屎肠球菌132胆盐水解酶基因的克隆表达与酶学特性

该研究旨在探究降胆固醇潜在菌株屎肠球菌132胆盐水解酶(bile salt hydrolase,BSH)的活性,通过PCR技术克隆目的基因并在大肠杆菌BL21中表达,同时探讨其酶学特性。利用茚三酮法对其菌体破碎液BSH活性进行测定,比酶活达0.55 U/mg。通过克隆其目的基因,连接pET-28a(+)的表达载体并进行异源表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验显示,该酶分子量约37 ku。当底物为甘氨胆酸钠(glycocholic acid,GCA)、pH 5.50时,BSH酶活达4.93 U/mg。酶学特性结果表明,GCA为底物、pH 5.50、温度为30℃时达最适条件,BSH水解能力最强,酶活达6.59 U/mg,温度在4-30℃时,pH为5-7有较好的热稳定和pH稳定性。不同离子对酶活的影响实验表明Na^(+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)均对酶活有激活作用;Mn^(2+)、Fe^(2+)对酶活影响不大,但Ni^(2+)、Al^(3+)、Li^(2+)、Co^(2+)、Zn^(2+)均对酶活有强抑制作用,比酶活降到10%以下,几乎丧失活性。通过酶反应动力学得出该酶的V_(max)为6.44μmol/(min·mg),K_(m)值为3.16 mmol/L。因此,通过bsh基因克隆并异源表达,提高了屎肠球菌132BSH活性,并且BSH水解各类胆盐能力较强,为降胆固醇功能食品的开发与应用奠定基础。

多方联动模式下脊髓性肌萎缩症的社会工作介入研究——以北京市M机构为例

脊髓性肌萎缩症(Spinal Muscular Atrophy下文简称SMA)是一种因为神经元中的基因突变而导致的肌肉无力甚至萎缩的疾病。由于疾病的罕见性,国内对于该疾病的药物治疗,康复手段以及医疗政策都不完善,且很难通过社会支持网络获取所需资源。社会工作通过多方联动的模式,将患者及家庭所需要的资源链接整合,多方共同合作搭建资源平台,共同推进SMA疾病的治疗的发展。