生物样本中单胺类递质及其前体氨基酸和主要代谢产物的快速分析法——高效液相色谱-电化学检测法

近年兴起的高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)测定生物样本中单胺类递质,除了具有灵敏、快速、简便等优点外。同时还可以一次性分析单胺类递质及其前体氨基酸和主要代谢产物。我们结合本室条件,用HPLC-ECD法,同时测定生物样本中单胺类递质:去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)。

老年疾病患者HPAA活动及其相关肽NPY水平与T淋巴细胞分裂原反应性

本文观察了4种老年疾病患者的 HPAA 活动及相关肽 NPY 水平与外周血 T 细胞分裂原反应性的关系.结果表明,脑出血、脑梗塞患者 HPAA 活动增强,并与 NPY 水平增加呈伴随关系,HPAA、NPY与受抑的 T 细胞分裂原反应性呈负相关(P<0.01)。糖尿病患者 NPY、CRF、ACTH 含量与健康人比较无明显差异,皮质醇水平升高(P<0.05),后者与受抑的 T 细胞分裂原反应性无明显相关(P>0.05)。而原发性高血压疾病患者 HPAA 及 NPY、T 细胞分裂原反应性与健康者比较均无明显差异(P>0.05).上述资料提示,老年疾患 HPAA 活动及 NPY 水平因病种而异,其中脑血管意外患者的免疫功能变化与 HPAA 活动及 NPY水平有关.

输精管结扎与实验性高血脂对听觉脑干电位及血清过氧化脂质的影响

输精管结扎12月以上日本大耳白兔16只,随机分为输精管结扎基础饲料(V-S)组和输精管结扎胆固醇(V-Ch)组。体重相近的同种雄兔16只,分为对照基础饲料(C-S)和对照胆固醇(C-Ch)组。听觉脑干电位检测结果表明:气导ABR阈值,输精管结扎组(V-S.V-Ch)与各门对照组比较无差异(P<0.05),而高胆固醇饲料组(C-Ch.V-Ch)则显著地高于对照组(P<0.01),并且与TC水平正相关(P<0.01);各组Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波潜伏期无延长,波间期各组比较也无显著差异,(P>0.05)。血清过氧化脂质含量与TC水平正相关(P<0.01)而与血清抗精子抗体滴度无相关(P>0.05)。本实验证明,实验性高血脂使气导ABR阈值及血清过氧化脂质增高,而输精管结扎对其无影响。

人参皂甙对应激免疫抑制小鼠模型中枢神经肽Y和儿茶酚胺类递质的影响

本文观察了人参总甙对截肢应激免疫抑制小鼠模型中枢神经肽Y 和儿茶酚胺类递质的影响。结果表明人参皂甙可以拮抗应激造成的中枢神经肽Y、高香草酸的升高和去甲肾上腺素的下降,同时纠正应激所致的免疫功能抑制。结果提示人参皂甙的这一中枢神经系统作用可能与其抗应激所致免疫抑制的效应有关。

HPLC-ECD法分析中枢单胺类递质及其在免疫应答过程中的动态变化

建立快速、简便反相离子对高效液相色谱—电化学检测分析法,一次同时测定生物样品中单胺类递质(NE.E.DA、5—HT)及其前体氨基酸(Tyr、Trp)和主要代谢产物(HVA、5-HIAA共8种化合物。应用该法检测了SRBC免疫小鼠大脑皮质、间脑、脑干8种单胺类化合物的变化规律。免疫后第3天,皮质DA/HVA、间脑NE含量显著降低(P<0.05);第5天,间脑5-HT和脑干5-HIAA含量明显升高(P<0.05)。支持免疫应答可以影响中枢单胺类递质代谢的推论。

神经肽Y放免分析法的建立

本文在自制了特异性神经肽Y(NPY)抗血清基础上,建立了血浆、脑组织NPY放免分析法。竞争抑制分析证明,与相关神经肽无交叉反应,最小检测范围为150～200 pg/ml,血浆和组织平均回收率为85～90%,说明该法特异性、灵敏性良好。反相高压液相层析表明所测血浆和脑组织NPY—Li的层析特性与标准NPY基本一致。

神经肽 Y 受体放射配体分析法建立

^(125)Ⅰ标记神经肽 r(NPY)做为放射配体,建立了 PY 受体放射配体平衡结合分析法。差速离心制备组织膜粗制品,膜浓度在0.02～0.2mg/ml 范围内与^(125)Ⅰ-NPY 特异结合成正比.平衡结合反应在37℃水浴条件下50分钟达平衡,最适 NpH 范围为7.0～7.4。离心法分离游离^(125)Ⅰ—INY,非特异吸附小于10%.竞争抑制试验证明^(125)Ⅰ—NPY 与膜受体结合特异性良好,非标记 NPY 的 IC50为0.44nmol/L。NPY 膜受体对胰蛋白酶和巯基抑制剂十分敏感。饱和实验及 Scatchard 作图分析表明小鼠大脑皮质 NPY 受体 Bmax=0.40～0.50pmol/mg 蛋白、kd=0.30～0.

