肿瘤坏死因子受体相关因子1蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAP1)蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义。方法 :采用蛋白组学二维荧光差异凝胶电泳技术(2D-DIGE)检测4例前列腺癌及癌旁组织之中TRAP1蛋白的表达,并质谱分析鉴定。ELISA检测84例前列腺癌、35例前列腺增生症患者和21例志愿者TRAP1蛋白的血浆浓度,分析TRAP1蛋白与前列腺癌的临床病理关系。结果:蛋白组学结果显示:前列腺癌和癌旁组织之中TRAP1蛋白的表达差异明显(P<0.05)。ELISA结果显示:前列腺癌患者TRAP1蛋白的血浆浓度明显高于前列腺增生症患者(P=0.029)及志愿者(P=0.045)。前列腺癌患者中,TRAP1蛋白血浆浓度与患者年龄(P=0.547)、血清PSA(P=0.287)、Gleason评分(P=0.937)及是否转移(P=0.098)无明显相关性,但与前列腺体积相关(P=0.032)。结论:TRAP1蛋白可作为前列腺癌的血清辅助标志物,同时可作为抗肿瘤的潜在分子生物学靶点进一步研究。

PEDF下调HIF-1α抑制前列腺癌细胞侵袭转移的机制

目的:探讨色素上皮衍生因子(PEDF)下调缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制前列腺癌细胞侵袭转移的机制。方法:培养人前列腺癌上皮细胞株(PC3),实验组和对照组中分别加入PEDF和PBS溶液,通过划痕实验和transwell实验验证两组细胞侵袭转移的能力;RT-QPCR检测两组细胞中HIF-1α的表达水平。结果:划痕实验和transwell实验结果表明PEDF抑制前列腺癌侵袭转移能力,PEDF下调HIF-1α的表达。结论:PEDF通过下调HIF-1α的表达抑制前列腺癌细胞的侵袭转移能力,揭示其可能为肿瘤干预治疗的新靶点,为治疗前列腺癌等恶性肿瘤提供充分的科学依据和高效候选药物。

microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

目的研究micro RNA-126(mi R-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达mi R-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证mi R-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果与对照组相比,转染mi R-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达mi R-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,mi R-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论过表达mi R-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。

NEK2与前列腺癌预后的相关研究

目的研究NEK2(中心体相关激酶2)在前列腺癌和良性组织中的表达情况及其与前列腺癌预后的相关性。方法运用qRT-PCR检测NEK2在前列腺癌和癌旁组织的表达差异,通过组织芯片免疫组化染色检测的方法检验NEK2在前列腺癌和癌旁组织的表达情况,最后使用Taylor的数据对NEK2进行生物信息学分析。结果qRT-PCR检测NEK2在前列腺癌组织的表达显著高于癌旁组织(6.93±0.15 vs 5.38±0.4,t=6.25,P=0.003),组织芯片免疫组化结果显示NEK2在前列腺癌组织的表达显著高于癌旁组织(5.84±0.56 vs 4.27±0.49,t=5.38,P<0.001),结合Taylor公用数据库分析,NEK2高表达组患者术后的生化复发生存率减少(χ~2=4.33,P=0.037),NEK2高表达组和低表达组在前列腺癌总体生存率上没有明显区别(χ~2=0.27,P=0.605)。结论NEK2参与前列腺癌的发生、发展进程,同前列腺癌发病进程密切相关,通过检测前列腺癌患者NEK2的表达情况,可早期预测生化复发的概率,能够作为判断前列腺癌预后的潜在生物学标志物。

铁筷子多糖联合内分泌治疗晚期前列腺癌的疗效

【目的】探讨铁筷子多糖联合内分泌治疗晚期前列腺癌的临床疗效及铁筷子多糖对前列腺癌细胞的抑制作用。【方法】回顾性分析两院收治的154例晚期前列腺癌患者的临床资料,根据治疗方法的不同将其分为对照组(内分泌治疗)和观察组(铁筷子多糖联合内分泌治疗),每组77例。比较两组患者治疗前后前列腺特异抗原(PSA)和游离前列腺特异抗原(F-PSA)水平,比较两组患者生活质量及国际前列腺癌症状量表(I-PSS)评分,比较不同剂量铁筷子多糖对DU145细胞周期的影响。【结果】治疗后,两组患者PSA、F-PSA水平低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者QLQ-C30评分、I-PSS评分均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组G0/G1期细胞比例显著低于对照组、低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组、低剂量组S期细胞比例显著高于对照组,低剂量组高于对照组(P<0.05)。观察组的并发症发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】铁筷子多糖联合内分泌治疗晚期前列腺癌临床疗效较好,且铁筷子多糖可较好抑制前列腺癌细胞。

