嗜热四膜虫——具有发展潜力的功能基因组学研究模型

在真核生物的分子生物学和遗传学研究方面,纤毛类原生动物嗜热四膜虫(Tetrahymenathermophila)已经被证明是一种有价值的生物学模型。通过对它的研究,人们发现并且掌握了核酶的分子机制、RNA的自我拼接、端粒的结构和功能、DNA序列重组等机理。这种原生动物的基因组功能分别由两个细胞核执行,即二倍体的小核与生殖过程有关,而多倍体的大核决定细胞的基因转录,并为转化基因的表达提供了强有力的手段。

四膜虫基因打靶载体的构建及其在虫体内的转化

【目的】构建一个适于嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的基因打靶载体,并分析转化四膜虫的特性。【方法】以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子,利用H4-I基因的5′和3′侧翼区作为同源臂,并且保留H4-I基因编码区的起始密码子ATG和终止密码子TGA,中间嵌入巴龙霉素抗性标记基因neo,从而构建一个基因打靶载体。将该载体电击转化到嗜热四膜虫接合株体内,使其同源重组到四膜虫H4-I基因上。通过巴龙霉素抗性筛选、PCR扩增目的基因对抗性虫株进行鉴定。光学和电子显微镜观察抗性虫株形态变化。【结果】成功构建了一个适于嗜热四膜虫的基因打靶载体,将其电击转化到四膜虫体内,抗性虫株的生长速度明显高于普通四膜虫,显微镜观察抗性虫株形态变小,大约是正常形态的1/20～1/30,抗性虫株表面光滑,未见纤毛。【结论】利用基因打靶载体将neo基因定向整合到四膜虫H4-Ⅰ基因内部,为今后在嗜热四膜虫体内表达外源蛋白奠定了基础。

多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型

根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。

猪流感病毒抗原表位基因表达载体构建与免疫原性分析

根据猪流感病毒血凝素蛋白基因(Heamuglutinine,HA)的核苷酸序列,设计、筛选HA蛋白氨基酸序列的主要表位多肽4个,将4个片段以柔性连接串联成模拟蛋白,核苷酸约为300 bp,体外扩增该模拟蛋白基因,插入到原核表达载体pET30a(+)中,转染宿主菌诱导表达,结果获得分子量为20 kD的表达蛋白,该蛋白可与抗His-tag抗体、抗猪流感病毒H1N1、H3N2亚型高免血清发生免疫学反应。纯化后免疫小鼠,ELISA及血凝抑制(Heamuglutinine inhibitor,HI)试验检测,小鼠产生针对多肽抗原的血清抗体,同时还可检测到H1N1、H3N2亚型SIV血凝抗体。流氏细胞仪检测免疫组外周血淋巴细胞高于对照组,说明该模拟蛋白具有与H1N1、H3N2亚型猪流感病毒相似的免疫原性及反应原性,为H1N1、H3N2血清亚型猪流感病毒疫苗研制提供了新手段。

牛肠毒素性产气荚膜梭菌的分离及鉴定

对黑龙江省3个地区牛场疫牛进行临床诊断,剖检结果为小肠出血性肠炎和心内外膜严重出血等症状,进行了细菌的分离培养、涂片镜检、生化试验和动物感染试验。结果表明:分离菌株均为革兰氏阳性粗短杆菌,严格厌氧,在血平板上具有双溶血环,能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和暴酵牛乳,肠毒素检测试验阳性,厌气肉肝汤培养物0.2mL小白鼠尾静脉注射,2～10h可使其致死。试验结果表明3个分离株均为产气荚膜梭菌。

抗旱造林实用技术研究

西北地区是我国的主要干旱地区,陕北地区是更为严重的干旱地区之一。在生态环境恶劣、沙漠化严重的陕北地区推广应用抗旱造林技术具有极其重要的意义,有利于促进陕北地区可持续发展。本文简要介绍抗旱造林技术推广应用的必要性,总结抗旱造林实用技术种类,并探究抗旱造林技术推广应用中需注意的问题,以期能提高抗旱造林技术应用效果。

新时期下如何做好护林防火工作

森林是地球之肺,是人们赖以生存的重要资源。任何时期保护林业资源都是非常重要和必要的。然而面对森林防火年年防年年有的现状,需要在之前的实践中总结问题,积累经验,加强防火建设力度。尤其在新时期下,林业工作的重要内容及保障森林资源,做好防火工作。林业资源得以有效保护,人类才能长期持续发展。所以对于山区和林业资源丰富的地区,更应该切实做好防火工作。本文就新时期如何做好护林防火工作展开探讨,总结问题并给出了一些解决策略可供参考。

黄土高原退耕还林方针可行性研究

本文通过分析黄土高原的生态结构,对黄土高原退耕还林现状进行探讨,提出黄土高原退耕还林的可行性方针。对黄土高原的植被类型和土地资源等进行了分析和划分,为退耕还林的可行性提出了新的思路。