单克隆抗体亲和层析柱在纯化羊垂体催乳素中的应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术制备出5株抗羊垂体催乳素单克隆抗体。以羟磷灰石柱层析纯化一种单克隆抗体2D2(属IgG_(2~2))。与环氧氯丙烷活化的Sepharose 4B偶联制备免疫吸附层析柱。以此免疫吸附柱从羊垂体粗提液中简单快速地纯化了催乳素。

环氧氯丙烷偶联单克隆抗体——Sepharose 4B亲和层析柱的制备与应用

亲和层析以其特异性高、迅速、操作简便、可在温和条件下进行等优点,已成为不可缺少的一项分子生物学技术。多年来,经典的方法是用CNBr进行活化和偶联的,尽管这是已被人们接受的成熟方法,但也有其不足之处,如毒性大、操作条件要求严格、不稳定等。近年来,科学工作者开始探索,

神经肽Y与儿茶酚胺类递质

神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)是近年发现的一种新的调节肽,已经证明,它与儿茶酚胺类(CAS)递质有着十分密切的关系,分布上共存,功能上相互调节,提供了肽类递质与经典小分子递质间相互作用的典型例证。

猪脑神经肽Y的提取纯化及分子特性

以猪脑为原料,分段盐析提取后,经过Sephadex-G75凝胶过滤层析,CM-cellulose离子交换层析和反相HPLC,得到反相HPLC单一峰型的神经肽Y。圆二色吸收光谱分析表明:神经肽Y分子中α-螺旋结构的稳定性高度依赖于环境的pH条件。

hGDF-15基因的克隆及原核表达

【目的】克隆人生长分化因子-15(Human growth differentiation factor-15,hGDF-15)成熟肽基因,构建其原核表达载体,并进行诱导表达,为hGDF-15药理活性和生物学功能研究奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆人hGDF-15成熟肽基因,将其连接到pET-28a载体上构建pET-28a-hGDF-15原核表达载体,并将此载体转入Rosetta(DE3)大肠杆菌感受态细胞,获得重组大肠杆菌,对目的蛋白分别采用不同温度(16,25,37℃)、IPTG浓度(0.10,0.25,0.50,0.75,1.00mmol/L)和时间(12,24,36,48h)进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测,利用Gel Quant Express软件对菌体破碎离心的上清组分和沉淀组分中的蛋白含量进行测定,通过正交试验,分析上清组分和沉淀组分的最适诱导表达条件。【结果】成功获得hGDF-15成熟肽基因,其长度为339bp;构建了pET-28a-hGDF-15原核表达载体,并诱导表达了hGDF-15蛋白;优化的上清组分最适诱导条件为IPTG浓度0.25mmol/L、温度16℃、时间24h,沉淀组分最适诱导条件为温度37℃、时间36h、IPTG浓度1.00mmol/L。【结论】成功克隆了hGDF-15基因,在大肠杆菌中诱导表达出其编码蛋白,并优化出了最适诱导表达条件。

从应激谈心、脑、身之间的辩证关系

科学知识量猛增、社会信息量加大,高效率、快节奏的现代社会生产和生活要求人们与之同步,这些都加重了人们心理紧张程度。一旦人与自然、社会业已形成的稳态关系失调或遭到破坏、各种自然、社会、心理方面因素就将成为应激源,应激一发生就会引起心、脑、身发生一系列改变,本文就应激时心、脑、身之间的关系问题谈几点粗浅的认识,以就教于同道。

下丘脑神经肽Y及其受体在免疫应答过程中的动态变化

将羊红细胞注入小鼠尾静脉引起初次免疫应答,此时下丘脑神经肽Y含量明显升高,神经肽Y受体表达显著增加(p<0.05),同时去甲肾上腺素降低,高香草酸明显升高(p<0.05)。腹腔注入ConA刺激的脾细胞和U_(937)细胞上清得到类似结果。该结果提示神经肽Y可能参与免疫应答过程中免疫活性分子影响中枢神经系统活动的介导作用。