前列腺癌组织中TRIB1基因和蛋白异常表达与患者不良预后的相关性

目的研究Tribbles同源蛋白1(TRIB1)在良性前列腺增生和前列腺癌中的表达,并分析其表达水平与患者临床特征及预后的关系。方法在公共基因芯片数据库(GEO)中下载前列腺样本中的相关基因芯片数据,分析TRIB1在前列腺样本中mRNA的表达水平。收集临床手术切除或者穿刺活检的前列腺癌和前列腺增生组织,通过免疫组化检测前列腺癌、前列腺增生组织中TRIB1蛋白的表达。分析TRIB1蛋白和基因的表达水平与患者临床特征及预后的关系。结果前列腺癌患者组织中TRIB1蛋白表达显著上调(P<0.01),TRIB1蛋白表达上调与前列腺癌Gleason评分(P<0.01)、病理分期(P=0.02)相关,基因芯片数据提示TRIB1基因表达上调与前列腺癌Gleason评分(P=0.02)、病理分期(P=0.01)、无生化复发生存率(BCR-free survival)(P=0.047)相关。结论 TRIB1在前列腺癌组织中表达上调,前列腺组织中检测TRIB1可能有助于判断前列腺癌分化程度并评估预后。

SOX9与雄激素受体在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨SOX9与雄激素受体(androgen receptor,AR)之间的相关性,SOX9表达水平与前列腺癌各临床病理特征之间的关系。方法选取免疫组织化学方法分析使用的组织芯片,包含前列腺原位癌50例(含转移癌19例)、前列腺癌旁组织30例,附带患者详细的临床信息。通过免疫组织化学方法检测SOX9与AR在前列腺癌和癌旁组织中的表达水平,分析SOX9与AR的相关性,对SOX9蛋白表达水平与前列腺原位癌、前列腺癌旁组织之间的关系进行分析。结果 SOX9在前列腺癌中的表达水平(7.160±0.228)较前列腺癌旁组织中的表达水平(5.960±0.067)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。AR在前列腺癌中的表达水平较前列腺癌旁组织中的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。SOX9的表达水平与AR相关,并呈正相关性。结论 SOX9的表达水平与AR呈正相关性,SOX9基因在前列腺癌临床上表现为促癌基因。

前列腺癌特异性基因的网络结构

目的探讨前列腺癌特异性基因的网络结构。方法将由基因芯片结果得到的所有769个上调基因和675个下调基因通过特异性通路技术分析,鉴别所有差异表达基因的网络结构。结果通过IPA软件分析,我们得到基因差异最大的3个网络。结论网络分析不但证实了蛋白的互相作用导致DNA复制、重组和修复的紊乱、细胞和细胞周期的损伤、遗传性疾病的发生和结缔组织损害,还观察到许多由Myc调控的基因参与了脂质代谢和核酸代谢的过程。

GPD1酶在毕赤酵母中的表达及纯化

目的构建可以分泌表达GPD1酶的毕赤酵母,并使用Profinia蛋白纯化系统获得纯度90%以上的GPD1酶,扩大GPD1酶的制备,以进一步研究其在肿瘤中的功能及作为抗肿瘤靶点的临床应用研究。方法提取人细胞的总RNA,逆转录成cDNA,以此为模板通过PCR扩增GPD1基因,PCR产物与表达载体pPICZα-C用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,连接构建重组表达质粒pPICZα-C-gpd1;pPICZα-C-gpd1质粒电转至毕赤酵母X-33中,筛选阳性转化子,经甲醇诱导表达,采用固化金属亲和层析(IMAC)纯化分泌的目的蛋白。结果经SDS-PAGE鉴定,成功表达和纯化了GPD1酶,纯度达90%以上。结论本研究建立了毕赤酵母分泌表达GPD1酶的方法,可用于制备GPD1酶,为进一步的肿瘤机制研究和应用研究奠定基础。

连续电纺纳米纤维医用纱布组织相容性功能研究

目的测试连续电纺纳米纤维材料所生产的医用纱布的组织相容性和可降解性。方法分别将纳米纤维纱布与普通医疗纱布种植于Sprague-Dawley(SD)大鼠的背部皮下组织及腹膜下,以观察SD大鼠创面的痊愈时间、创面痊愈状况,以及组织中炎症反应状况和有机纤维的降解状况。结果植入了纳米纤维纱布和普通纱布填塞物大鼠的创面痊愈程度分别为甲级和乙级。在术后的第3天,对皮下取材和组织进行苏木精-伊红染色,结果表明:普通纱布的皮下组织结构已开始与黏膜、脂肪进行结合,其与组织并没有很好地结合;而纳米纤维纱布则是轮廓上清晰可见,一整片纱布单独存在,并不能与其他黏膜结合,且以纱布为核心的结构中出现了很密的细胞。同样,在HE染色结果中,普通纱布组表明玻璃纤维比较粗大,结构较稀疏,生物相容性不良,而纳米玻璃纤维的纱布组表明玻璃纤维和组织之间已成为比较紧密的结构。免疫组化结果表明在普通纱布的纤维组织中巨噬细胞染料为明显阳性,仍然有慢性炎症反应,而在纳米纤维纱布中巨噬细胞染料阳性但不明显,组织依然生长致密。结论与传统的医用纱布比较,纳米纤维纱布具有较好的相容性和可降解性。