2007-2011年平顶山市流行性腮腺炎报告病例的流行病学分析

目的了解平顶山市流行性腮腺炎(腮腺炎)报告病例的流行病学特征,为预防控制该病提供科学依据。方法采用描述流行病学方法,对2007-2011年平顶山市疾病监测信息报告的腮腺炎疫情资料进行分析。结果 2007-2011年平顶山市共报告腮腺炎6422例,年平均发病率为25.88/10万。每月均有病例发生,相对集中在3-7月,占全部病例的55.61%。病例主要为学生(56.99%)、幼托儿童(22.86%)、散居儿童(15.57%)。男女病例报告发病率性别比为1.85:1。结论平顶山市腮腺炎的发病率较高,应做好麻风腮三联疫苗的接种工作,是预防与控制流行性腮腺炎的主要措施。

河南省平顶山市2012年流感监测结果分析

目的了解河南省平顶山市流行性感冒（流感）流行特征，为流感预防控制工作提供依据。方法对2012年平顶山市流感监测中流感样病例（ILI）监测资料和病原学检测资料进行分析。结果2012年平顶山市流感监测哨点医院共监测门、急诊就诊病例105262例，ILI患者12252例，ILI占门急诊就诊总数的11．64％。病例以0～岁年龄组为主，占66．67％。全年共采集ILI咽拭子标本355例，经实验室检测，病毒核酸检测阳性45例，总阳性率为12．68％。其中季节性H3为21例，占46．67％，B型23例，占51．11％；新甲H1N1病例1例，占2．22％。结论2012年流感流行高峰在1～3月，ILI构成以0～岁年龄组为主，流感病毒以季节性H3和B型为优势流行株。

平顶山市2008-2012年水痘流行特征分析

目的 了解平顶山市2008-2012年水痘的流行病学特征,为有效控制水痘提供依据. 方法 采用描述流行病学方法,对2008-2012年国家疾病监测信息报告管理系统和突发公共卫生事件报告管理信息系统的水痘疫情资料进行统计,并对水痘的时间、年龄、性别、职业和区域发病情况进行比较分析. 结果 平顶山市2008-2012年共报告水痘8 114例,年均发病率为32.77/10万;不同年份发病率差异有统计学意义（x2=295.03,P＜0.001）.年平均发病率居前3位的是卫东区、湛河区、新华区,分别为88.24/10万、85.75/10万、63.23/10万.常年均有发病,呈现4-6月、12-1月两个发病高峰,占发病总数的64.69％;男性病例占总发病数的60.46％,女性为39.54％,男女性别比为1.53∶1.水痘发病年龄以＜15岁儿童为主,占总发病数的89.15％.高发年龄为3～8岁,占发病总数的62.60％;学生、幼托儿童、散居儿童占总病例数的93.99％;2008-2012年全市共报告水痘事件5起,全部发生在小学. 结论 平顶山市2008-2012年水痘发病率较高,15岁以下人群是水痘的高发人群,应加强学校和托幼机构对水痘病例的监测,发现病例及时上报,鼓励接种水痘疫苗,降低水痘的发病率.

平顶山市儿童免疫规划疫苗接种率抽样调查

目的了解平顶山市常住儿童免疫规划疫苗接种情况。方法按容量比例概率抽样法（Probabilityproportional to size,PPS）在每个县（市）区随机抽取2个乡（镇、街道）预防接种门诊,对420名2～3岁的适龄儿童进行入户调查。结果建卡率为100%,建证率为100%,预防接种信息系统使用率为96.90%;证、卡以及信息系统符合率为71.19%。接种证和预防接种信息系统抽查接种率较高,尤其是基础免疫疫苗（卡介苗BCG、乙型肝炎HepB、脊髓灰质炎OPV、百白破DPTa、含麻疹成份疫苗MCV1、A群流行性脑脊髓膜炎MPV1、流行性乙型脑炎JEV1）的初次合格接种率均超过了95%,但国家扩大免疫规划新增的疫苗和加强免疫接种率比较低。因接种记录不符合规定所占比例最高为83.26%（577剂次）。结论平顶山市常住儿童免疫规划疫苗报告接种率真实可靠,基础免疫接种率达到了较高水平,应采取措施进一步提高预防接种的工作质量。

河南省平顶山市2008-2012年风疹流行病学特征分析

目的了解平顶山市2008-2012年风疹发病情况及流行特征,为今后制定防治措施提供科学依据。方法采用描述流行病学方法,对2008-2012年国家疾病监测信息报告管理系统和突发公共卫生事件报告管理信息系统的风疹疫情资料进行回顾性分析。结果2008-2012年共报告风疹病例482例,年均发病率为1.94/10万,发病主要集中在3-6月,占总病例数75.31%;以学生、散居儿童和幼托儿童为主,占总病例数的92.95%;男女性别比为1.59∶1。结论加强监测及提高重点人群疫苗的接种覆盖率是预防与控制风疹的主要措施。

