的布洛芬注射液对局部血管的刺激性。方法 :将24只家兔随机分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组各有8只家兔。为Ⅰ组家兔静脉注射经浓度为9%生理盐水稀释的布洛芬注射液,为Ⅱ组家兔静脉注射经浓度为5%葡萄糖稀释的布洛芬注射液,为Ⅲ组家兔静脉注射经碳酸氢钠和浓度为5%葡萄糖稀释的布洛芬注射液。给药结束后,结合进行病理组织切片检查的结果观察三组家兔穿刺部位的血管是否存在刺激性反应。结果:用含有不同稀释液的布洛芬注射液对三组家兔的外耳缘进行静脉注射后,Ⅲ组家兔穿刺部位的血管没有出现明显的刺激性反应,Ⅰ组、Ⅱ组家兔穿刺部位的血管均出现了明显的刺激性反应。结论 :用含有碳酸氢钠和浓度为5%葡萄糖的稀释液对布洛芬注射液进行稀释,不会对患者穿刺部位的血管产生刺激作用。此稀释方法具有较高的临床应用价值。

CP慢性染毒对大鼠脑皮层乙酰胆碱酯酶活性的影响

为探讨CP慢性染毒对大鼠脑皮层乙酰胆碱酯酶活性的影响,将120只雄性大鼠随机分为4组,即对照组(花生油)、低剂量组(40mg/kgCP)、中剂量组(80mg/kgCP)和高剂量组(160mg/kgCP),每组30只.灌胃给药28次,每日1次,共28d,每日观察动物症状.给药14d、28d和给药结束后7d各组分别选择10只动物,处死动物分离脑皮层,免疫组化测定AChE活性.结果显示:CP慢性染毒后大鼠表现出神经受损症状,低、中和高剂量组皮层AChE活性均显著降低(P<0.05),并呈剂量依赖性.结果表明:神经损伤大鼠脑皮层AChE活性显著降低,AChE活性具备成为神经损伤标志物的潜力.

安泰口服液对荷瘤小鼠白细胞减少症及免疫功能影响的实验研究

目的:探讨口服液对荷瘤小鼠白细胞减少症和免疫功能影响的效果进行实验研究。方法:从已接种肿瘤并生长超过7天的实验小鼠的腹腔内抽出腹水,利用生理盐水对其进行稀释,制成肿瘤细胞悬液,并将其注射入实验小鼠体内。共选择60只小鼠为实验对象,将其随机分为三个小组,分别是研究组、接种组和对比组。其中研究组小鼠在接种肿瘤细胞后还需要注射安泰口服液进行治疗;接种组仅接种肿瘤细胞,不进行治疗;对比组小鼠不进行任何处理。分别记录用药10天后小鼠体内白细胞含量。结果:本次研究中,研究组小鼠实验后的白细胞含量均数为(5.62±0.21),而接种组则为(2.81±0.53),对比组为(7.52±0.51)。由此可见接受安泰口服液治疗后的小鼠白细胞含量与正常值相接近,明显高于接种组。研究组和接种组数据存在较大差异,具有统计学意义(P<0.05)。结论:安泰口服液具有改善因环磷酰胺类化疗药物所引发的细胞减少症和免疫损伤,能够有效提升小鼠的免疫功能,对提高治疗效果起到积极的作用。

小鼠抗KLH多克隆抗体的制备及TDAR实验间接ELISA定量检测方法的建立

目的:通过制备小鼠抗KLH多克隆抗体,优化反应条件建立KLH特异性抗体ELISA定量分析方法,以期提供一种特异性好、灵敏度高及误差低的TDAR实验检测方法。方法:利用盐析沉淀和亲和层析纯化技术分离和纯化小鼠抗KLH特异性多克隆IgG抗体;以纯化后的抗体作为标准品,建立TDAR实验间接ELISA定量检测方法,并对该方法进行线性范围、特异性、变异系数(CV)及检测限验证。结果:以KLH包被浓度为80μg/ml,山羊抗小鼠IgG/HRP酶标二抗的稀释倍率为1∶20000条件进行间接ELISA定量分析的方法学验证,检测线性范围为390.63~25000 ng/ml,R^(2)=0.9848,线性良好;批内和批间CV均<10%;检测限为194.83 ng/ml。结论:通过制备抗KLH多克隆抗体,并优化实验反应条件来建立间接ELISA定量分析方法,其线性范围、特异性及批内、批间CV均满足实验要求,是一种高灵敏度的TDAR实验检测方法。

两种不同试剂对SD大鼠血凝四项检测结果的比对

目的比对进口和国产两种不同厂家品牌的血凝试剂对实验动物SD大鼠和人血凝四项(PT、APTT、TT、FIB)检测结果,观察它们之间是否存在差异。方法选用SPF级SD大鼠及人血凝标本,分别用国产和进口两种不同品牌血凝试剂检测PT、APTT、TT及FIB血凝四项指标。结果两种不同品牌血凝试剂对大鼠血凝四项指标检测结果均存在差异,大鼠血凝指标PT、APTT、FIB国产试剂检测结果高于进口试剂(P<0.05);大鼠血凝指标TT进口试剂检测结果高于国产试剂(P<0.05);而人血凝标本未见明显差异。结论不同厂家品牌的血凝试剂检测SD大鼠血凝四项(PT、APTT、TT、FIB)结果可存在差异,各实验室应根据需求建立相应的背景数据。

