S/D法及干热法对人凝血因子Ⅷ制品中猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒灭活效果的验证

目的验证S/D法及干热法对人凝血因子Ⅷ(FⅧ)制品中猪伪狂犬病病毒(pesdorabies virus,PRV)和猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的灭活效果。方法以PRV和PPV为指示病毒,模拟FⅧ生产工艺中的S/D及干热病毒灭活工艺,采用96孔板微量细胞病变法检测3批FⅧ半成品的残留病毒滴度。结果批号为201203002、2012-04003、201204004 3批FⅧ半成品经(25±1)℃S/D灭活处理15 min后,PRV滴度分别下降≥6.5、≥6.8、≥6.8 lg TCID50/0.1 ml;经(100±2)℃干热灭活30 min后,PPV滴度分别下降4.00、3.92、3.94 lg TCID50/0.1 ml。结论 S/D法及干热法分别对FⅧ制品中PRV和PPV具有良好的灭活效果,本实验为凝血因子类制品的病毒灭活验证工艺的研究奠定了基础。

一种快速检测乙型脑炎病毒滴度的荧光灶试验方法的建立、验证及应用

目的:建立快速荧光灶试验(fluorescence focus assay,FFA)滴定乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的方法,验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗(简称乙脑减毒活疫苗)滴度的可行性并将该法作初步应用。方法:利用原核表达方式构建JEV非结构蛋白1(non-structural protein 1,NS1)重组体系,以纯化所得的JEV-NS1蛋白免疫家兔制备抗NS1蛋白多克隆抗体,建立快速FFA测定JEV滴度的方法。通过与病毒蚀斑法作比对分析,对其专属性、准确度、精密度、线性、范围和耐用性进行验证。用经验证后的FFA检测28批乙脑减毒活疫苗,分析其应用于生产的可行性。结果:所制备的多克隆抗体与JEV可产生特异性荧光灶反应,与其他病毒(森林脑炎病毒、黄热病毒、人柯萨奇病毒A2型和A4型)无交叉反应;FFA方法学验证结果均符合乙脑减毒活疫苗的质控要求;与蚀斑法比较,FFA检测结果更趋一致。结论:本研究建立的FFA通过方法学验证,可应用于乙脑减毒活疫苗成品的滴度测定。

测定六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度的荧光灶试验的验证

目的验证荧光灶试验作为测定六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度方法的可行性。方法采用该法测定轮状病毒G1、G2、G3、G4、G8、G9型滴度，并验证该法的专属性、精密度、线性、准确性、范围和耐用性。结果各型病毒均可与对应的单克隆抗体（单抗）发生特异性荧光灶反应，不与抗异型病毒单抗发生交叉反应。试验内和试验间测定结果的相对标准偏差均小于5％。各型轮状病毒实测滴度与理论滴度间的线性相关系数均〉0．99。不同稀释度各型病毒的回收率为90％～120％。该法的定量限为：G1、G2、（33、G4、G8、G9型滴度分别〉2．8、〉4．2、〉3．7、〉3．6、〉4．1和〉4．21g荧光灶单位／ml，均符合六价轮状病毒疫苗的质控要求。结论该法测定不同型轮状病毒滴度具有较好的专属性、精密度、线性和准确性，可用于六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度的测定。