2010年平顶山市常规免疫接种率报告监测评价

目的了解平顶山市常规免疫接种率监测工作现状,及时发现问题并采取相应措施,以维持较高的疫苗接种率。方法通过中国免疫规划监测信息管理系统,收集平顶山市2010年常规免疫接种率报告数据,对5种疫苗采用估算接种率、差值(D值)和比值(R值)法进行评价。结果2010年平顶山市常规免疫接种报告及时率100.00%,5苗报告接种率均>95.00%;估算接种率为101.01%～111.43%;D值评价可信率为20.00%,可疑所占的比例较大;R值评价显示接种率存在可疑现象。结论平顶山市常规免疫接种率维持在较高水平,全市儿童免疫规划疫苗接种率监测数据质量还需进一步提高。

2009-2013年河南省平顶山市甲型肝炎流行特征分析

目的了解河南省平顶山市甲型病毒性肝炎的流行病学特征,为制定防控措施提供依据。方法采用描述流行病学方法对2009-2013年平顶山市甲肝疫情资料进行统计分析。结果 2009-2013年平顶山市共报告甲肝病例1 132例,年平均发病率为4.56/10万;各月份均有病例发生,7~9月份病例占全部病例的33.92%。15岁以下病例占报告病例总数的53.98%;病例主要为农民（32.51%）、学生（27.74%）、幼托儿童（16.43%）。男女病例报告发病率性别比为1.38：1。结论甲肝仍是平顶山市重要的公共卫生问题,应重点针对儿童、青少年,以及农村人群尤其青壮年农民采取综合防控措施。

2012年平顶山市流行性腮腺炎流行特征分析

目的分析平顶山市2012年流行性腮腺炎的流行病学特征。方法对2012年平顶山市流行性腮腺炎疫情资料进行分析。结果平顶山市2012年共报告流行性腮腺炎病人1057例，年发病率为21．49／10万。报告发病率居前3位的依次是湛河区（42．20／10万）、郏县（36．20／10万）、鲁山县（31．31／10万）。不同县（市、区）发病率的差异有统计学意义（P〈0．01）。各年龄组男女发病率，〈20岁各年龄组男性发病率均高于女性，不同性别发病率的差异有统计学意义（P〈0．05）。每月均有病例发生，相对集中在4～7月，占全部病例的50．05％；学生、幼托儿童、散居儿童占发病总数的93．09％。结论要加强学校托幼机构流行性腮腺炎的防控工作，倡导适龄儿童接种疫苗。

平顶山市脊髓灰质炎野病毒输入与传播风险评估

目的评估平顶山市各县市区脊髓灰质炎野病毒输入与传播风险,找出科学防控脊髓灰质炎野病毒疫情的关键点。方法依据河南省疾控中心下发的《2014年脊髓灰质炎野病毒输入与传播风险评估方案》,结合本市监测情况,进行评估。结果郏县、宝丰县疫情输入与传播风险高,其余县市区为中风险和低风险地区。结论各县市区尤其是高风险地区,应及时开展适龄儿童的查漏补种和补充免疫活动,提高脊灰、麻疹等疫苗及时接种率和全程接种率,科学有效地防控脊灰野病毒的输入和传播。

一起甲型H1N1流感暴发的流行病学分析

目的了解平顶山市一起甲型H1N1流感暴发疫情的特点,为控制学校甲型H1N1流感暴发疫情提供依据。方法使用中国疾病预防控制中心编制的《甲型H1N1流感病例个案调查表》对所有病例进行流行病学调查,采用描述流行病学方法对病例的流行病学特征进行分析。采用RT-PCR方法检测甲型H 1 N1流感病毒核酸。结果2013年3月26日出现首发病例,疫情历时2 d,发病12例。其中11例甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性,罹患率2.23%。病例全部为学生,其中男生5例、女生7例,男女性别比为0.71:1。病例主要集中在该校七(3)班,均为轻症病例。结论本次发病为甲型H1N1流感病毒引起的流感暴发。建议在冬春季节到来之前给学生进行甲型H1N1流感疫苗的预防接种,是预防学校甲型H1N1流感暴发最经济有效的手段。

2012年平顶山市甲型病毒性肝炎流行特征分析

目的了解2012年平顶山市甲型病毒性肝炎的流行病学特征,为制定防控策略提供依据。方法采用描述流行病学方法,对中国疾病监测信息报告管理系统中甲肝疫情数据资料进行分析。结果 2012年平顶山市共报告甲肝病例264例,年发病率为5.37/10万;各月份均有病例报告,以散发为主,病例以<15岁年龄组为主,占总病例数的59.09%;发病人群以农民、幼托儿童和学生为主,分别占病例总数的33.71%、24.62%、22.73%。结论甲肝仍是平顶山重要的公共卫生问题,应重点针对儿童、青少年、以及农村人群尤其是青壮年农民采取综合性防控措施。