五味子醇甲对脑缺血再灌注损伤大鼠室管膜下区神经干细胞增殖分化的影响

目的观察五味子醇甲对缺血性脑卒中后神经干细胞增殖分化的影响,探讨五味子醇甲促进脑缺血再灌注损伤大鼠室管膜下区(SVZ)神经干细胞增殖分化的潜在机制。方法随机将90只正常喂养的SD雄性大鼠分为5组,即假手术组、大脑中动脉阻塞(MCAO)模型组(MCAO组)及五味子醇甲高、中、低剂量组,每组18只。参考Zea Longa法制作MCAO模型,缺血90 min时给予再灌注,待用药组SD大鼠清醒后立即给予左侧脑室不同剂量的五味子醇甲。后期通过神经行为学评分、2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色、蛋白免疫印迹法(Western Blot)、免疫荧光法评价神经功能缺损情况、梗死面积、室管膜下区神经干细胞的增殖和分化情况。免疫荧光检测的所有组别SD大鼠单独腹腔再给予Brdu以标记神经细胞。结果通过观察脑梗死面积的图像发现,与MCAO组比较,五味子醇甲治疗后SD大鼠脑梗死面积缩小明显,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),随着药物浓度的增加,SD大鼠的脑梗死面积逐渐减小。与假手术组比较,MCAO组、五味子醇甲低剂量组、五味子醇甲中剂量组、五味子醇甲高剂量组神经干细胞增殖标记的Nestin蛋白、Hu蛋白表达增高;与MCAO组大鼠比较,五味子醇甲高剂量组Nestin蛋白、Hu蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。五味子醇甲高剂量组Brdu标记的阳性神经干细胞比例明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),但五味子醇甲低剂量组、五味子醇甲中剂量组Brdu标记的阳性神经干细胞比例虽有一定增高,但差异无统计学意义(P>0.05)。与MCAO组比较,五味子醇甲高、中、低剂量治疗后SD大鼠Hu蛋白标记的阳性神经元数量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),且高剂量五味子醇甲干预后SD大鼠Hu蛋白标记的阳性神经元数量升高最明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论五味子醇甲可促进MCAO大鼠室管膜下区神经干细胞增殖分化,且以五味子醇甲高剂量组的促进作用最明显。

五味子醇甲通过调控自噬流减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的:探究五味子醇甲(Sch A)减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及其潜在机制。方法:成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组[大脑中动脉闭塞(MCAO)组]及Sch A低、中、高剂量治疗组,每组6只。制备大鼠左侧MCAO模型,90 min后再灌注,治疗组Sch A的剂量分别为40、80和160μg·kg^(−1)·d^(−1)。造模7 d后进行神经功能损伤方面的评价(mNSS评分),并用TTC染色检测MCAO大鼠脑梗死体积。通过Western blot检测MCAO大鼠脑缺血半影区神经元自噬相关蛋白P62、LAMP1、cathepsin B和ubiquitin的表达水平,综合分析自噬流情况;使用免疫荧光双标法检测Sch A处理后MCAO大鼠脑缺血半影区神经元自噬水平诱导情况。结果:相比于MCAO组,Sch A处理后大鼠mNSS评分和脑梗死体积显著降低(P<0.05),并有剂量依赖性,以Sch A高剂量组差异显著。Western blot结果显示,与sham组比较,MCAO组大鼠cathepsin B蛋白表达水平下降,P62及ubiquitin的表达水平升高(P<0.05);与MCAO组比较,Sch A处理显著升高cathepsin B表达水平的同时降低了P62及ubiquitin的表达水平,以Sch A高剂量组差异显著(P<0.05);而LAMP1在各组间表达仅有下调或上调趋势,但无显著差异(P>0.05)。免疫荧光结果显示,与MCAO组比较,Sch A处理提高了MCAO大鼠脑缺血半影区LC3-Ⅱ表达阳性的神经元比例,以Sch A高剂量组升高显著(P<0.01)。结论:Sch A可逆转MCAO大鼠脑缺血半影区cathepsin B、P62及ubiquitin表达水平而发挥抗脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与神经元自噬有关。

五味子醇甲诱导缺血半影区神经元自噬提高脑卒中后神经保护

五味子醇甲(Schisandra A,Sch A)是五味子中具有生物活性的木脂素化合物,其神经保护作用已在多种神经系统疾病动物模型中得到验证。然而,五味子醇甲是否能通过影响大鼠脑缺血半影区神经元自噬活性对脑缺血再灌注大鼠模型产生神经保护作用,尚缺乏系统研究。为探究Sch A对大鼠脑卒中后神经损伤及缺血半影区神经元自噬活性的影响,本研究将90只SD雄性大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型组(MCAO)、Sch A低剂量组(40μg/kg)、Sch A中剂量组(80μg/kg)、Sch A高剂量组(160μg/kg),每组18只。线栓法制备大鼠大脑中动脉梗塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,脑缺血持续90 min后进行再灌注,立即侧脑室给药,1/d,连续给药7 d。各组分别取6只大鼠进行神经功能评分后,取脑进行TTC染色检测脑梗死体积。另有6只大鼠取缺血半影区脑组织,通过Western印迹检测自噬相关蛋白质Beclin1、LC3-Ⅱ的表达水平。剩余6只大鼠脑组织用于免疫荧光双标,对Sch A改变的自噬活性进行细胞表达定位。研究结果显示,MCAO组大鼠脑梗死体积及神经功能损伤评分均显著高于Sham组(P<0.05),且Beclin1及LC3-Ⅱ的表达显著增加(P<0.05)。各Sch A治疗组大鼠脑梗死体积较未给药组显著减少(P<0.05),神经功能损伤得到明显改善(P<0.05)。同时,Sch A给药组Beclin1及LC3蛋白质表达水平明显升高(P<0.05),且免疫荧光双标显示该自噬活性改变主要呈现于神经元。以上结果表明,Sch A可显著减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,该神经保护作用与其提高缺血半影区神经元自噬活性密切相关。

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