B细胞淋巴瘤因子9的表达与前列腺癌临床病理参数及患者生存的关系

目的 探讨B细胞淋巴瘤因子9（BCL9）作为Wnt信号通路的核内元件,它在β-链蛋白（β-catenin）的转录中的重要作用.观察BCL9在前列腺癌细胞中的表达、其参与的发病进程及临床预后的作用.方法 采用免疫组化检测98例前列腺癌患者及20例良性前列腺增生患者BCL9的表达水平.χ^2检验分析BCL9表达同前列腺癌患者临床病理参数的关系.Kaplan-Meier生存曲线及log-rank统计方法计算BCL9表达同前列腺癌生化复发发病进程的关系.Cox多因素回归模型检测BCL9表达预测前列腺癌生化复发的危险度情况.结果 BCL9在前列腺癌组中阳性率为53.1％（52/98）,在良性组织的阳性率为25.0％ （5/20）,两者差异有统计学意义（P =0.022）.BCL9表达同前列腺癌Gleason评分（P=0.016）显著相关,其高表达与无生化复发生存率显著负相关（P =0.037）,但不能独立预测前列腺癌生化复发的危险度（危险比1.73,P=0.384）.结论 BCL9的上调表达与前列腺癌患者的早期诊断和恶性程度相关.

前列腺癌特异性基因的功能和通路分析

目的 探讨前列腺癌特异性基因的相关功能和通路.方法 收集前列腺癌组织标本进行基因芯片分析,从结果中取差异倍数≥1.5并P≤0.05的基因通过特异性通路分析（IPA）,鉴别所有差异表达基因的功能和通路.结果 由芯片数据得到769个上调基因和675个下调基因,得到基因功能差异最大的10个通路.结论 本研究的数据提供了前列腺癌的候选基因,为寻找新的肿瘤生物学指标、风险因素和治疗靶点提供帮助.

微RNA-374b与前列腺癌恶性程度及生化复发的分析

目的检测前列腺癌组织及良性前列腺组织中微RNA-374b表达，探讨其与前列腺癌恶性程度及生化复发的关系。方法收集广州医科大学附属广州市第一人民医院、中山大学附属第二医院、广州市红十字会医院2000年至2010年泌尿外科103例前列腺癌手术后的样本和25例前列腺增生手术获取的前列腺良性组织样本。采用原位杂交技术检测微RNA．374b在前列腺癌组织及良性前列腺组织中表达，并对微RNA．374b表达与前列腺癌患者年龄、术前PSA、临床分期、病理分期、Gleason评分、是否生化复发、是否转移及是否死亡的关系进行统计分析。根据微RNA．374b的相对表达量，以中位数（M=4．50）将其分为低表达组及高表达组，运用Kaplan．meier方法及Log．rank检验进行总体生存率和无生化复发生存率分析。结果微RNA．374b在前列腺癌的表达低于良性组织（3．97±1．17比4．70±0．71，P〈0．05）。微RNA．374b的表达量同Gleason评分、病理分期、转移、是否生存及生化复发有关（均P〈0．05），同年龄、PSA水平及临床分期无关（均P〉0．05）。微RNA．374b低表达组无生化复发生存率低于高表达组（P〈0．05），高表达组的生化复发时间高于低表达组（P〈0．05）。微RNA．374b表达与总体生存率无关。结论微RNA．374b的低表达与前列腺癌恶性程度有关，有望成为评价前列腺癌恶性程度及生化复发的指标。

NRCAM-PI3K-AKT信号通路影响miR-505对前列腺癌细胞的增殖抑制作用

目的我们研究已经发现微小RNA-505(miR-505)可靶向调控神经细胞黏着分子(NRCAM)抑制前列腺癌的增殖、侵袭及转移。本研究拟进一步探讨miR-505在前列腺癌动物模型的功能,以及miR-505/NRCAM参与的下游调控信号通路。方法建立裸鼠皮下形成异体移植瘤模型,分析miR-505对前列腺癌的增殖力影响,免疫组化进一步探讨其参与的可能通路;在NRCAM抑制表达的人前列腺癌细胞株LNCaP和PC3细胞株中,蛋白质印迹法检测PI3K-AKT信号通路的蛋白表达水平;抑制NRCAM表达的PC3及LNCaP,细胞增殖实验证实NRCAM对细胞增殖力的影响。结果裸鼠动物模型发现miR-505过表达细胞株形成的皮下移植瘤明显比对照组的生长速度减缓(P<0.05),并且移植瘤的AKT及EGFR蛋白的表达是明显下降的(P<0.05)。前列腺癌细胞株中,抑制NRCAM的表达均可以导致磷酸化位点的AKT、EGFR及FAK的蛋白水平表达均下调。并且抑制NRCAM的表达,前列腺癌细胞PC3及LNCaP的增殖力下降(P<0.05)。结论 miR-505可能靶向调控NRCAM,影响PI3K/AKT信号通路的表达,而抑制前列腺癌细胞的增殖力。