尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究 Ⅱ.酶学与血液学活性的研究

对四个凝血酶样成分(TLP)的酶学性质的比较研究表明,它们都具有凝结(血)活性和精氨酸酯酶活性。其凝结活力TLP_4>TLP_3>TLP_1>TLP_2,Ca^(++)有激活作用,但不被肝素、EDTA所抑制;精氨酸酯酶活力以TLP_1、TLP_2较高,Ca^(++)、EDTA无明显的激活或抑制作用;TLP_1对热比较稳定,TLP_4对于酸碱变化比较稳定。经动物体内试验表明,TLP_1、TLP_2具有较强的去纤抗凝作用,TLP_3、TLP_4不显示抗凝作用,而显示出较强的促凝血作用。结果表明,尖吻蝮蛇毒与美洲矛头蝮蛇毒一样,同时含有去纤酶(Defibrase)和蛇毒凝血酶(Hemocoagulase)。这一结果对该蛇毒的研究与应用是很有意义的。

尖吻蝮(Agkistrodon acutus) 蛇毒凝血酶样成分的研究Ⅰ.分离纯化及其理化特性的测定

尖吻蝮蛇毒经DEAE—sephadex A-50柱层析分离得15个蛋白组分,将其具有凝血酶样活性组分再经DEAE—celluiose DE_(52),QAE—sephadex A-25纯化,再以Sephadex G-25脱盐得精制的凝血酶样活性成份。经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为四条迁移率不同的单一蛋白带;再经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测得四种凝血酶样酶(TLE)的分子量,TLE;为33500,TLE;为68000,TLE;为19500,TLE;为30000;经等电聚焦电泳测得等电点(PL)分别为4.1,4.8,3.9,3.4,经氨基酸组成分析,四种TLE均由相同的17种氨基酸组成,但其组成氨基酸的数量则有一定的差异。结果表明,从尖蝮蛇毒中分离纯化的这四种蛋白成份,它们都具凝血(或凝结)活性,但在层析,电泳、组成氨基酸的含量等方面则存在显著的差异,因而它们是四种不同的TLE。这是本实验室首先发现并分离得到的,还未见有同时从尖蝮蛇毒中分离、纯化得到四个不同的凝血酶样酶的报道。

尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒的分离及其生物活性的研究

用二乙氨乙基纤维素柱层析法将尖吻蝮蛇毒分成15个组分,并对粗蛇毒及各分离组分进行了各种生物活力的测定,结果表明:1.粗蛇毒中存在有精氨酸酯酶,蛋白水解酶、碱性磷酸酶,磷酸二酯酶,5′—磷酸二酯酶,5′—核苷酸酶,ADP酶、ATP酶,L—氨基酸氧化酶及磷酸酯酶A等10种酶活力;但不存在胆碱酯酶及核糖核酸酶的活力;2.蛋白水解酶,5′—核苷酸酶及ADP酶普遍存在于粗蛇毒经分离后的各组分中;3.精氨酸酯酶存在于组分6—13中,以第8组分的活性最高;4.第1及5—13组分显示有较高的凝血活性,第1—2组分及9—15组分显示有出血毒,第12(小鼠死亡率2/5)及第13组分(小鼠死亡率3/5)显示有较高的毒性;第1—2,9—15组分显示有纤溶活性。