祁连山荷叶离褶伞菌丝体LML的分离纯化及其凝血活性检测

以荷叶离褶伞茵丝体为材料，利DEAE—Sepharose F．F．色谱和sephadexG-100色谱技术，分离获得新的LMLLML。根据凝胶过滤色谱和SDS—PAGE电泳结果，确定LML是中性糖含量为10．36％、分子量约为48．2ku单亚基糖蛋白。凝血活性检测结果表明，LML对兔血红细胞具有凝聚活性，这种活性在LML浓度为500μg/mL、温度为20～70℃、pH3～10的条件下稳定；其凝血活性可被葡萄糖（最小浓度为25mmol／L）和麦芽糖（最小浓度为12．5mmol／L）所抑制；当LML浓度≥250μg／mL时，其凝血活性不受Ca^2＋、Mg^2＋和Zn^2＋的影响。

反胶团萃取分离红豆蛋白质

采用Plackett-Burman(PB)实验、最陡爬坡实验和响应面分析对反胶团萃取红豆蛋白质提取工艺进行优化。首先,采用Plackett-Burman设计从影响反胶团前萃取率的7因素中筛选出具有显著效应的3个因素:萃取时间、水相pH、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)浓度。在此基础上用最陡爬坡实验逼近最大萃取率区域,再利用Box-Behnken实验对3个显著因素进行优化,得出最佳萃取工艺条件为:pH4.3、NaCl浓度0.02mol/L、CTAB浓度40.24mmol/L、蛋白质浓度2mg/mL、萃取时间90min、萃取温度20℃、烷醇比4∶1,红豆蛋白质前萃取率为56.85%。在该条件下,采用温度为20℃、pH为6.0、1.1mol/L NaCl水相进行反萃取,反萃取率可达64.96%。

双水相体系萃取分离熊猫豆蛋白质

采用Plackett-Burman(PB)实验、最陡爬坡实验、中心组合设计法对双水相萃取分离熊猫豆蛋白质的条件进行优化。首先,采用Plackett-Burman设计从影响萃取率的7因素中筛选出温度和水相pH两个显著影响因素。在此基础上,通过最陡爬坡实验逼近最大萃取率区域,然后通过中心组合实验对显著因素进行优化。得到最佳萃取条件为:PEG600质量分数为15%、硫酸铵质量分数为20%、氯化钠质量分数为0.05%、蛋白样品溶液加入量4mL,pH7.0,萃取温度为35℃,萃取时间为90min,萃取率可达43.69%,与预测值42.85%接近。说明本优化工艺具有可行性。