BALB/c小鼠全子宫切除模型的建立及机制探讨

目的建立BALB/c小鼠全子宫切除实验动物模型,探讨和分析该模型的特征及形成机制。方法分为空白对照组,假手术组和模型组。空白对照组不予任何处理,常规饲养;模型组经腹行全子宫切除术;假手术组仅切开皮肤,暴露子宫。术后常规饲养,动态观察各组小鼠体重变化,于4周末检测外周血雌二醇含量及卵巢组织学改变。结果术后各组实验小鼠均全部存活,一般症状良好,切口未见明显炎症,完全愈合;各组实验小鼠术前体重未见明显差异,术后第2周末、3周末和4周末,模型组小鼠体重均高于对照组和假手术组(P<0.05);模型组小鼠外周血雌二醇含量明显低于对照组和假手术组(P<0.01);空白对照组和假手术组小鼠卵巢组织学检查未见异常,模型组出现卵泡形态不规则,颗粒细胞松散、凋亡等异常组织学改变。结论该实验动物模型能够很好地模拟临床术后卵巢功能衰退等临床表现,是研究子宫切除术后并发症及筛选药物理想的动物模型。

左卡尼汀注射液安全性评价的研究

目的评价左卡尼汀注射液(5 m L:1.0 g)临床用药的安全性。方法血管刺激性试验采用耳缘静脉注射,同体左右侧自身对比的方法;试验用兔红细胞混悬液与供试品温育,观察溶血情况;用左卡尼汀注射液(5 m L:1.0 g)在190 mg/kg和95 mg/kg剂量条件下进行致敏3次,并用2倍体积致敏浓度进行激发时均未见过敏反应症状,与平行对照品在相同剂量和浓度下进行比较;左卡尼汀注射液(5 m L:1.0 g)在高剂量190 mg/kg和低剂量95 mg/kg时进行被动皮肤过敏试验。结果左卡尼汀注射液在对家兔红细胞混悬液(体外试管法)和血管刺激的情况下结果与平行对照品类似,无溶血作用,也无明显的血管刺激反应;在主动过敏试验中豚鼠均未出现过敏反应症状,过敏反应为阴性;被动皮肤过敏试验豚鼠均未出现蓝斑过敏反应症状,过敏反应阴性。结论左卡尼汀注射液(5 m L∶1.0 g)临床用药符合注射用药的要求,可以做为安全性评价的根据。

血蓝蛋白不同免疫途径对小鼠T细胞依赖性抗体反应的影响

目的探讨以血蓝蛋白(KLH)为特异性T细胞依赖性抗原,不同免疫途径下对小鼠T细胞依赖性抗体反应(TDAR)的影响。方法选用SPF级KM小鼠,分为静脉注射组、皮下注射组、腹腔注射组及空白对照组。通过上述三种途径免疫小鼠,免疫剂量为每只200μg,第10天等剂量加强免疫一次,空白对照组不给予任何药物。于末次免疫后第7天,采血检测血清KLH抗体Ig G含量,计算脾脏器系数,HE染色观察脾组织学变化。结果 KLH三种不同免疫途径均可引起脾出现不同程度次级淋巴滤泡及生发中心的形成,B淋巴细胞凋亡,边缘区细胞增多等病理改变,以腹腔和静脉免疫途径脾形态变化更为明显;三种不同免疫途径均可引起机体产生抗体,与正常对照组相比差异具有显著性(P<0.05),其中静脉途径引起抗体产生浓度最高,明显高于其他两种免疫途径(P<0.05);各组脾脏器系数存在部分差异,其中静脉注射组和腹腔注射组脾脏器系数显著高于空白对照组(P<0.05),静脉注射组脾脏器系数显著高于皮下注射组和腹腔注射组(P<0.05)。结论 KLH三种不同免疫途径引起机体产生抗体浓度、脾脏器系数及形态改变是不完全相同的,可通过这些差异多方面分析TDAR实验结果。

丹参酮ⅡA磺酸钠注射的肌肉刺激性研究

目的考察家兔单次股四头肌肌内注射丹参酮ⅡA磺酸钠(60 mg)后,给药局部肌肉组织是否出现扩张、红肿、充血、水肿、瘀斑、变性、坏死等局部肌肉刺激性反应,综合判断供试品肌内注射的安全性,并且为该药物的安全性评价提供参考。方法以等量等渗的氯化钠溶液为阴性对照药进行自身性对照,设结束期和恢复期两组,进行一般症状肉眼观察和组织病理学检查。结果家兔单次股四头肌肌内给药后一般症状观察均无异常表现;剖检肉眼观察结果评分符合标准;剖检镜下观察结果显示恢复期观察时间内,局部的肌肉刺激反应具有完全可逆性。结论丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对家兔股四头肌无明显刺激性。